实验16酶的特异性和影响酶反应速度的因素一、 目的1、 了解酶的特异性2、 了解温度、pH值、激活剂和抑制剂等因素对酶反应速度的影响3、 掌握检查酶的特异性，酶的激活剂和抑制剂影响酶反应速度的方法及原理4、 学习测定酶最适pH值的方法二、 原理酶是生物体中具有催化功能的蛋白质，因此也叫生物催生剂生物体内存在多种多样的酶, 从而使生物体在温和的条件下能迅速完成复杂的生物化学反应酶具高度的特异性所谓特异性是指一种酶能对一种化合物或一类化合物起催化作用，而不 能对别的物质发生催化反应淀粉和蔗糖无还原性唾液淀粉酶水解溶粉生成有还原性的麦芽糖，但不能催化蔗糖水解 蔗糖酶能催化蔗糖水解产生还原性的葡萄糖和果糖，但不能催化淀粉水解，用Benedict试 剂检查糖的还原性温度和pH对酶的活性有显著的影响，使反应速度达最人反应值时的温度称为某种酶作用的 最适温度人多数动物酶的最适温度为37°C~40'C,植物酶的最适温度为50°C~60°C,能使 酶表现其活性最高时的pH值称为该酶的最适pH值，不同酶的最适pH值不同酶的活性常受某些物质的影响，能使酶活性増加的物质称为酶的激活剂，能使酶的活性降低 的物质称为酶的抑制剂。
氯离子为唾液淀粉酶的激活剂，铜离子为其抑制剂三、 材料、试剂与器具（一） 材料1、 干酵母2、 黄豆粉（二） 试剂1、 2%蔗糖溶液：蔗糖是典型的非还原糖，若商品蔗糖中还原糖含量超过一定标准，则呈现 还原性，这种蔗糖不能使用，所以实验必须进行检查，本实验用的蔗糖至少应是分析纯的试 剂2、 0.3%氯化钠的1%淀粉溶液（新配制）3、 释释200倍的新鲜唾液（5滴唾液，加蒸饰水桶释至50亳升）4、 蔗糖酶溶液：取干酵母100克，置于乳钵内，加适量的蒸馆水和少量石英砂，用力研磨 提取1小时，再加蒸馆水使总体积约500亳升，过滤，将滤液保存于冰箱备用5、 本尼迪克特试剂（Benedict）：将硫酸铜17.3克溶于100亳升热蒸饰水中，冷却，稀释至 150亳升，取柠檬酸钠173克及无水碳酸钠（Na2CO3） 100克，加水600亳升，加热使之溶 解，冷后后棉释至850亳升最后把硫酸铜溶液缓缓倒入柠檬酸钠一碳酸钠溶液中，摇匀, 用细口瓶贮存，此试剂可以保存很久6、 0.1%淀粉溶液7、 1%氯化钠溶液 1%硫酸铜溶液9、 1%的硫酸钠溶液10、 碘化钾一碘溶液（稀）11、 0.3%氯化钠0.2%淀粉溶液。
12、 1%尿素溶液13、 .嗦酶提取液：取黄豆粉6克，加30%乙醇250亳升，振荡10分钟，过滤，可保存1~2 星期14、 奈斯勒试剂：称取5克碘化钾，溶于5亳升蒸馆水中，加入饱和氯化汞溶液（100亳升 约溶解5.7克氯化汞）并不断搅拌直至产生的朱红沉淀不再溶解时，再加40亳升50%氢 氧化钠溶液，稀释100亳升，混匀，静置过夜，倾出清液于棕色瓶中15、 0.3%氯化钠的0.5%淀粉溶液（新配制）16、 0.2M磷酸氢二钠溶液17、 0.1M柠檬酸溶液（三）器具1、 试管及试管架2、 移液管（1, 2, 5亳升）3、 冰浴4、 恒温水浴5、 白瓷板6、 秒表四、操作步骤（一）酶的特异性1、淀粉酶的特异性实验取试管6支，编号，按卞表进行操作管号1234561%淀粉溶液（滴）2%蔗糖溶液(滴)444稀释唾液(ml)11煮沸过的桶释唾液(ml)11蒸馆水(ml)37°C恒温水浴15分钟Benedicty 试剂(ml)222222沸水浴2~3分钟现象解释结果2.蔗糖酶的特异性实验取试管6支，编号，按卜•表进行操作 管号（滴）（滴）(ml)234561%淀粉溶液4442%蔗糖溶液444蔗糖酶溶液11煮沸过的蔗糖酶溶液(ml)11蒸馆水(ml)1137°C恒温水浴15分钟Benedict 试剂(ml)22222沸水溶2-3分钟 现象解释结果(-)酶的激活剂及抑制剂取试管4支，编号，按下表加入试剂 管号12340.1%淀粉溶液(ml)3333稀释唾液(ml)11%硫酸铜溶液(ml)11%氯化钠溶液(ml)11%硫酸钠溶液(ml)1蒸馆水(ml)137°C恒温水浴、保温10分钟碘化钾一一碗溶液(滴)2-32~32~3现象解释结果说明本实验第3管的意义。
三）温度对酶活性的影响1、 温度对唾液淀粉酶活性的影响唾液淀粉酶町将淀粉逐步水解成各种不同人小分子的糊精及麦芽糖它们遇碘各呈不同的颜 色直链淀粉（即可溶性淀粉）遇碘呈蓝色，糊精按分子从人到小的顺序遇碘可呈蓝色、紫 色、暗褐色和红色，最小的糊精和麦芽糖遇碘不呈颜色由于不同温度下唾液淀粉酶的活性 高低不同，则淀粉被水解的程度不同所以，可由酶反应混合物遇碘所呈现颜色来判断取3支试管，编号后各加0.3%氯化钠的0.2%的淀粉溶液2亳升将第1、2号试管放入37°C 恒温水浴中保温，第3号试管放入冰水中冷却，5分钟后，向第1号试管中加入煮沸5V5 分钟的桶释唾液1亳升，向第2, 3号试管加桶释唾液各1亳升20分钟后取出3支 试管，各加入碘化钾一碘溶液2滴，混匀，比较各管溶液的颜色判断淀粉被唾液酶水解的 程度，并说明温度对唾液酶活性的影响2、 温度对腺酶活性的影响麻酶能催化尿素水解生成氨和二氧化碳，氨可以与奈斯勒试剂作用生成红色化合物由颜色 深浅可断定反应进行的程度NH2NH2腺酶C=O+H2O 2NH3+CO2取4支试管，编号，向每支试管中加入咏酶提取液1亳升将第1号试管放在冰水里冷却, 第2号试管在室温上放置，第3号试管在50°C恒温水浴中保温，第4号试管在沸水中煮。
5 分钟后分别向4支试管中加入1%尿素溶液1亳升，混匀，10分钟后取出4支试管，将第3,4号试管用流动的自来水冷却至室温然后向4支试管中加入奈斯勒试剂5滴，摇匀观察 比较各试管颜色深浅，并说明温度对腺酶活性的影响四）pH对酶活性的影响（一）取4个50亳升锥形瓶，编号按卞表中的比例，用吸量管添加0.2M磷酸氢二钠溶 液0.1M柠檬酸溶液，制备pH5.0~8.0的4种缓冲液编号0.2M磷酸氢二钠Na2HPO4（亳升）0.1M柠檬酸C6H8O7H2O（亳升）缓冲液pH15.154.855.026.053.955.837.722.289.270.288.0从4个锥形瓶中各取缓冲缓3亳升，分别放入4支带有号码的试管中，随后于每个试管中添 加0.3%NaCl 0.5%淀粉溶液2亳升和桶释200倍的唾液2亳升，向各试管中加入桶释唾液的 时间间隔为1分钟将各试管中物质混匀，并依次置于37°C恒温水浴中保温待向第4管加入唾液2分钟后，每隔1分钟由第3管取出1滴混合液，置于白瓷板上，加1 小滴碘化钾一碘溶液，检验淀粉的水解程度待混合液变为棕黄色时，向所有试管依次添加 1一2滴碘化钾一碘溶液，加碘化钾一碘溶液的时间间隔，从第1管起，亦均为1分钟。
观察各试管中物质呈现的颜色，分析pH对唾液淀粉酶活性的影响五、 实验报告以表格的形式总结酶的特异性及各种因素对酶促仅应的影响，并解释结果六、 思考题1、什么是酶的特异性？本实验结果为什么能说明酶具有这种性质？2、用煮沸后的蔗糖酶水解淀粉或蔗糖会产生什么现象？这种试验与操一（一）的作法有 何区别，试说明酶学实验中安排对照实验的必要性3、 激活剂与变性剂有何不同？试举例说明4、 抑制剂与变性剂有何不同？试举说明5、 为什可以用碘化钾一碘溶液作指示剂检查温度对唾液淀粉酶活性的影响？6、 酶在干燥的情况卞与在水溶液中，它的活性受温度的影响是否相同？这种性质对酶的保 存有何意义？7、 酶反应的pH是否是一个常数？它与哪些因素有关？这性质对于选择测定酶活性的条件 有什么意义？&通过几个酶实验，你对下面问题如何认识？（1）酶作为生物催化剂具有哪些特性/。