毛细管电泳和毛细管电色谱实验报告一. 实验目的1. 了解毛细管电泳实验的原理、分离模式及应用2. 掌握毛细管电泳仪的操作方法3. 学会处理实验数据，分析实验结果二. 实验原理毛细管电泳又称高效毛细管电泳(High Performance Capillary Electrophoresis, HPCE)是一种仪器分析方法通过施加10-40kV的 高电压于充有缓冲液的极细毛细管，对液体中离子或荷电粒子进行高 效、快速的分离现在，HPCE已广泛应用于氨基酸、蛋白质、多肽、 低聚核苷酸、DNA等生物分子分离分析，药物分析，临床分析，无 机离子分析，有机分子分析，糖和低聚糖分析及高聚物和粒子的分离 分析人类基因组工程中DNA的分离是用毛细管电泳仪进行的毛细管中的带电粒子在电场的作用下，一方面发生定向移动的电 泳迁移，另一方面，由于电泳过程伴随电渗现象，粒子的运动速度还 明显受到溶液电渗流速度的影响粒子的实际流速 V是泳流速度 Vep和渗流速度Veo的矢量和即:V = Vep + Veo在典型的毛细管电泳分离中，溶质的分离基于溶质间电泳速率的 差异电渗流的速率绝对值一般大于粒子的电泳速率，并有效地成为 毛细管电泳的驱动力。
溶质从毛细管的正极端进样，带正电的粒子最 先流出，中性粒子次之，带负电的粒子在中性粒子之后流出溶质依 次通过检测器，得到与色谱图极为相似的电泳分离图谱三•实验仪器与试剂仪器：毛细管电泳仪试剂：缓冲液：20mmol/l硼砂溶液，lmol/l NaOH溶液，二次去 离子水，未知样（苯甲酸溶液，苯酚溶液）四. 实验步骤1. 仪器预热和毛细管冲洗打开仪器和配套的工作站工作温度设为30°C，不加电压，冲 洗毛细管，顺序依次是：lmol/l NaOH溶液2min,二次去离子水2min， 缓冲液4min2. 数据采集打开色谱工作站软件把电压上升到20Kv，立即点击主界面的 绿色图标一谱图采集，开始谱图采集在进样之前把屏幕调到色谱工 作站的主界面点击主界面的红色图标一手动停止，可以停止谱图采 集然后将文件起名并保存在指定的文件夹3. 本实验进样条件为0.5psi压力，5s时间4. 电泳运行条件为20KV，35min,在启动高压的同时，色谱工作 站的记录系统也触发开始5. 电泳结束后，在计算机色谱工作站软件内保存好色谱图6. 实验结束对仪器进行冲洗，lmol/l NaOH溶液2min,二次去离 子水加in，缓冲液4min。
五. 数据处理缓冲溶液：20mM硼砂缓冲溶液样本：10 mM苯酚和苯甲酸检测波长为190-600nm定性分析打开苯甲酸标准样品、苯酚样品、混合物样品这三个谱图点击 窗口中的水平平铺通过谱图比较，能够确定哪一个峰是苯甲酸的峰苯酚201510P/ACE MDQ-197 nmcz201510 Am1012Mi nutes从图中可以看出苯酚的保留时间为6min苯甲酸P/ACE MDQ-197 nmcz200200150150m 100Im50502 4 6 8Mi nutes从图中可以看出苯甲酸的保留时间为9min苯酚和苯甲酸P/ACE MDQ-197 nmcz•4040 -30302020 m10106 8Mi nutes从图中可以看出混合样品中两组份的保留时间分别为6min,llmin1012结合单组份谱图可知，此混合物为苯酚和苯甲酸的混合物六.注意事项1.冲洗毛细管时禁止在毛细管上加压，不允许更改给定的电压和进样时间2.Na0H,二次水，缓冲液，样品等之间的切换是自动的，在实验过程中要时刻注意是否放在正确位置3.冲洗毛细管对于实验结果的准确性至关重要，务必认真完成每一次冲洗，不允许缩短冲洗时间或不冲洗。
4.塑料样品管里面容易产生气泡，轻敲管壁排除气泡以后方可放入样品盘。