实验四、 苜蓿无菌苗的培养实验五、苜蓿愈伤组织诱导【目的要求】 ：1、学会种子的消毒方法；2、学习接种操作技术规范实验内 容】：1、种子的挑选；2、种子的消毒；3、接种技术；4、离体培养；5、学会辨别下胚轴的方法并了解组织培养外植体的选择；6、利用离体培养技术建立了多种植物的无性繁殖体系实验用 具】：超净工作台、酒精灯、平皿、三角瓶、枪形镊、标签纸、记号笔、 pH 试纸等 实验药品】：各种盐类以及有机物质按照 MS 培养基配方准备， 0.1%氯化汞，蔗糖，琼脂实验方 法】：1、种子的挑选原则：挑选饱满有光泽的成熟种子2、种子的消毒：(1) 清水冲洗 3 遍；以下在无菌工作台进行(2) 75％酒精浸泡 30 秒，将酒精倒入废液缸；(3) 0.1％的氯化汞浸泡 12 分钟，将废液倒入废液缸；(4) 再用无菌水清洗 3 边，废水倒入废液缸；(5) 将消毒好的种子平分到带滤纸的培养皿中3、接种（无菌工作台）(1) 取装有 MS 培养基的培养瓶，用酒精棉球将瓶外擦拭消毒，同时将手及台面擦拭消毒；(2) 将种子均匀整齐接入培养瓶，包好封口纸；4、培养：将接种好的培养瓶送入培养间25± 2℃光照培养3－7 天。
5、愈伤组织的诱导： 将苜蓿幼芽从培养瓶取出放入带有滤纸的培养皿中，用手术刀截取下胚轴；再将下胚轴截成3－ 5mm小段，均匀整齐接入盛有MS 附加激素2,4-D和6-BA的培养瓶6、愈伤组织的培养：将接好的培养瓶送入培养间25± 2℃暗培养3周继代思考题：1、愈伤组织诱导污染调查 :观察污染情况，填入下表：观察日期 接种数 污染数 污染率 主要污染菌种污染率（ %） =（污染的外植体数 /总接种外植体数） ×100％2、外植体用消毒剂消毒后，为什么要用无菌水漂洗？3、在接种过程中，通过哪些措施来防止细菌对接种工具，接种材料的污染？4、对外植体表面消毒时为什么常用 “两次消毒法 ”？5、观察接种的外植体在接种 1 周后产生愈伤组织的颜色和质地，计算愈伤组织诱导率愈伤组织诱导率（ %） =（形成愈伤组织的材料数 /总接种材料数） ×100%6、分析影响愈伤组织诱导和分化的主要原因。