实验试剂和器材1•材料： 低分子量标准蛋白试剂盒：低分子量标准蛋白：兔磷酸化酶BMW=97,400兔肌动蛋白 MW=43,000MW=31,000牛血清白蛋白 MW=66,200牛碳酸酐酶胰蛋白酶抑制剂 MW=20,100鸡蛋清溶菌酶 MW=14,400 开封后溶于200川蒸馏水，置-20 °C保存，使用前室温融化，沸水浴中加热3-5分钟后上样样品1：称3mg样品1,加2 ml蒸馏水溶解2.实验试剂⑴ 30%丙烯酰胺(Acr):称Acr30g，甲叉双丙烯酰胺 (Bis) 0.8g，加蒸馏水至100ml,过滤后置棕色瓶中， 4C贮存可用1-2月2) 10%SDS (十二烷基磺酸钠)加入50ml水，用1mol/L盐酸入 50ml 水，用 1mol/L入50ml水，用1mol/L盐酸调(3) 1.5mol/L pH8.8 Tris-HCI 缓冲液：称取 Tris18.2g， 调pH8.8，最后用蒸馏水定容至100ml4) 1.0mol/LpH6.8Tris-HCl 缓冲液：称取 Tris12.1g，加 盐酸调pH6.8,最后用蒸馏水定容至100ml5) 0.05mol/LpH8.0Tris-HCl 缓冲液：称取 Tris0.6g，加 pH8.0,最后用蒸馏水定容至100ml。
7) 10%过硫酸铵(AP)(8) TEMED (四甲基乙二胺)(9) 样品溶解液：SDS(100mg) +巯基乙醇(0.1ml) + 溴酚蓝(2mg) +甘油(2g)+0.05mol/L pH8.0Tris-HCl (2ml)，最后定容至 10ml10) 固定液：取50%甲醇454ml，冰乙酸46ml混匀11) 染色液：称取考马斯亮蓝R250 0.125g，加上述固定液250ml，过滤后备用12) 脱色液：冰乙酸75ml，甲醇50ml，加蒸馏水定容至1000ml13) 电极缓冲液(内含 0.1%SDS，0.05mol/LTris- 0.384mol/L 甘氨酸缓冲液 pH8.3): 称Tris6.0g，甘 氨酸28.8g，加入SDS1g，加蒸馏水使其溶解后定容至1000ml实验过程1•将玻璃板用蒸馏水洗净晾干，准备2个干净的锥形瓶.2.把玻璃板在灌胶支架上固定好.※固定玻璃板时，两边用力一定要均匀，防止夹坏玻璃板. 3•按比例配好分离胶，用移液管快速加入，大约5厘米左右，之后加少许蒸馏水，静置40分钟.※凝胶配制过程要迅速，催化剂TEMED要在注胶前再加入，否则凝结无法注胶•注胶过程最 好一次性完成，避免产生气泡.※水封的目的是为了使分离胶上延平直，并排除气泡※凝胶聚合好的标志是胶与水层之间 形成清晰的界面.4•倒出水并用滤纸把剩余的水分吸干，按比例配好浓缩胶，连续平稳加入浓缩胶至离边缘 5mm处,迅速插入样梳，静置40分钟.※样梳需一次平稳插入，梳口处不得有气泡，梳底需水 平.5•拔出样梳后，在上槽内加入缓冲液，没过锯齿时可拆去底端的琼脂糖.※要使锯齿孔内的气泡全部排出，否则会影响加样效果.6、加样三个。
1）取10口1标准蛋白溶解液于EP管内，再加入10口1 2倍样品缓冲液， 上样量为20口I2）取10口I样品1溶液，再加入10口I 2倍样品缓冲液，上样量分别为5口1和10口I7•用微量注射器距槽底三分之一处进样,加样前，样品在沸水中加热3分钟，去掉亚稳态聚合 ※注射器不可过低,以防刺破胶体，也不可过高，在样下沉时会发生扩散•※为避免边缘效应，最 好选用中部的孔注样.8.电泳槽中加入缓冲液，接通电源，进行电泳，开始电流恒定在10mA，当进入分离胶后改 为20mA,溴酚蓝距凝胶边缘约5mm时，停止电泳9•凝胶板剥离与染色：电泳结束后，撬开玻璃板，将凝胶板做好标记后放在大培养皿内，加 入染色液，染色1小时左右10.脱色：染色后的凝胶板用蒸馏水漂洗数次，再用脱色液脱 色，直到蛋白质区带清晰※剥胶时要小心，保持胶完好无损,染色要充分.以上是我实验课件，希望有所帮助！。