第一天1、配置LB培养基:酵母粉15g、胰蛋白胨30g、氯化钠30g,定容至3000ml调节PH至7.4（2MNaOH）,高压蒸汽灭菌20分钟，37°C保存分装成15瓶（每瓶200ml）2、接种（超净台要提前杀菌通风）取4瓶上述培养基，每瓶加200plAMP（1:1000）、60pl菌液37°C过夜第二天1、扩大培养（超净台）4瓶扩至16瓶，每瓶培养基加200plAMP，摇床培养1小时左右2、诱导（超净台）加40plIPTG,加完后去除封口的除牛皮纸，扎口较松25C摇床培养4小时3、离心获取菌体4C，8000rpm离心25分钟注意配平4、超声波破碎菌体离心后去上清，向沉淀加入（600mlPB裂解液、300pl溶菌酶、3mlPMSF）将菌液转入2个烧杯中，冰浴超声波破菌，400W，75次，每次6秒，间隔2秒离心收集上清液600mlPB裂解液：20mM/LPB，10mM/LEDTA，5%甘油，1mM/LDTT，调节PH至7.4超声波破碎：首先用去离子水清洗探头，再将盛有菌液的小烧杯置于有冰水混合物的大烧杯中，冰水界面略高于菌液面即可探头浸没于菌液中，不可伸入过长注意破菌过程中由于冰的融化导致的液面变化。
5、抽滤（双层滤纸）洗胶（GST）将上述上清液抽滤，滤液与GST胶混合，磁力搅拌过夜第三天1、抽滤蛋白-胶混合液，滤液取样20pl，留电泳2、洗杂蛋白，用1XPBS+PMSF（1000:1）约400ml，洗脱若干次，用移液枪吸去上层泡沫（杂蛋白），至胶上无泡沫为止3、洗脱目的蛋白，洗脱液加50ml，分3次进行（15+15+15）,每次加入后间歇搅拌，自然静置洗脱15分钟，抽滤，勿使胶干，合并洗脱液，取样20pl，留电泳用洗脱液调零，测OD2800D值达到1.5为佳）4、将洗脱液置于透析袋中（透析袋应提前煮好），将透析袋置于2L透析液1中,加入磁珠置于4°C冰箱内磁力搅拌器上，4小时后换为透析液2胶的回收：用3M氯化钠溶液（用1XPBS溶液溶解）、1XPBS（无沉淀）洗涤，20%乙醇洗脱,装瓶洗脱液：50mM/LTRIS-HCL、10mM/LGSH透析液1:20mM/LTRIS-HCL、1mM/LEDTA、0.15mM/LDTT透析液2：:0.5mM/LEDTA、1XPBS。