石蜡切片的制作试验药品和仪器试验药品：酒精、二甲苯、石蜡、番红、固绿、冰醋酸、甲醛、明胶、甘油 石碳酸、中性树胶试验仪器：石蜡切片机、组织包埋机、水浴锅、染缸、烘箱试验方法1 叶片组织结构的观察对叶片组织结构的观察采用石蜡切片法具体操作步骤如下：1. 取材选取生长良好的叶片，用水清洗干净，擦干，沿主脉切取2mmX5mm 的小段2. 固定将切取的植物材料立即放入FAA固定液中（材料与固定液比例 1:20），用真空泵抽气（使固定液尽快渗入材料中，并排除材料内气泡的干扰）， 固定时间48h以上FAA固定液配方：50%酒精、冰乙酸、甲醛（37%-40%）按 18:1:1的比例配置3. 冲洗材料从固定液中取出后，用70%的酒精冲洗3次，每次间隔2h，并 在70%酒精中过夜4. 脱水酒精为常用脱水剂，它既能与水相混合，又能与透明剂相混，为 了减少组织材料的急剧收缩，应使用从低浓度到高浓度递增的顺序进行： 70%酒 精一80%酒精一95%酒精一无水酒精一无水酒精，每级酒精中放2h,无水酒精分 2次，一次2h5. 透明纯酒精不能与石蜡相溶，还需用能与酒精和石蜡相溶的媒浸液， 替换出组织内的酒精材料块在这类媒浸液中浸渍，出现透明状态，此液即称透 明剂，透明剂浸渍过程称透明。
通常组织先经纯酒精和透明剂各半的混合液浸渍 1〜2小时，再转入纯透明剂中浸渍具体为：1/3二甲苯+2/3无水酒精（加番红 染色，以便透明后找到材料） 一1/2二甲苯+1/2无水酒精一2/3二甲苯+1/3无水酒 精一二甲苯一二甲苯，每级二甲苯中放2h，纯二甲苯分2次，每次放lh材料进 入无水的透明剂中后，若透明剂变浑浊，说明材料中的水分未脱干净，必须回到 前面一级无水的脱水剂中再次脱水6. 浸蜡夏季采用熔点较高的石蜡（ 56-58）,冬季宜选用熔点较低的石蜡 （52-54）新蜡应溶一次，增加密度，反复溶的旧蜡包埋效果更好在溶蜡箱 中进行55-60°C，恒温二甲苯透明后的组织块在二甲苯：石蜡（1：1 ）中1次， 在石蜡中2次，每次3h左右7. 包埋在室温进行，在包埋盒上做好标记8. 修块将包埋好的石蜡块修成梯形或长方形块状，粘于小木块上9. 切片粘片与通常切片厚度为8〜12微米，切出一片接一片的蜡带，用毛 笔轻托轻放在纸上在载玻片上先滴一滴甲液，用小拇指涂匀，然后再滴数滴乙 液，用镊子把选好的蜡带放到载玻片上，用粘附剂将展平的蜡片牢附于载玻片上， 以免在以后操作中使材料脱落常用的粘片剂一郝伯特（Haupt）粘贴剂：甲液： 动物胶1克+馏水100毫升+甘油15毫升+石碳酸2克，乙液：甲醛4毫升+蒸馏水100 毫升。
10. 展片将载玻片放入36C的水浴锅中（水上铺塑料薄膜，薄膜上放载玻 片，以防蜡带过轻在水中漂浮）进行展片11. 干片待蜡带展好后，把载玻片放进恒温箱（36C ）进行干片，以免蜡 带从载玻片上脱离，一般24h12. 染色其顺序如下：二甲苯 7/3二甲苯+1/3纯酒精— 1/2二甲苯+1/2 纯酒精—1/3二甲苯+2/3纯酒精—100%酒精—95%酒精—85%酒精—70%酒精 —50％酒精—番红染液—70％酒精—85％酒精—固绿染液—95％酒精—100%酒 精—100%酒精—1/3 二甲苯+2/3纯酒精—1/2 二甲苯+1/2纯酒精2/3 二甲苯+1/3 纯酒精一二甲苯一二甲苯载玻片在每步中停放4min,在番红染液中放8h-12h 番红染液：0.1g番红溶入70%酒精定溶至100ml固绿染液：0.1g固绿溶入95%酒 精定溶至100ml13. 封片二甲苯透明后，将载玻片从二甲苯中取出，务必使有材料的一面 朝上，迅速在材料上加适量（1〜2滴）中性树胶，再将洁净盖玻片倾斜放下，以 免出现气泡加拿大树胶溶于二甲苯中成为 ——二甲苯-加拿大树胶液绝对不 能混入水和酒精，否则树胶回浑浊，不能观察。
14. 干片将封片后的载玻片放入恒温箱（36°C ）中进行干片，贴上标签， 制成永久切片，避光保存15. 观察在Olympus光学显微镜下观察并测量其叶片厚度、栅栏组织及海 绵组织厚度，每一样片观察10 个视野2 叶片气孔结构的观察对叶片气孔结构的观察，采用透明胶带粘取法具体方法为 :塑料透明胶带 拉开10-15cm，胶面朝上，平放在实验台面上带叶柄剪去植物叶片，用滤纸迅 速吸干表面水分左手捏住叶柄，将叶片正面粘在胶带上在粘贴过程中，先将 叶尖粘在胶带上，然后将叶片向叶背面弯曲，逐渐向前推移，使叶片正面与胶带 充分接触为了防止粘贴过程中叶片皱缩，应右手持解剖针，置于叶片与胶带之 间进行调整，使叶片平整地粘贴在胶带上然后剪去叶柄将胶带对折过来平整 地粘贴在叶片的背面然后用手指对捏胶带，使胶带与叶片的两面充分粘着将 对折的胶带撕开，叶片的正面仍紧密贴在胶带上，叶片的背面与胶带分离，并将 叶片下表皮粘贴在胶带上若叶面附着物较多，胶带不能与表皮紧密粘着时，可 用胶带连续重复粘贴叶片，直到粘去附着物后，粘取下表皮为了防止粘取的表 皮材料相互重叠，在连续重复粘贴时，应更换胶带新的部位粘着表皮将带叶片 下表皮的胶带沿表皮轮廓剪成3mmx5m m的矩形片。
在载玻片上滴1滴蒸馏水，将 带叶片表皮的胶带胶面向下放在载玻片上,盖上盖玻片，压平后镜检气孔密度及大小的测定：采取“印痕法”在叶的背面，避开主脉及边缘，先用 胶带把叶片上的表皮毛粘净，然后再涂一层薄而均匀的无色指甲油，面积大约 1cm2，待指甲油干后，用胶带取下用于制片，将制成的片子置于10X10T的生物 显微镜下观察，每个片随机观察10 个视野，记录每个视野的气孔总数，并随机 测定5个气孔的纵径和横径，最后计算出平均密度（ 1个视野内， r=0.91mm）、 纵径和横径，并进行差异显著性分析气孔数目的统计方法：在显微镜下计算视野中气孔的数目，移动载玻片在表 皮的不同部位作同样的气孔计数，连续计数4〜5次，求其平均值然后，用镜台 测微尺量得显微镜视野的直径，其半径r则为已知，计算出视野面积S=3.14r2，根 据观察所得的各个平均值分别求出每种植物上下表皮的气孔密度，单位为“气孔 数 / mm2 ”。