食品中农药残留检测实验方法步骤( 精)精品文档实验一 粮食、水果和蔬菜中有机磷农药测定的气相色谱法 Experiment 1Determination of Organophosphorus Pesticide Residues in Foodstuff, Fruits andVegetables by Gas Chromatographic Method1. 方法原理样品中有机磷农药残留在加入无水硫酸钠后，用有乙酸乙酯提取、过滤、浓缩、定容，用气相色谱氮磷检测器 (NPD 或火焰光度检测器 (FPD 检测，根据色谱峰的保留时间定性，外标法定量2. 方法适用范围本法规定了粮食 (大米、小麦、玉米 、水果 (苹果、梨、桃等 、蔬莱 (黄瓜、大白菜、西红柿等 中速灭磷 (mevinphos、甲拌磷 (phorate、二嗪磷 (diazinon、异稻瘟净 (iprobenfos、甲基对硫磷 (parathionmethyl、杀螟硫磷 (fenitrothion 、溴硫磷(bromophos 、水胺硫磷 (isocarbophos、稻丰散 (phenthoate、杀扑磷 (methidathion 等多组分残留量的测定。
3. 仪器与试剂3.1 试剂无水硫酸钠：分析纯， 650℃灼烧 4h ，冷却后贮于密闭容器中备有 丙酮：分析纯，重蒸馏乙酸乙酯：分析纯，重蒸馏所需有机磷农药标准溶液：纯度 ≥98.0%3.2 仪器与设备气相色谱仪：配 FPD 或 NPD高速组织捣碎机收集于网络，如有侵权请联系管理员删除精品文档微量注射器： 5μL， 10μL梨形瓶： 200mL具塞刻度试管： 10mL 鸡心瓶： 100mL 4. 样品处理步骤4.1 提取和净化称取试样 25.0g 置于组织捣碎机中，加入 25.0g 无水硫酸钠和 50.0mL 乙酸乙酯，高速匀浆 3min ，提取液经铺有无水硫酸钠的漏斗过滤，残渣用 10mL 乙酸乙酯洗涤 2 次，合并滤液于梨形瓶中，用旋转蒸发器在 45℃水浴减压浓缩后定容至5.0mL ，采用 GC 测定在分流 /不分流进样口的玻璃衬管中填入 0.5cm 高的石英棉，进样 70 次后，更换石英棉4.2 测定4.2.1 色谱条件(1 色谱柱： BP-10 石英毛细管柱 (25m× 0.22mm× 0.35 μm(2 色谱柱温度： 60(2min → 10/min → 200(0.2min → 2/min →℃℃℃℃℃250(3 进样口温度： 270℃(4 检测器温度： 270℃(5 载气和尾吹气： N2≥ 99.99%，0.5mL/min ，尾吹气： 35mL/min(6 氢气 (FPD：40mL/min ；空气 (FPD： 120mL/min(7 进样方式：不分流进样收集于网络，如有侵权请联系管理员删除精品文档4.2.2 色谱测定根据样品液中有机磷含量情况，选择峰高相近的标准工作液。
标准工作液和样液中有机磷农药的响应值均应在仪器的检测线范围内对标准工作液和样液等体积穿插进样测定在上述条件下对硫磷保留时间约为 28.54min 4.2.3 空白试验除不加试样外，按上述测定步骤进行4.2.4 结果计算mh A V c h A X s s s ××= ×( ( 式中： X ：试样中农药残留量， mg/kgA(h ：被测农药的峰面积 (峰高 As(h s ：标准工作液中被测农药峰面积 (峰高c s ：标准工作液中被测农药浓度， μ g/mLV ：样液最终定容体积， mLm ：样品量， g4.2.5 检测限和回收率对硫磷检测限： 0.01mg/kg；对硫磷回收率：浓度在 0.01～1.00mg/kg 范围内，回收率为 89.0%～94.3%实验二 畜产品中氯霉素残留的 ELISA 检测Experiment 2 Determination of Chloramphenicol Residue in Animal收集于网络，如有侵权请联系管理员删除精品文档By-Products by ELISA1. 方法原理采用直接竞争 ELISA 方法，在酶标板微孔条上预先包被氯霉素抗体，样品中残留的氯霉素和酶标氯霉素抗原竞争微孔条上预包被的抗体，经 3,3',5,5'-四甲基联苯胺 (3,3',5,5'-Tetramethylbenzidine,TMB 底物显色，样品吸光值与其残留物氯霉素的含量成负相关，与标准曲线比较再乘以其对应的稀释倍数，即可计算样品中氯霉素的含量。
2. 方法适用范围可定性、定量检测动物组织 (含水产品 、牛奶、蜂蜜、饲料、鸡蛋等样品中氯霉素的残留量3. 仪器与试剂3.1 试剂乙酸乙酯、正己烷、氯化钠、去离子水，以上试剂均为分析纯氯霉素检测试剂盒 (商品3.2 仪器与设备酶标仪、离心机、水浴锅、天平、旋转蒸发仪、微量移液器等3.3 试剂配制按试剂盒说明配制4. 样品处理步骤4.1 牛奶样品处理(1 室温 4000rpm/min，离心 15min ，去上层脂肪 (脱脂奶可省此步 ;收集于网络，如有侵权请联系管理员删除精品文档(2 取 4.0mL 除去脂肪的牛奶于 50.0mL 离心管中，加入 8.0mL 乙酸乙酯，振荡混匀 1min ； 4000rpm/min，离心 15min(3 移取上层乙酸乙酯 4.0mL 至另一玻璃试管中，于 60℃氮气流下吹干；(4 向玻璃试管中加入 2.0mL 正己烷，振荡混匀；(5 加入 2.0mL 稀释后的样品稀释液强烈振荡 1min ；室温 4000rpm/min，离心5min ；(6 取下层液 70μ L检测4.2 组织样品处理(1 称取 2.0 ±0.05g 去脂肪并匀浆样品于 50.0mL 离心管中，加入 4%NaCl 溶液4.0mL ，振荡均匀后，加入 4.0mL 乙酸乙酯振荡 5min ；(2 室温 4000rpm/min，离心 15min(3 移取上层乙酸乙酯 1.0mL 至另一玻璃试管中，于 60℃氮气流下吹干；(4 向玻璃试管中加入 1.0mL 正己烷，振荡混匀；(5 加入 1.0mL 稀释后的样品稀释液强烈振荡 1min ；室温 4000rpm/min，离心5min ；(6 离心后，如下层液出现乳化现象，试管放入 80℃水浴 5min ，再执行 (2 操作；(7 去上层正己烷，取下层液 70μ L检测。
4.3 蜂蜜收集于网络，如有侵权请联系管理员删除精品文档(1 称取 2.0 ±0.05g 至离心管中，加入 4.0mL 去离子水振荡溶解；加入 4.0mL 乙酸乙酯振荡 5min ；(2 室温 4000rpm/min，离心 15min(3 移取上层乙酸乙酯 1.0mL 至另一玻璃试管中，于 60℃氮气流下吹干；(4 加入 0.5mL 稀释后的样品稀释液强烈振荡混匀；(5 取下 70μ L检测5. 检测5.1 试剂盒使用前准备(1 所有试剂及酶标板条温度回升至室温 (20～25℃(2 使用后试剂立即放回 2～8℃(3 正确洗板操作是 ELISA 测定程序中的要点；(4 所有恒温孵育过程，避免光照，用盖板膜封住微孔板5.2 操作步骤(1 所需试剂冷藏取出，室温平衡 30min 以上；所有试剂用前混匀2 洗涤工作液使用前也需回温3 将样品 /标准品对应微孔按序编号，并记录标准孔和样品孔所在位置4 加标准品 /样品：加标准品 /样品 70.0 μ L至对应孔，再加入氯霉素酶标物30μ L/孔，轻轻振荡混匀，盖板膜盖板后置于 25℃ 避光反应 30min 收集于网络，如有侵权请联系管理员删除精品文档(5 洗板：小心揭去盖板膜，将孔内溶液甩干，用洗涤工作液 300μ L/孔，充分洗涤 5 次，每次间隔 30s ，用吸水纸拍干。
6 显色：加入底物 A 液 50μ L/孔，再加底物液 B 液 50μ L/孔，轻轻振荡混匀，盖板膜盖板后置于 25℃ 避光反应 15～20min 7 测定：加入终止液 50μ L/孔，轻轻振荡混匀，设定酶标仪于 450nm 处测定其吸光值 (建议 5min 内完成 5.3 结果判定5.3.1 估算法用样品的平均吸光值与标准值比较即可得出其浓度范围例如：样品 1 吸光值为 0.569，样品 2 吸光值为 1.725，标准液吸光值依次为：2.523(0 μ g/L、2.217(0.05 μ、g/L1.566(0.15 μ g/L、0.842(0.45 μ、g/L0.387(1.35 μ、g/L0.145(4.05 μg/L，则样品 1 浓度范围为 0.45～1.35 μ g/L，样品 2 浓度范围为 0.05～ 0.15 μg/L5.3.2 定量分析(1 百分吸光率计算：标准品或样品的百分吸光率等于标准品或样品的百分吸光度值的平均值 (双孔 除以第一个标准液 (0 标准 的吸光度值，再乘以 100%100(%0×=B B 百分吸光度值 B :标准品或样品的平均吸光度值B 0: 0 号标准品的平均吸光度值(2 标准曲线绘制和计算收集于网络，如有侵权请联系管理员删除精品。