n辉骏生物F1TGENE广州辉骏生物科技有限公司TMT标记定量蛋白质组学一、技术概述TMT™(Tandem Mass Ta^M)技术是由美国Thermo Scientific公司研发的一种多肽体外标记技 术该技术采用10种同位素的标签，标记多肽的氨基基团，经过LC-MS/MS分析，可同时 比较10组不同样品中蛋白质的相对含量TMT技术是常用的差异蛋白质组学技术，在疾病标记物筛选、药物作用靶点、动植物抗 病/抗胁迫机制、动植物发育分化机理等领域都有广泛应用二、技术原理TMT试剂由三部分组成：质量报告基团、质量标准化基团和氨基反应基团质量报告基团有10种不同的分子量，质量标准化基团也10有种不同的分子量，与不同的报 告基团搭配，能保证被标记的不同来源的同一肽段在一级质谱中具有相同的质荷比；氨基反 应基团能与肽段N端及赖氨酸侧链氨基发生共价连接使肽段连上标记Mass reportef I Mass Ncrmalizef Amine ReactiveClea^ableLinker一级质谱中，任何一种TMT试剂标记的不同样品中的同一肽段表现出相同的质荷比；二级 质谱中，可切割键(箭头所指)断裂释放出TMT报告离子，在质谱低质量区产生了 10个 TMT报告离子峰，其强度反应了该肽段在不同样品中的相对表达量信息，另外二级质谱中 的肽段碎片离子峰质荷比反应了该肽段的序列信息；这些质谱原始数据经过数据库检索，可 得到蛋白质的定性和相对定量信息。
三、 技术优势1. 灵敏度高：低丰度蛋白也能检测出；2. 适用范围广：几乎可对任何物种的各类蛋白质进行分离鉴定；3. 高通量：能同时对10组样本中包含的蛋白进行鉴定及表达差异分析；4. 高效：液相色谱与串联质谱连用，自动化操作，分析速度快，分离效果好四、 技术流程蛋白样本制备一一胰酶酶解一一TMT标记一一肽段混合一一LC-MS/MS检测一一数据库检索——数据分析n辉骏生物w ・ FITUENE广州辉骏生物科技有限公司g"S 日 ui pie 2Sample 3SRinipte 4Trtat Samples & I皿博 Proteins-Sample !5 目ISompie fiSaim'plB 7SamplB 8SBrnp^e 9IDEMRMu姬Aik岫 &IryptiG燮*nvo_u-u_u_uuny_uuTMTM27NTMTM27CTMTM28NTMTM2BCTMTMagNTMTr 129CTMTM30NTMTM30CTMT，s-13Inunrnruu nwn*FraclHHistB,Chan Up(FerlarrnLC-M&W|$AnalysisI Data Analysis & CLujnLfLatjDn using PmEQimBDis：七 mw Sohw^re。