《Ⅰ型胶原蛋白基因在胃癌、食管癌中的表达》由会员分享，可在线阅读，更多相关《Ⅰ型胶原蛋白基因在胃癌、食管癌中的表达（5页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、型胶原卵白基因在胃癌、食管癌中的表达【摘要】目的应用荧光差异表现技能挑选胃癌中特异表达的基因，并验证其在胃癌、食管癌中的表达，为进一步相识胃癌、食管癌产生、生长的分子机制提供帮助。要领应用荧光差异表现技能dd-pr阐发胃癌及其相对应的正常胃黏膜构造，得到差异表达的基因片断，这些片断颠末二次pr再扩增后举行克隆和测序，通过在genbank中同源性检索，查寻与差异片断相对应的同源基因。应用半定量pr,荧光定量pr等要领进一步验证该基因在胃癌及食管癌中的表达差异。效果通过dd-pr得到的差异片断中的一个片断对应于人型胶原卵白基因。该基因的读码框长4395bp，编码1464个氨基酸，编码卵白分子量约1
2、39.01kd。该基因在胃癌及食管癌构造中的表达量高于其对应的癌旁构造，而且在食管癌构造中的表达差异较胃癌中更显着。结论人型胶原卵白基因在胃癌及食管癌中均呈高表达，推测其大概在胃癌及食管癌的产生生长中起作用。【关键词】基因型胶原卵白胃肿瘤食管肿瘤荧光差异表现聚合酶链反响分子生物学研究表白癌基因、抑癌基因和细胞周期操纵基因的非常表到达场了胃癌及其他恶性肿瘤的演进1。如今很多胃癌特异表达基因已被断定及研究，如p53基因、谷胱甘肽s2转移酶基因等，但胃癌产生、生长简直切机制仍未阐发，因此探求胃癌中新的特异表达的基因对胃癌的底子研究与临床研究有紧张意义。本试验应用荧光差异表现要领dd-pr挑选到胃癌中
3、差异表达的型胶原卵白基因，并利用rna定量阐发要领检测该基因在胃癌及食管癌构造中与其对应癌旁构造之间表达的差异。1质料与要领1.1临床质料实行中标原来自2022年3月至2022年6月间于江苏大学隶属病院担当手术治疗的胃癌患者12例及食管癌患者14例。每例患者均取手术切除的癌构造及癌旁构造间隔癌构造约23，并经病理查抄证明。构造离体后立即在液氮中速冻，并置于-70冰箱中保存。1.2试剂和仪器rna提取试剂trizl购自invitrgen公司，荧光差异表现试剂盒购于genhunter公司，supersript反转录试剂盒购于gib公司，荧光定量pr试剂盒购于takara公司。重要仪器有fbi?誖h
4、itahi荧光差异表现体系，stratagenex3000p荧光定量pr仪，genspehitahi。1.3dna的制备用trizl提取的要领提取胃癌、食管癌构造及其癌旁构造的rna，利用gens-pe测定总rna的浓度，经dnase消化后，反转录得到胃癌、食管癌及其癌旁构造的dna。1.4dd-pr3种荧光引物(fht12a，fht12g，fht12)与21种试剂盒中的随机引物做差异组合，举行荧光差异表现pr(dd-pr)，pr产物8l上样于6%的聚丙烯酰胺凝胶，1400v恒压电泳5h摆布。1.5差异片断的克隆差异条带经切割和处置惩罚后作为模板，举行二次pr，将产物毗连于t载体。毗连产物转化
5、大肠杆菌dh5，蓝白斑挑选阳性克拢阳性克隆经酶切断定后测序(上海生工)。1.6荧光定量pr阐发利用prier5.0软件方案用于定量pr的胶原卵白型基因引物，内参选用人-atin，检测胶原卵白型基因在胃癌、食管癌构造及其癌旁构造中表达的差异。引物序列为：胶原卵白型基因：5-gagagatgagatggat，3-atgttttggtggt-taggagg；内参-atin：5-gagattaaaag，3-ggagtaaggttttgggatg。扩增片断长度别离为280bp和512bp。反响条件为9430s，5730s，7235s。按照2-t公式盘算基因相对拷贝数，利用spss13.0软件对得到的数据
6、举行阐发。1.7半定量pr阐发为了对荧光定量pr的效果进一步查验，用做定量pr的两对引物对差异模板dna别离作了半定量pr，反响条件为9430s，5730s，7235s25个循环。通过凝胶成像体系软件对所得电泳条带举行亮度和面积的阐发，得出数据，然后用spss13.0软件处置惩罚，得到直不雅的图象。2效果2.1阳性差异片断的挑选聚丙烯酰胺凝胶电泳效果创造，胃癌构造和癌旁构造中基因的表达存在差异性。为进一步相识这些差异片断的信息，将差异片断切出后，举行二次扩增，并对扩增到的片断举行克隆和序列阐发。将测序得到的序列在nbi数据库中举行比对，此中编号为g1的差异片断与genbank中的人型胶原卵白基
7、因同源性到达100%(genbank：b036531)。2.2半定量pr阐发本研究中取4例胃癌、3例食管癌标本对人型胶原卵白基因在癌构造及相应癌旁构造中的表达量举行半定量阐发。由图1、图2可看到人型胶原卵白基因在胃癌及食管癌构造及其癌旁构造中均有表达，但在癌中的表达量高于旁构造，而且食管癌构造中的表达差异比胃癌中更显着。通过凝胶成像体系软件对所得电泳条带举行亮度和面积的阐发，然后用spss13.0软件处置惩罚，得到直不雅的图象，人型胶原卵白基因在胃癌构造中的表达量超过癌旁构造约1.5倍图3，在食管癌构造中的表达量超过癌旁构造约2倍图4。2.3荧光定量pr阐发应用12例胃癌、14例食管癌标本对人
8、型胶原卵白基因在胃癌、食管癌及癌旁构造的表达量进一步检测。应用spss13.0软件作定量阐发，效果表白，人型胶原卵白基因在胃癌及食管癌构造中的表达量高于其相应的癌旁构造，差异具统计学意义p0.05，且食管癌构造中的表达差异比胃癌中更显着图5、图6。3讨论rna差异表现法于1992年由liang等2起首创立。颠末不竭革新，如今这一技能已比力成熟。它仅需少量的总rna0.020.2g，因此必要较少的构造标本，而且具有敏捷度高、快速、应用范畴广等长处，该要领可以区分差异生理、病理状态下基因的表达，已被证明能有用地挑选肿瘤恶性转化历程中差异表达的基因3。本研究应用rna差异表现技能挑选到胃癌中高表达的
9、型胶原卵白基因，应用rna定量pr及半定量要领进一步验证创造该基因在胃癌及食管癌构造中表达量高于其对应的正常构造。型胶原卵白是哺乳动物细胞最富厚的卵白质,其编码基因长约40kb，包罗了52个外显子，编码卵白质的单体肽链包罗1464个氨基酸残基4。研究证明，型胶原卵白基因在多种肿瘤如胰腺癌5、乳腺癌6、前线腺癌7等中呈高表达，deu等8学者创造型胶原纤维卵白基因尾肽缺乏可促进乳腺癌细胞转移，r等9创造在前线腺癌中，型胶原卵白基因可通过下调抑癌基因bra2表达而促进前线腺癌细胞增殖，lianq等10创造在脑肿瘤中，型胶原卵白基因表达增高是组成肿瘤微情况的紧张身分，本实行创造该基因在胃癌及食管癌中高
10、表达，提示型胶原卵白基因在恶性肿瘤中的高表达大概具有普及性。别的，已有研究表白型胶原卵白在鳞癌比在腺癌中表达更具有活性11，食管癌90以上构造学分型为鳞癌，而胃癌85以上均为腺癌12，这与我们在研究历程中创造型胶原卵白基因在食管癌中表达较在胃癌中表达更有差异性是同等的。对型胶原卵白基因的成效、型胶原卵白基因在其他恶性肿瘤中是否也高表达以及在胃癌及食管癌中详细通过何种途径发挥促癌作用等方面举行深化研究，将有助于剖析肿瘤形成、生长的机制。【参考文献】1kurkit,trapassf,yendauris,etal.allelelssandprterhypereth-ylatinfvhl,rar-beta,rassfiaandfhittursuppressrgenenhrse3pinesphagealsquausellarinaj.anerres,2022,6313:3724-3728.2liangp,pardeeab.differentialdisplayfeukarytiessengerrnabyeansftheplyerasehainreatinj.siene,1992,257(5072):967-971.3闻燕,王文兵,高广,等.食管癌中高表达的钙结合卵白基因的序列阐发及意义j.江苏大学学报(医学版),2022,172：155-157.
