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1、Four short words sum up what has lifted most successful individuals above the crowd: a little bit more.-author-datesiRNA-干扰实验步骤(贴壁细胞)1 转染前一天,4-510* 4细胞接种在 24 孔板上, 0.5mL 含 FBS 和抗生素的 DMEM(或 Opti-MEM,其他培养基)细胞培养基。2 选择用于初期接种的细胞数量,应能在24小时内使细胞汇合达到70-90%。1 转染前一天,4-510* 4细胞接种在 24 孔板上, 0.5mL 含 FBS 和抗生素的 DMEM(
2、或 Opti-MEM,其他培养基)细胞培养基。2 选择用于初期接种的细胞数量,应能在24小时内使细胞汇合达到70-90%。3. 在50l的DMEM(或Opti-MEM,或其他无血清培养基)无血清培养基加入20pmol siRNA(或0.8g DNA),柔和混匀; 4. 混匀 lipofectamin 试剂,用 50l 无血清的 DMEM 或Opti-MEM,或其他无血清培养基)稀释 1l lipofectamin 试剂(DNA转染时,则加入2llipofectamin试剂) ,轻轻混匀,室温放置5分钟; 5. 将稀释好的 siRNA 和 Lipofectamin 试剂混合;轻柔混匀,室温放置 20 分钟 , 以便形成 siRNA/lipofectamin (或DNA/lipofectamin)复合物。 6. 将 100l siRNA/lipofectamin(或 DNA/lipofectamin)复合物加到含有细胞和培养基的培养板的孔中,来回轻柔摇晃细胞培养板板。7 细胞在CO2培养箱中37温育24h-48h后,进行转染后的其它检测步骤。如果细胞株比较敏感,孵育4-6小时后,除去复合物,更换培养基。-