食物及饲料中水溶性维生素K3 （甲萘酿）的测定方法1. 原理在氨存在的条件下维生素K3 （甲萘酿，VK3）与氰乙酸乙酯形成蓝 色物质，在575nm下的吸光度值与维生素K3的的浓度成正比，用分 光光度计测定有色物质的吸光度值，定量分析样品中维生素K3的含 量本法检出限为0.05mg2. 适用范围本方法适用于强化食物及饲料中水溶性维生素K3的测定3. 仪器分光光度计4. 试剂本实验所用试剂均为分析级，实验用水为蒸馏水1） 0.1mol/L 1/212溶液：称取25gKI溶解于20mL水中，加入9.8g 碘，混匀溶解，加水至750mL贮存于棕色瓶中，避光保存25h2） 0.1mol/L Na2S2O3:将水煮沸后冷却称取25g Na2S2O3・5H2O 溶解于500mL含0.1g Na2S2O3的冷却水中，并用冷却的水稀释而 1000mL3） 淀粉指示剂：称取2g可溶性淀粉，加于10mL水中，摇匀然 后缓慢加至200mL沸水中，煮2min4） 氨水+异丙醇（1+1）溶液：取异丙醇与等体积的浓氨水混合5） 氰乙酸乙酯（30g/L）：取3g氰乙酸乙酯溶解于100mL异丙醇 中6)维生素K3标准溶液(0.1mg/mL)：准确称取50mg维生素K3 标准品，转至500mL棕色容量瓶中，用异丙醇溶解并定容至刻度。
5. 操作步骤所有操作均需避光进行(1) 提取：准确称取约15g已混匀的样品，准确加入100mL水，搅 拌10min，保证维生素K3充分溶解与混匀过滤，如滤液浑浊，则 反复过滤至澄清2) 氧化：吸取40mL滤液至100mL容量瓶中，加1〜2滴淀粉指 示剂，用0.1mol/L碘溶液滴定，至出现持续的蓝色向溶液中滴入1 滴0.1mol/L Na2S2O3消除用水定容至刻度［注意：碘溶液的作用是 作为氧化剂氧化样品中的还原性物质，多余的碘溶液可使淀粉变成蓝 色, Na2S2O3则是去除多余的氧化剂，消除蓝色，以避免有色物质 影响测定］3) 标准管和样品管的制备：分别取2套20mL比色管，分别按下 表顺序加入维生素K3标准溶液、样品提取液及试剂，制备标准管和 样品管用水定容至20mL，摇匀，放置20min［注：样品管和标准管中水定容的体积与显色强度、显色的稳定时间 密切相关，如果定容体积过少，则色度较弱，且稳定时间短如按本 方法的操作进行，显色反应至少可以稳定2h］标准管和样品管的制备单位：mL试剂 标准管 样品管空01234白测定管管维生素k3标0.00.51.1.2.0准溶液0510.10样品提取液0.01.0.2.异丙醇3.01.50050.03.001.1.1.氰乙酸乙酯1.0001.00氨水一异丙1.01.01.1.1.01.01.醇000(4)比色测定：用分光光度计于575nm波长下，以标准0管作空白 管，调节仪器零点，测定各管吸光度值。
6.计算以标准维生素K3含量作横坐标，吸光度值作纵坐标，绘制标准曲线, 并计算回归方程用样品测定管与空白管吸光度值的差值在标准曲线 上查出样品管的维生素K3含量，然后计算出样品中维生素K3的含 量式中X——样品中维生素K3的含量，mg/100g；ma-b——样品测定管与空白管吸光度值的差值在标准曲线上对应的维生素K3含量，mg；m 样品质量，g；25——样品稀释倍数7.注意事项结果的允许差(1 )同一实验室平行测定或重复测定结果的相对偏差绝对值＜ 10%2)天然食物中不含有维生素K3,只有部分强化食物可能用维生 素K3作为强化剂有文献报道人工合成维生素K3可能有一定的毒副 作用，尽管目前还没有有力的证据支持这一论点，但是现在市场上应 用维生素K3作为强化剂的产品较少见饲料常用维生素K3作为维生 素K的来源，所以维生素K3的测定对饲料检测和质量控制更有意义。