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1、几种浮游植物检测方法研究 分类号 密级 UDC 编号 厦 门 大 学 博士后研究工作报告 几种浮游植物检测方法的研究 StudiesonDetection ofseveral Approaches phytoplanktons 孟海军 201 报告提交日期 1年2月 厦门大学 2011年2月 题名页 几种浮游植物检测方法的研究 on StudiesDetection ofseveral Approaches phytoplanktons 博士后姓名 孟海军 流动站 一级学科 名称环境科学与工程 专业 二级学科 名称环境科学 研究工作起始时间2006年8月01日 研究工作期满时间2010年11月
2、 厦门大学 201 1年2月 厦门大学博士后研究工作报告著作权使用声明 本人完全了解厦门大学有关保留、使用博士后研究工作报告的规 定。厦门大学有权保留并向国家主管部门或其指定机构送交该报告的 纸质版和电子版，有权将该报告用于非赢利目的的少量复制并允许该 报告进入学校图书馆被查阅，有权将该报告的内容编入有关数据库进 行检索，有权将博士后研究工作报告的标题和摘要汇编出版。保密的 博士后研究工作报告在解密后适用本规定。 本研究报告属于： l、保密 ，2、不保密 兮7 纸本在年解密后适用本授权书； 电子版在年解密后适用本授权书。 请在以上相应括号内打“4” 作者签名；刍沏晕 日期乙I&1月。日 I土f
3、 日期：碡胡甲 目录 第一章前言1 11常规的赤潮生物检测技术2 111 光学显微镜和电子显微镜检测技术2 112流式细胞技检测技术 FCM 3 113基于色素的检测技术3 12分子水平的检测技术4 121 基于rDNA的分子检测技术5 1211寡核苷酸探针杂交技术7 荧光原位杂交技术7 三明治杂交技术8 1212其他的DNA标记技术9 122基于蛋白质的免疫荧光检测技术11 123 I ectin探针12 13自动化的赤潮藻检测技术13 第二章三种藻的SEM观察结果15 21材料与方法15 211 样品采集、固定、观察及培养15 212样品处理程序16 2121玻片处理16 2122样品脱水
4、处理16 213电镜观察方法17 22结果与讨论17 221 纤小裸甲藻固定方法的比较17 224纤小裸甲藻的形态和体表线纹观察结果18 225两种青绿藻的形态观察结果21 第三章SSR与PCNA标记的开发23 31材料和方法23 311材料23 312 PC的配置23 313 MISA aicroSAte|lite tooIs 使用环境的建立及使用23 3141 ActiveperI引擎的建立23 PerI 3142 SCFipt50的安装及使用23 314 Spurnik的使用方法25 315序列比对和拼接工具26 316引物和探针设计26 318 PCR扩增反应体系：26 32结果与讨论
5、27 321PCNA标记的开发27 3211 PCNA标记开发的原理27 3212PCNA标记开发的过程29 322SSR标记的开发与应用34 3221序列的获取与预处理34 3222不同软件效率的比较35 3223 SSR的出现频率，35 3224各类SSR的分布规律36 33讨论37 Il 参考文献39 致谢47 附录柏 III 第一章 前言 赤潮 RedTide ，从广义上讲，指的是在某种海域环境条件下，一些单细 胞浮游生物爆发性繁殖，引起水色异常的生态现象。它不一定有毒或有害。日常 生活中，狭义上的赤潮主要指的是对环境有毒或有害的一种浮游生物爆发性繁殖 Bloom， 的生态现象。这种赤
6、潮有一个准确的名称叫做有害藻水华 Harmful Algal HAB 。在特定的条件下，几乎所有藻都能发生藻华，大多数藻华都是无毒或无 害的。但有些种类藻华能产生毒素，危害附近生活的其他生物，甚至通过食物链 威胁到人类和更多的其他生物。还有一些虽然不产生毒素，但是其生物量累积到 一定程度时，能对环境起到极大的危害作用。例如太湖近年频频发生的蓝藻藻华， 蓝藻无毒，蓝藻藻华能污染水源，降低水中含氧量，是鱼类死亡。这两种藻华统 称为有害藻水华 赤潮 。 有很多种因素能导致赤潮的发生，具体的机制尚未研究清楚。近年来随着环 境污染日益加重，大量营养盐流入大海，导致近海富营养化同益明显，赤潮的爆 发的频率的规模呈现急剧扩大的趋势。同时人类对环境监测重视程度的提高，有 关赤潮爆发的报道越来越频繁，赤潮这种海洋生念现象越来越为公众所熟知。我 国近海是赤潮的高发地，近年来赤潮发生的次数和规模也呈现增长趋势，给海水 养殖业、海洋环境乃至人们的健康与安全带来了极大的威胁 易晓蕾，2003，周 名江等，2001，2003 。 为了减少赤潮带来的危害，人们开发了许多技术来监测赤潮，希望能尽快的 了解发生藻华的藻的种类，以判明该藻华是否有害。赤潮生物检测技术的研究也 etaL，1998；Mudie 就成为赤潮监测的重要内容 Kim etaL，2002 。早期的检测
