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1、紫外分光光度法测定维生素 C 和维生素 E 含量【摘要】本实验利用紫外分光光度法测定由维生素C和维生素E组成 的混合物中各组分的浓度。在这两种组分组成的混合物中，彼此都不 影响另一种物质的光吸收性质，根据相互间光谱的重叠的程度采用相 对的方法进行定量测定。【关键词】紫外分光光度法；维生素C；维生素E；浓度1、引言维生素C （抗坏血酸）和维生素E（a-生育酚）在食品中能起抗氧 化剂作用，即它们在一定时间内防止油脂变性。两者结合在一起比单 独使用的效果更佳，因为它们在抗氧化性能方面是“协同的”。因此， 它们作为一种有用的组合试剂用于各种食品中。维生素 C 是水溶性 的，维生素E是酯溶性的，它们都能
2、溶于无水乙醇，因此能在同一溶 液中，能够利用紫外可见分光光度法测定双组分相同的原理，在紫外 光区测定它们。2、实验原理根据朗伯比尔定律，用紫外可见分光光度法很容易定量测定 在此光谱区内有吸收的单一成分。由两种组分组成的混合物中，若彼 此都不影响另一种物质的光吸收性质，可根据相互间光谱重叠的程 度，采用相对的方法来进行定量测定。例如，当两组分吸收峰部分重 叠时，选择适当的波长，仍可按测定单一组分的方法处理；但当两组 分吸收峰大部分重叠时，则宜采用解联立方程组或双波长法等方法进 行测定。混合组分中在入处的吸收等于组分A和组分B分别在入处的吸11光度之和AA+B，即：入1ABAA+B = KbcA
3、+ K bcB入1入1入1同理，混合组分在入处吸光度之和AA+B应为：2入2ABAA+B = K A bcA + K B bcB 入2入2入2若先用A、B组分的标样，分别测的A、B两组分在入和入处的12摩尔吸收系数KA、KA、KB、KB ;当测的未知试样在入和入 入1入2入1入21处的吸光度AA+B和AA+B后，解下列二元一次方程组：1入1入2ABAA+B = K A bcA + K B bcB入1入1入1ABAA+B = K A bcA + K B bcB入2入2入2即可求得A、B两组分各自的浓度cA和CB。CA =(AA+B K B 一 AA+B K B )/ (K A K B一 K A
4、K B )入1入2入2入1入1入2入2入1CB =(AA+B K A CA ) /kb入1入1入1一般来说，为了提高检测的灵敏度，入1和入2宜分别选择在A、B 两组分最大吸收峰处或其附近。3、紫外分光光度法测定维生素C和维生素E含量3.1、仪器试剂仪器：紫外-可见分光光度计(天津港东UV-4501S),石英吸收 池一对试剂：维生素C (抗坏血酸)，维生素E(a-生育酚)，无水乙醇3.2、实验步骤3.2.1、 检查仪器开机预热20min，并调试至正常工作状态。3.2.2、配制系列标准溶液(1) 配制维生素C系列标准溶液：称取0.0132g维生素C,溶 于无水乙醇中，定量转移入1000 mL容量瓶
5、中，用无水乙醇稀释至标 线，摇匀。此溶液浓度为7.50XlO-5mol/L。分别吸取上述溶液4.00 mL, 6.00 mL, 8.00 mL, 10.00 mL于4只洁净干燥的50 mL容量瓶 中，用无水乙醇稀释至标线，摇匀。(2) 配制维生素E系列标准溶液：称取维生素E0.0488g，溶于 无水乙醇中，定量转移入1000 mL容量瓶中，用无水乙醇稀释至标线, 摇匀。此溶液浓度为1.13X10-4mol/L.分别吸取上述溶液4.00mL, 6.00 mL, 8.00 mL, 10.00 mL于4只洁净干燥的50mL容量瓶中，用 无水乙醇稀释至标线，摇匀。3.2.3、绘制吸收光谱曲线以无水乙醇
6、为参比，在220320 nm范围测定维生素C和维生素 E的吸收光谱曲线，确定维生素C和维生素E的最大吸收波长入maxVc 和入maxVe，分别作为入和入2。3.2.4、绘制标准曲线(1) 维生素C标准曲线：以无水乙醇为参比，分别在波长入和入2 处测定5个维生素C标准溶液的吸光度值。(2) 维生素E标准曲线：以无水乙醇为参比，分别在波长入和入2 处测定5个维生素E标准溶液的吸光度值。3.2.5、 未知液的测定取未知液5.00 mL于50mL容量瓶中，用无水乙醇稀至标线，摇匀.在波长入和入2处分别测定其吸光度。结束工作（1）实验完毕，关闭电源。取出吸收池，清洗晾干后入盒保存（2）清理工作台，罩上仪
7、器防尘罩，填写仪器使用记录。4、实验数据处理4.1、人、入2测定红色曲线维生素 C 光度吸收曲线黑色曲线维生素 E 光度吸收曲线由仪器作图分析直接可得入=273.1nm，入=291.9nm。124.2、Vc与Ve在入、入2处的光度吸收图Vc/Ve (mL)Vc1=8Vc2=12Vc3=16Vc4=20Ve1=8Ve2=12Ve3=16Ve4=20未知入=273.1nm10.0590.06280.06790.07210.06080.0630.06680.06820.068入=291.9nm20.04030.04190.04250.04380.05740.06490.07520.08160.072
8、44.3、Vc与Ve的标准曲线图Vc在入 处的线性回归方程为：y=1480x+0.04991, k Vc =1480.1入1Vc在入处的线性回归方程为：y=370x+0.03824,KVc = 370.2X 2Ve 在入处的线性回归方程为：y=575.22124x+0.0556,KVe = 575.22124.1 X 1Ve 在入 处的线性回归方程为：y=1834.070x+0.04076, k Ve =1834.070.2 X 24.4、Vc、Ve的浓度AA+B =0。068X1AA+b=0。 0724X2K Vc =1480 K Vc = 370 K Ve = 575.22124X 1X
9、2X 1VeK Ve =1834.070X2代入下式有ca =(Aa+b k B一 Aa+b k B )/ (k AX1 X2 X2 X1X1KBKAX2X2BX1cA=3.32 X 10-5mol/L代入下式有CB =(AA+B K A CA ) /KBX 1X 1X 1cb = 3.28 x 10-5mol/L5、结果分析与讨论在本实验中，要用石英比色皿而不能用玻璃比色皿，这是因为一 般紫外光区用石英比色皿，可见光区用玻璃比色皿。石英比色皿可用 在全波段,玻璃比色皿只能用于340nm以上波长，因为玻璃不透紫外 光。本实验中所用的参比溶液为乙醇，参比溶液又叫空白溶液，测量 时用作比较的、不含
10、被测物质但其基体尽可能与试样溶液相似的溶 液，主要是用作空白调零，即直接从仪器上减去空白试验产生的干扰 值。因此本实验中根据维生素C、E的溶解性质，需要用乙醇作为本 次实验的参比溶液而不是水。紫外可见光度法测定参数是吸光度A，该值与入射光强度和透射 光比值有关，入射光增大，透射光也增大，增大检测器的放大倍数， 也影响入射光和透射光的检测，而且除待测物之外，其它物质也可能 对入射光产生吸收，因此限制了灵敏度。对于低浓度的待测液该方法 的可信度也较低，假如一种待测物质含量很低的样品用紫外可见法分 析，如果透过率为T = 99/100，则吸光度A=logl00/99 = 0.004，这 个吸光值很低，几乎与噪声相近，可信度下降，几乎无法确定。
