常规生物学试剂配制

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1、实验常用试剂、缓冲液的配制方法约 60mL约 42mLTris 溶液的 pHpH 值大约降低1、1M Tris-HCl ? 浓度 1 M Tris-HCl（pH7.4， 7.6， 8.0） ? 配制量 1L 配置方法1. 称量 121.1gTris 置于 1L 烧杯中。2. 加入约 800mL 的去离子水，充分搅拌溶解。3. 按下表量加入浓盐酸调节所需要的 pH 值。 pH 值浓 HCl7.4约 70mL7.68.04. 将溶解定容至1L 。5. 高温高压灭菌后，室温保存。注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH 值，因为值随温度的变化差很大，温度每升高1，溶液的0.03 个单位。2、 1.5 M

2、 Tris-HCl 组份浓度1.5 M Tris-HCl（pH8.8）配制量 1L 配置方法1.称取 181.7gTris 置于 1L 烧杯中。2. 加入约 800mL 的去离子水，充分搅拌溶解。3. 用浓盐酸调pH 值至 8.8。4. 将溶液定容至1L 。5. 高温高压灭菌后，室温保存。注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH 值，因为 Tris 溶液的pH 值随温度的变化差异很大，温度每升高1，溶液的pH 值大约降低 0.03 个单位。3、10TE Buffer0份浓度 100 mM Tris-HCl , 10 mM EDTA（pH 7.4， 7.6， 8.0）配制量 1L 配置方法1. 量取

3、下列溶液，置于1L 烧杯中。1 M Tris-HCl Buffer （ pH7.4 ， 7.6， 8.0） 100mL 500 mM EDTA （ pH8.0 ） 20mL2. 向烧杯中加入约 800mL 的去离子水，均匀混合。3. 将溶液定至1L 后，高温高压灭菌。4. 室温保存。4、 3 M 醋酸钠 组份浓度3 M 醋酸钠（pH5.2） 配制量 100mLK置方法 1.称取40.8gNaOAc?3H2O置于100200mL烧杯中，加入约 40mL 的去离子水搅拌溶解。2. 加入冰乙酸调节pH 值至 5.2。3. 加入去离子水将溶液定容至100mL 。4. 高温高压灭菌后，室温保存。5、 P

4、BS Buffer 组份浓度137 mM NaCl ， 2.7mM KCl ， 10 mMNa2HPO4 ， 2 mM KH2PO4配制量 1L 配置方法1. 称量下列试剂，置于1L 烧杯中。NaCl8 gKCl0.2gNa2HPO4 1.42 gKH2PO40.27g2. 向烧杯中加入约 800 mL 的去离子水，充分搅拌溶解。3. 滴加 HCl 将 pH 值调节至7.4，然后加入去离子水将溶液定容至 1L 。4. 高温高压灭菌后，室温保存。注意： 上述 PBS Buffer 中无二价阳离子， 如需要， 可在配方中补充 1mM CaCl2 和 0.5 mM MgCl2 。6、 10 M 醋酸

5、铵 组份浓度10 M 醋酸铵配制量 100mL置方法1.称量77.1g醋酸镂置于100200 mL烧杯中，加 入约 30 mL 的去离子水搅拌溶解。2. 加去离子水将溶液定容至100mL 。3. 使用0.22滤膜过滤除菌。4. 密封瓶口于室温保存。注意：醋酸铵受热易分解，所以不能高温高压灭菌。7 、 Tris- HCl 平衡苯酚 配置方法1. 使用原料： 大多数市售液化苯酚是清亮无色的， 无需重蒸馏 便可用于分子生物学实验。 但有些液化苯酚呈粉红色或黄色， 应避 免使用。同时也应避免使用结晶苯酚，结晶苯酚必须在160 对其 进行重蒸馏除去诸如醌等氧化产物， 这些氧化产物可引起磷酸二酯键的断裂或

6、导致RNA 和 DNA 的交联等。 因此， 苯酚的质量对 DNA 、RNA 的提取极为重要，我们推荐使用高质量的苯酚进行分子生物学实验。2. 操作注意：苯酚腐蚀性极强，并可引起严重灼伤，操作时应戴手套及防护镜等。 所有操作均应在通风橱中进行， 与苯酚接触过的皮肤部位应用大量水清洗，并用肥皂和水洗涤，忌用乙醇。3. 苯酚平衡：因为在酸性pH 条件下 DNA 分配于有机相，因此使用苯酚前必须对苯酚进行平衡使其 pH 值达到 7.8 以上，苯酚平衡操作方法如下： 液化苯酚应贮存于-20，此时的苯酚呈现结晶状态。从冰柜中取出的苯酚首先在室温下放置使其达到室温，然后在 68 水浴中使苯酚充分溶解。 加入

7、羟基喹啉（ 8-Quinolinol ）至终浓度 0.1。该化合物是一种还原剂、 RNA 酶的不完全抑制剂及金属离子的弱螯合剂，同时因其呈黄色。有助于方便识别有机相。 加入等体积的 1M Tris-HCl （ pH8.0 ），使用磁力搅拌器搅拌 15 分钟，静置使其充分分层后，除去上层水相。 重复操作步骤。加入等体积的0.1M Tris-HCl （ pH8.0）,使用磁力搅拌器 搅拌 15 分钟，静置使其充分分层后，除去上层水相。重复操作步骤，稍微残留部分上层水相。 使用 pH 试纸确认有机相的 pH 值大于 7.8 将苯酚置于棕色玻璃瓶中4避光保存。8、苯酚/氯仿/ 异戊醇 配置方法1. 说

8、明：从核酸样品中除去蛋白质时常常使用苯/ 酚 /氯仿 /异戊醇（ 25 ： 24： 1 ）。氯仿可使蛋白（ 25 ： 24 ： 1）质变性并有助于液相与有机相的分离， 而异戊醇则有助于消除抽提过程中出现的气泡。2. 配置方法：将Tris-HCl 平衡苯酚与等体积的氯仿/异戊醇（ 24 ： 1）均匀混合后，移入棕色玻璃瓶中 4保存。9、 10（ W/V ） SDS 组份浓度10 （ W/V ） SDS配制量 100mL置方法1.称量10g高纯度的SDS置于100200mL烧杯中， 加入约 80mL 的去离子水，68 加热溶解。2. 滴加数滴浓盐酸调节pH 值至7.2。3. 将溶液定容至100mL

9、 后，室温保存。10、 2 N NaOH 组份浓度2N NaOH配制量 100mL 配置方法1 .量取80mL去离子水置于100200mL塑料烧杯中（NaOH 溶解过程中大量放热，有可能使玻璃烧杯炸裂）。2. 称取 8g NaOH 小心地逐渐加入到烧杯中，边加边搅拌。3. 待 NaOH 完全溶解后，用去离子水将溶液体积定容至100mL。4. 将溶液转移至塑料容器中后，室温保存。11、 2.5 N HCl 组份浓度2.5 N HCl配制量 100mL 配置方法1. 在 78.4mL 的去离子水中加入 21.6mL 的浓盐酸（11.6N）,均匀混合。2. 室温保存。12、 5 M NaCl 组份浓

10、度5 M NaCl配制量 1L 配置方法1. 称取 292.2g NaCl 置于 1L 烧杯中，加入约800mL 的去离子水后搅拌溶解。2. 加去离子水将溶液定容至1L 后，适量分成小份。3. 高温高压灭菌后， 4 保存。13、 20 （ W/V ） Glucose 组份浓度20 （ W/V ） Glucose配制量 100mL置方法 1.称取20g Glucose置于100200mL烧杯中，加 入约 80mL 的去离子水后，搅拌溶解。2. 加去离子水将溶液定容至100mL 。3. 高温高压灭菌后，4保存。14、 Solution I 组份浓度25 mM Tris-HCl （ pH8.0 ），

11、10mM EDTA ， 50mM Glucose（质粒提取用） 配制量 1L 配置方法1. 量取下列溶液，置于1L 烧杯中。1M Tris-HCl （pH8.0）25mL20mL0.5 M EDTA （ pH8.0 ）20Glucose（ 1.11M ） 45mLdH2O910mL2. 高温高压灭菌后，4保存。3. 使用前每 50 mL 的 Soliution I 中加入 2mL 的 RNase A （ 20mg/mL ）。15、 Solution II 组份浓度250mM NaOH ， 1 （ W/V ）SDS（质粒提取用） 配制量 500mL 配置方法1. 量取下列溶液置于500mL 烧杯

12、中。10 SDS50mL2NNaOH50mL2. 加灭菌水定容至500mL ，充分混匀。3. 室温保存。此溶液保存时间最好不要超过一个月。注意： SDS 易产生气泡，不要剧烈搅拌。16、 Solution III 组份浓度3M KOAc ， 5M CH3COOH（质粒提取用） 配制量 500mL 配置方法1. 量取下列溶液置于500mL 烧杯中。KOAc147gCH3COOH57.5mL2. 加入 300mL 去离子水后搅拌溶解。3. 加去离子水将溶液定容至500mL 。4. 高温高压灭菌后，4保存。17、 0.5M EDTA 组份浓度0.5 M EDTA（pH8.0）配制量 1L 配置方法1

13、. 称取 186.1g Na2EDTA?2H2O ，置于 1L 烧杯中。2. 加入约800mL 的去离子水，充分搅拌。3. 用 NaOH 调节 pH 值值8.0（约 20g NaOH ） 。注意： pH 值至 8.0 时， EDTA 才能完全溶 解。4. 加去离子水将溶液定容至1L 。5. 适量分成小份后，高温高压灭菌。6. 室温保存。18 、 1 M DTT 组份浓度1 M DTT配制量 20mL 配置方法1. 称取 3.09g DTT ，加入到 50mL 塑料离心管内。2. 加 20mL 的 0.01 M 的 NaOAc （ pH5.2 ）， 溶解后使用0.22 R礁器过滤除菌。3. 适量

14、分成小份后，-20保存。19、 10mM ATP 组份浓度10mM ATP配制量 20mL 配置方法1. 称取 121mg Na2ATP?3H2O ， 加入到 50mL 塑料离心管内。2. 加 20mL 的 25mM Tris-HCl （pH8.0 ），搅拌溶解。3. 适量分成小份，-20保存。分子生物学实验常用培养基的配制方法1、 Ampicillin 组份浓度100mg/ml Ampicillin（ 100mg/ml ）配制量 50mL 配置方法1. 称量 5g Ampicillin 置于 50mL 离心管中。2. 加入 40mL 灭菌水， 充分混合溶解后，定容至 50mL 。3. 用0.22 R礴膜过滤除菌。4. 小份分装（ 1mL/ 份）后，-20保存。2、 IPTG 组份浓度24mg/mL IPTG（ 24mg/mL ）配制量 50mL配置方法 1. 称量 1.2g IPTG 置于 50mL 离心管中。2. 加入 40mL 灭菌水， 充分混合溶解后，定容至 50mL 。3. 用0.22 滤膜过滤除菌。4. 小份分装（ 1mL/ 份）后， -20保存。3、 X- Gal 组份浓度20mg/mL X- Gal（ 20mg/mL ）配制量 50mL 配置方法1. 称取 1g X-Gal 置于 50mL 离心管中。2. 加入 40mL DMF （二甲基甲酰胺），充分混合溶解后，