复合bFGF缓释微球的制备与性能测定 刘锐，黄沙，金岩，吴红，姜玲，刘涛 【关键词】,碱性成纤维细胞生长因子 PreparatinandharateristitestfbFGFipregnatedirsphere 【Keyrds】basifibrblastgrthfatr;irsphere;sustainedrelease;enapsulatin 【摘要】目的：制备复合碱性成纤维细胞生长因子〔bFGF〕的可落解缓释微球，观察其各项性能，为进一步应用于构造工程奠基底子.要领：接纳改进的乳化冷凝法交联制备复合bFGF的缓释微球，测定微球形态、粒径、载药率和包裹率等，并接纳ELISA法观察其体外bFGF的缓释效能.结果：缓释微球均匀粒径(12.4±3.6)μ；均匀载药率为0.24%，均匀包裹率为96.82%.d1体外开释28.23%，2~5d时累积开释率到达57.19%,d7时开释减慢且累计浓度为93.94%.结论：复合bFGF的缓释微球制备工艺轻便，性能精良；可在较长时间内连续开释活性bFGF，与构造工程支架的团结应用具有可行性. 【关键词】碱性成纤维细胞生长因子；微球；缓释；包裹率 0弁言 生长因子的应用不停是构造工程范畴的紧张课题之一.它具有多种生物学活性，可提供有利于细胞生长的微情况，促进新生构造血管天生等［1］.但由于生长因子半衰期短，溶液进入体内后敏捷扩散、变性或酶解，难以保持其生物活性［2］.我们制备复合碱性成纤维细胞生长因子(basifibrblastgrthfatr，bFGF)的缓释微球载体，并观察微球形态、粒径、载药率、包裹率及开释结果等性能，以期使用此种新型载体在较长时期内连续开释bFGF，为以后与构造工程支架的团结应用奠基底子. 1质料和要领 1.1质料 明胶(等电点50，相对分子量99000，华美生物工程公司)，人重组bFGF溶液(25g/L，等电点9.6，Siga公司)，人bFGF定量EiA试剂盒〔QuantiKineR,RDsystes〕，250g/L戊二醛，丙酮，异丙醇，无水乙醚，液体白腊，氨基乙酸为国产阐发纯，Span80(Siga公司)为进E1阐发纯，水为双蒸水，JJ1型准确电子搅拌器仪，TGL16G高速离心机，GENESIS冻干机(Virtis公司)，BX41数码显微镜〔lypus). 1.2要领 2结果 2.1缓释微球的形态和粒径空缺缓释微球呈圆球状，形态及粒径巨细较匀称〔Fig1A〕；复合有bFGF的缓释微球经溶涨体积变大，形态饱满(Fig1B).微球粒径7~20(12.4±3.6)μ，占85.6%. 2.2bFGF尺度曲线在492n处测各孔A值，由此绘制尺度曲线〔Fig2〕并拟合线性回归方程为：A=0.0042+0.0154，r=0.9996〔P0.001〕，bFGF在0~500ng/L范畴内切合线性干系. 2.4缓释微球体外溶出度测定由缓释微球体外开释样品各个时间点的A值得出的bFGF浓度，并由此绘制出微球体外累积开释量曲线〔Fig3〕.A:Blank;B:bFGFipregnated. 3讨论 bFGF是一类具有较高活性的多聚肽，对多种中胚层和神经外胚层泉源的细胞具有普及的生物学活性，可改变一些细胞的趋化性，诱导或按捺特别卵白质的合成或排泄［3］.但由于这种多成效细胞因子半衰期短，易失去活性,应用结果不甚抱负.我们方案的缓释微球可缓释药物、靶向运送、包管药物的治疗作用的条件下淘汰给药剂量以及低落药物毒性等［4］.通过含量测定，缓释微球对bFGF的包裹率可达96.82%.体外证明，复合bFGF缓释微球在7d内对上皮细胞仍有促进增殖活性［5］.bFGF的累积开释量呈迟钝上升趋势，d1累积开释率为28.23%，不存在初始阶段的“突释〞征象［6］；2~5d，累积开释量率57.19%,落服了部门同类产物开释药物时初期浓度过大，短期内又敏捷低落征象;到7d时，累积开释率到达93.94%，固然开释速率减慢，但体外仍有bFGF生物活性. 本实行对缓释载体的研制尚处于实行室阶段，但由于此种缓释微球性能精良，可以按照构造工程化产物应用的差异必要，消费出包裹其他药物的缓释微球，也可同时包裹几种生长因子发挥团结调控的作用.本方案工艺轻便，能较长时间连续开释活性生长因子，在构造工程研究范畴具有辽阔的应用远景. 【参考文献】 ［1］RihardsnTP，Peters．Plyerisystefrdualgrthfatrdelivery［J］．NatBitehnl,2001;19(9)：1029-1034. ［2］KaaiK，SuzukiS，TabataY，etal.Aeleratedtissueregeneratinthrughinrpratinfbasifibrblastgrthfatripregnatedgelatinirspheresintartifiialderis［J］.Biaterial，2000;21：489-499. ［3］KinsellaL，henHL，SithJA，etal．Interatinsfputativeheparinbindingdainsfbasifibrblastgrthfatranditsreeptr，FGFR1，ithheparinusingsynthetipeptides［J］．GlynjJ，1998；15：419-422． ［4］aysingerD，KrieglstEinK，FilipviJ，etal．irenapsulatediliaryneurtrphifatr：Physialprpertiesandbilgialativities［J］．ExpNeurl，1996；138：177-l88． ［5］黄沙，金岩,吴红.制备复合生长因子的缓释微球并观察其对细胞的影响［J］.上海生物医学工程,2022；25〔4〕：22-25. HuangS,JinY,uH.PreparatinandelleffettestfbFGFipregnantedirspheres［J］.ShanghaiBiedEng,2022；25〔4〕：22-25. ［6］EdelanER，athiitzE,langerR,etal.ntrlledanddulatedreleasefbasifibrblastgrthfatr［J］．Biaterial,1991；12:619-626.。