《徒手切片制作方法.doc》由会员分享，可在线阅读，更多相关《徒手切片制作方法.doc（6页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、一、目的要求 徒手切片法是观察植物内部结构的简易制片法。所需的仪器用具简单，药品经济，操作方便，费时较短，且易于保持材料的天然色泽和活体结构，必要时，也可经过脱水、染色制成永久制片而保存。但是徒手制片对于体积过小，质地太软或太硬的材料，则难于处理，同时，也不能制成连续切片，这些均为不足之处。 二、材料、用品 1、用品 显微镜、剃头刀（或刀片）、毛笔、镊子、培养皿、染色皿（或小酒杯）、吸管、载玻片、盖玻片、吸水纸。1%番红水溶液（或50%酒精溶液），0.5%固绿95%酒精溶液，70%、85%、95%酒精，纯酒精、二甲苯和中性树胶或加拿大树胶等。 三、方法与步骤 1、选材 所用材料不宜太软或太硬。
2、一般植物幼嫩的根茎或一些植物的叶片、叶柄等均可使用此法。质地较薄的材料，如叶片，可沿主脉两侧切成宽约56毫米，长11.5厘米的小块，夹在夹持物(如胡萝卜根或马铃薯块茎等)中进行切片。使用夹持物时，先将夹持物的中央切成两半，然后将切好的材料夹入，合拢夹持物进行切片，也可将叶片卷成筒状再切。 2、切片 （1） 盛清洁的水于培养皿中。然后用左手的拇指及食指、中指夹住材料，拇指的位置要低于食指，并使材料的上端伸出指外23毫米，材料的切面必须保持水平方向。（2） 右手执刀(剃头刀或刀片)，平放在左手食指之上，刀口向内，自左前方向右后方滑行切割，要用臂力，不要用腕力，不可向内平切。 (3) 拉切的速度宜快
3、，一次切下，不要中途停顿或似拉锯式，以免损伤材料或切得不平。(4) 切片过程中，如发现由于用力不均而使材料表面倾斜时，必须立即削平。(5) 刀片或剃刀必须锋利，材料及切片均需经常沾水，以保持材料湿润、润滑。 (6) 切下的薄片可随时涮入培养皿的水中，以备观察;等切到相当数量后;再选择其中最薄的透明度最大的做成临时玻片观察。如想短期保存，可用水或甘油封藏。如希望长期保存所切的材料，则还要经过以下几个步骤做成永久玻片标本。 3、固定 挑选出符合要求的切片，用毛笔移入盛有70%酒精的染色皿中进行固定。固定时间为16分钟或更长时间。 4、染色、脱水、透明 （1）用吸水管吸去70%酒精，染以1%番红（5
4、0%酒精溶液）约30分钟。 （2）再用吸管吸去番红，换用70%85%95%酒精进行冲洗、脱水，每级酒精35分钟。 （3）复染色。吸去酒精，用0.5%固绿(95%酒精溶液)进行复染色，时间为0.5分钟。 （4）冲洗、脱水。用95%酒精冲洗1次，时间10秒。后移入纯酒精中脱水23次，每次35分钟。 （5）透明。吸去纯酒精，放入1/2二甲苯1/2纯酒精溶液中脱水和透明1次，时间5分钟。 （6）吸去脱水透明液，换以纯二甲苯透明2次，时间5分钟。 5、封片、贴标签 将已透明材料用镊子或解剖针轻挑于清洁的载玻片上，滴上中性树胶，盖上盖玻片进行干燥。 在已封好的切片左边贴上标签，注明材料名称、制作日期和制作
5、者姓名等项，以便查考。较好的切片，其木质化的细胞壁和细胞核可染成红色，细胞质和纤维素的壁则常被染成绿色，红绿相衬，有利于观察、分辨植物体的内部结构。 现将徒手切片制片的简要步骤归纳如下: 选材切片固定(70%酒精)1%番红(50%酒精溶液)染色70%酒精冲洗脱水（85%酒精、95%酒精）0.5%固绿(95%酒精溶液)复染色冲洗(95%酒精1次)进一步脱水(纯酒精23次)透明(1/2纯酒精十1/2二甲苯及纯二甲苯各二次)封片(中性树胶)贴标签。 附：药品的简单配方 （1）1%番红：于蒸馏水或50%酒精100毫升中溶入番红粉末l克，过滤后使用。 （2）0.5%固绿：95%酒精100毫升中加入固绿粉
6、末0.5克。 徒手切片方法的改进徒手切片技术运用在植物学实验教学中的历史较为悠久, 在石蜡切片之前, 基本上使用徒手切片。它的优点在于可以观察新鲜材料组织和细胞的天然色彩, 看到活体细胞结构状态, 所以徒手切片运用在植物学实验教学中比较普遍。为了克服传统徒手切片技术中的不足, 我们进行了改进, 改为皮套加刀片。这种切片方法切片速度快, 软硬质材料都可以切, 不需要任何夹物, 既经济适用, 又简单易行。1 材料用品双面刀片1 个,直径11.5 cm 的乳胶管, 毛笔、培养皿、载玻片、盖玻片、吸水纸, 质量分数1%的中性红染液或红墨水,新鲜的植物根、茎、叶、花药和子房等。2 切法将直径11.5 c
7、m 的乳胶管剪成3.5 cm 长的一段, 用剪子从中间剖开扣在右手的大拇指上, 注意皮套一定要高于拇指, 把要切的植物材料, 紧贴在皮套的外侧。如果是叶可以把它卷紧, 所切的材料不可过长, 大约22.5 cm 即可。此时用食指与中指和拇指一起把材料捏住, 幼嫩的材料捏时不可用力过猛, 以免损坏组织细胞。右手的拇指和食指捏住双面刀片的一侧, 手腕端平, 把刀片的前端与要切的材料保持垂直相接状态, 先切平材料, 然后用腕力向内连续切片, 刀片只要搭住材料就可以垂直切片。另外还可以用同样的方法将双面刀片的先端与材料搭住、垂直、从右向左推切, 如此连续切下去, 然后用毛笔将切得薄而透明的材料刷入培养皿
8、的水中,避免干燥。3 染色、封片把载玻片和盖玻片用纱布擦拭干净, 放在实验台上, 加上1 滴中性红染液或红墨水, 用毛笔在培养皿中选择薄而透明切片沾到染色液上, 用解剖针轻轻拨入染色液中, 大约30 s 后, 吸去染色液, 加1 滴清水封片。为了防止气泡的产生, 用左手拇指与食指拿住盖玻片的两侧, 使盖玻片的基部与滴液先接触, 右手握解剖针挑着盖玻片从左向右徐徐放下盖玻片, 使气体从一侧排出, 如果有多余的水溢出, 可用吸水纸吸干,再进行下一步的镜下观察。4 镜检镜下观察时, 对好光源, 让视野光线均匀一致, 放上临时切片, 从低到高进行观察。一个好的皮套切片,镜下观察有4 点标准: 材料完整, 薄而透明; 镜下结构清晰; 无气泡; 封藏剂合适。通过染色后的材料, 凡是死细胞均被染成红色, 而生活细胞仍然保持活体的自然色彩。
