可可a中华人民共和国国家计量检定规程JJG 861--2007酶标分析仪ELISA Analytical Instruments2007一”一21发布 2008—05—21实施国家质量监督检验检疫总局发布jJG 861--2007酶标分析仪检定规程 ，一一 一’ 一’、、8 2l JJG 861--2007 lVerification Regulation of l代替JJG 861--1994 lELISA Analytical Instruments l、．． ．． 、．j本规程经国家质量监督检验检疫总局于2007年11月21日批准，并自2008年5月21日起施行归口单位：全国物理化学计量技术委员会 起草单位：中国计量科学研究院 参加起草单位：吉林省计量科学研究院本规程委托全国物理化学计量技术委员会负责解释本规程主要起草人：谢宝民(中国计量科学研究院)参加起草人：屈嫒玉(吉林省计量科学研究院)JJG 861—2007目 录1范围 12概述 13计量性能要求 14通用技术要求 14．1外观与初步检查 14．2绝缘电阻 25计量器具控制 25．1检定条件 25．2检定项目 35．3检定方法 35．4检定结果的处理 55．5检定周期 5附录A酶标仪灵敏度溶液标准物质制备方法 6附录C检定证书内页格式 l{l；；9 ^^^^^^^^^；^^^附录B检定记录格式 7JJG 861—2007酶标分析仪检定规程1范围 本规程适用于酶标分析仪的首次检定、后续检定和使用中检验。
酶标分析仪型式评价和样机试验中有关计量性能试验可参照执行2概述酶标分析仪(以下简称仪器)是依据酶标记的免疫复合物与酶的相应底物能够产生 显色反应，显色程度与被检测样品中待测抗体(或抗原)的含量相关，根据显色物吸光 度值确定待测物质含量，不同待测显色物质有其各自的特征吸收谱线，并遵守郎伯一比 尔(Lambert—Beer)定律，对待测物质进行定量分析的仪器Lambert—Beer定律的表达 式如下：A一一lgT—abc式中：A——物质的吸光度；T——物质的透射比； ．n——物质的吸光系数；6——光路长度；c——物质的浓度 仪器主要由光源系统、单色器系统、样品室、检测器等组成 仪器类别：I——单波长／双波长、多通道， Ⅱ——单波长、单通道； Ⅲ——波长连续可调式、单通道／多通道3计量性能要求仪器的计量性能要求如表1所示裹l仪器计■性能要求示值稳 波长示值 波长重复 吸光度示值 吸光度重 灵敏度仪器类别 通道差异 定性 误差／nm 性／nm 误差 复性／％ ／(L／mg)I 土0．005 士3 士1．5 士0．03 1．0 >10．01 O．03Ⅱ ±0．005 士3 士1．5 土0．03 1，O ≥0．01Ⅲ 士0．005 士3 ±1．5 土0．03 1．O ≥0．01 O．034通用技术要求4．1外观与初步检查JJG 861--20074．1．1仪器应有下列标志：名称、型号、编号、制造厂名、出厂日期。
4．1．2仪器应平稳置于水平无震动的工作台上各调节旋钮、按键和开关均能正常工 作电缆线的接插件应接触良好4．1．3样品室应密封良好，无漏光现象4．1．4指示器应正常工作，数字显示清晰、完整4．1．5运动部分应平稳，不应有卡滞、突跳及显著的空回4．2绝缘电阻仪器在不接地的状态下，试验电压500 V时，电源进线与壳体之间的绝缘电阻不小于20 MQ5计量器具控制 计量器具控制包括首次检定、后续检定和使用中检验5．1检定条件5．1．1环境条件 仪器检定时环境条件要求如表2所示袭2环境条件要求温度 (15～35)℃ 湿度 1 5％～85％RH 电压 (220±22)V 频率 (50士1)HZ 光线 无强光直射 振动 无振动干扰 噪声 无噪声干扰 磁场 无磁场干扰 电场 无电场干扰检定时不得有强气流影响，周围不应有易燃、易爆和腐蚀性气体5．1．2检定设备 仪器检定用设备如表3所示衰3仪器检定用设备序号 名 称 规格和技术指标1 交流电压表 万用表(4位半数字)2 频率表 (45～65)Hz，0．5级3 兆欧表 试验电压500 V，1．0级4 微孔酶标板 96孔5 分光光度计 波长示值误差优于士0．5 nm5．1．3标准物质5．1．3．1标准干涉滤光片2JJG 861--2007有证标准物质证书中峰值波长标称值为(405，450，492(或490)，620(或630) 士2)nlTl的标准干涉滤光片o，或在仪器使用波长范围内均匀选取的4块标准滤光片。
5．1．3．2光谱中性滤光片吸光度标称值分别为0．2，0．5，1．0，1．5(不确定度≤O．01)o5．1．3．3酶标分析仪用灵敏度溶液标准物质(不确定度≤5％)o5．2检定项目衰4检定项目检定项目 首次检定 后续检定 使用中检验 外观检查 + —一示值稳定性 + + +波长示值误差 +波长重复性 上吸光度示值误差 + + +吸光度重复性 + + +灵敏度 + +通道差异 + + +绝缘电阻 +注：1 “+”为需检项目，“一”为不需检项目2经过维修后可能对仪器有较大影响时，其后续检定按首次检定进行5．3检定方法5．3．1外观与初步检查按4．1的要求进行检定前仪器应预热20 min5．3．2示值稳定性的检定选用492 nm波长或仪器特有的专一波长，将吸光度标称值1．0的光谱中性滤光片， 平放在微孔酶标板的空板架上，以空气为参比，测量并记录仪器的初始示值，5 min后 记录仪器示值一次，10 min后再次记录仪器示值求出后两次吸光度示值的最大值， 各类仪器按公式(1)计算示值稳定性r：r=A最大一A韧蛄 (1)式中：A韧始和A最大——仪器吸光度初始值和最大值5．3．3 波长示值误差和波长重复性的检定5．3．3．1对Ⅲ类仪器，用峰值波长为405，450，492，620 nm的4片标准干涉滤光片 或在仪器使用波长范围内均匀选取的4块标准滤光片，分别置于仪器出光孔前或平放在 微孔酶标板的某一位置(标准干涉滤光片平面需与入射光束垂直)，自短波向长波逐点 测出滤光片的波长——吸光度示值(例如：测量峰值波长405 nm标准干涉滤光片时， 将波长调到低于标准波长20 nm即385 nm，然后，以1 nm的改变幅度测量至高于标准①标准干涉滤光片需在波长示值误差优于5=0．511111的分光光度计上定值。
⑦应使用经国家计量行政部门批准颁布的标准物质JJG 861—2007吉≥漩图1 波长一透射比特性曲线5．3．4吸光度示值误差的检定5．3．4．1依次选用405，450，492，620 nm波长或仪器特有的专一波长，将吸光度标 称值分别为o．2，o．5，1．0，1．5的四块光谱中性滤光片同时平放在微孔酶标板的空板 架上，以空气为参比，连续测量3次，依次记录仪器示值，并计算平均值5．3．4．2对于吸收池固定的仪器，先用空吸收池调整仪器零点，再将光谱中性滤光片放入样品室中，连续测量3次，记录仪器示值，并计算平均值5．3．4．3吸光度示值误差△A按公式(5)计算：3．△A一告∑A，一A (5)3 j式中：A——第i次测量的吸光度值； A——吸光度标准值4JJG 861--2007仪器吸光度示值误差结果的报告，以每个波长(405，450，492，620 nm)或仪器 特有的专一波长下，通过测量、计算得到的吸光度示值误差最大值给出5．3．5吸光度重复性的检定选用450 nm波长或仪器特有的专一波长，将吸光度标称值为0．5或1．0的光谱中 性滤光片平放在微孔酶标板的空板架上，以空气为参比，于固定的某--：fL位重复测量6 次，记录仪器示值，并计算平均值，按公式(6)计算RSD值，以实验结果的相对标准 偏差值(RSD值)表示仪器的吸光度重复性：RSD一√肇≠×三×100X一√型百可厂×圭× (6)式中：z，——第i次测量的结果；牙一n次测量结果的吸光度平均值；”——测量次数。
5．3．6灵敏度的检定选用450 nm波长或仪器特有的专一波长，使用量程适合并经检定合格的A级加样 器，在未包被抗原或抗体的微孔酶标板的某一孔中加入350“I浓度值为5 mg／L的酶 标分析仪用灵敏度溶液标准物质，测量吸光度值5．3．7通道差异的检定对I、Ⅲ类仪器，选用450 tim波长或仪器特有的专一波长，将吸光度标称值为1．0的光谱中性滤光片平放在微孑L酶标板的空板架上，先后置于多个通道的相应位置 (例如：对于8通道仪器可从A1～Hl或A2～H2作为起始位置)，以空气为参比，测 量并记录每一通道的至少6次吸光度值(例如A通道可测量A1～A6或A2～A7)，多 个通道的差异结果报告用全部测量数据的极差值表示，按公式(7)计算通道差异乱：舭一A 一A (7)式中：A——多个通道中测量结果的吸光度最大值； A ——多个通道中测量结果的吸光度最小值；以一通道差异5．3．8绝缘电阻的检定用500 V兆欧表，测量仪器电源进线端与机壳(或接地端子)间的绝缘电阻5．4检定结果的处理5．4．1 以上检定的各项数据均需记录在检定记录纸上，其中有关项目的结果应填写完 整或注明在检定证书或检定结果通知书上。
5．4．2按本规程检定合格的仪器，发给检定证书；不合格的仪器，发给检定结果通知 书，并注明不合格项目的数据5．5检定周期检定周期一般不超过1年，在此期间仪器经修理或对测量结果有疑问时，应及时检定JJG 861--2007附录A酶标仪灵敏度溶液标准物质制备方法酶标仪灵敏度溶液标准物质采用重铬酸钾纯物质配制成质量浓度为5 mg／I的溶液 标准物质，以0．05 mol／L硫酸为基体A．1 0．05 mol／L硫酸溶液的配制在500 mL烧杯中加入400 mL蒸馏水，用移液管吸取2．7 ml，浓硫酸加入烧杯中， 搅拌均匀后放入1000 mL容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度线，摇匀备用。