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1、 本章主要学习内容和要求本章主要学习内容和要求本章主要学习内容和要求本章主要学习内容和要求主要学习内容主要学习内容主要学习内容主要学习内容要求要求要求要求基因诊断基因诊断基因诊断基因诊断 的含义的含义的含义的含义 PCRPCRPCRPCR技术在临床上的应用技术在临床上的应用技术在临床上的应用技术在临床上的应用SNPSNPSNPSNP技术在临床的应用进展技术在临床的应用进展技术在临床的应用进展技术在临床的应用进展掌握掌握掌握掌握 第十七章第十七章 基因诊断技术及其临床应用进展基因诊断技术及其临床应用进展 核酸分子杂交技术的原理及应用核酸分子杂交技术的原理及应用核酸分子杂交技术的原理及应用核酸分子
2、杂交技术的原理及应用DNADNADNADNA测序技术的原理及应用测序技术的原理及应用测序技术的原理及应用测序技术的原理及应用肿瘤相关基因检测肿瘤相关基因检测肿瘤相关基因检测肿瘤相关基因检测熟悉熟悉熟悉熟悉了解了解了解了解PCR-SSCPPCR-SSCPPCR-SSCPPCR-SSCP技术的原理及应用技术的原理及应用技术的原理及应用技术的原理及应用有关高血压、糖尿病等疾病基因诊断进展有关高血压、糖尿病等疾病基因诊断进展有关高血压、糖尿病等疾病基因诊断进展有关高血压、糖尿病等疾病基因诊断进展上一页上一页下一页下一页返回返回第一节第一节 概概 述述一、一、基因诊断的含义基因诊断的含义基因诊断的含义基
3、因诊断的含义 基基基基因因因因诊诊诊诊断断断断是是是是用用用用直直直直接接接接探探探探查查查查基基基基因因因因的的的的存存存存在在在在和和和和缺缺缺缺陷陷陷陷技技技技术术术术，对对对对人人人人类类类类状状状状态态态态和和和和疾疾疾疾病病病病做做做做出出出出诊诊诊诊断断断断的的的的方方方方法法法法。它它它它是是是是以以以以遗遗遗遗传传传传物物物物质质质质（如如如如：DNADNADNADNA或或或或RNARNARNARNA）为为为为检检检检查查查查对对对对象象象象，利利利利用用用用分分分分子子子子生生生生物物物物学学学学技技技技术术术术，通通通通过过过过检检检检查查查查基基基基因因因因的的的的结结
4、结结构构构构或或或或表表表表达达达达量量量量的的的的多多多多少少少少来来来来诊诊诊诊断断断断疾疾疾疾病病病病的的的的方方方方法法法法。这这这这里里里里的的的的遗遗遗遗传传传传物物物物质质质质既既既既可可可可是是是是外外外外源源源源性性性性基基基基因因因因（如如如如侵侵侵侵入入入入机机机机体体体体的的的的病病病病毒毒毒毒、细细细细菌菌菌菌、支支支支原原原原体体体体等等等等病病病病原原原原微微微微生生生生物物物物的的的的基基基基因因因因），也也也也可可可可以以以以是是是是内内内内源源源源性性性性的的的的基基基基因因因因（如如如如癌癌癌癌基基基基因因因因、抑抑抑抑癌癌癌癌基基基基因因因因或或或或突突
5、突突变变变变的的的的基基基基因因因因等等等等）。主主主主要要要要用用用用于于于于感感感感染染染染性性性性疾疾疾疾病病病病病病病病原原原原体体体体诊诊诊诊断断断断、先先先先天天天天遗遗遗遗传传传传性性性性疾疾疾疾病病病病诊诊诊诊断断断断、基基基基因因因因突突突突变变变变性性性性疾疾疾疾病病病病（如肿瘤）诊断、产前诊断、亲子鉴定和法医物证等。（如肿瘤）诊断、产前诊断、亲子鉴定和法医物证等。（如肿瘤）诊断、产前诊断、亲子鉴定和法医物证等。（如肿瘤）诊断、产前诊断、亲子鉴定和法医物证等。基基基基因因因因诊诊诊诊断断断断的的的的内内内内容容容容主主主主要要要要包包包包括括括括有有有有：基基基基因因因因突
6、突突突变变变变检检检检测测测测；基基基基因因因因连锁分析；基因表达分析；病原体诊断等等。连锁分析；基因表达分析；病原体诊断等等。连锁分析；基因表达分析；病原体诊断等等。连锁分析；基因表达分析；病原体诊断等等。上一页上一页下一页下一页返回返回 二、分子生物学诊断的对象及在诊断中的位置二、分子生物学诊断的对象及在诊断中的位置 转录转录 翻译翻译 分泌和表达分泌和表达 DNA 核膜核膜 蛋白蛋白 细胞膜细胞膜 临床表现临床表现 mRNA 功能性产物功能性产物 核酸诊断核酸诊断 生化诊断生化诊断 血清学诊断血清学诊断 临床诊断临床诊断 （基因诊断）（基因诊断）（酶法测定）（酶法测定）（血清蛋白）（血清
7、蛋白）上一页上一页下一页下一页返回返回第二节第二节 基因诊断技术及其原理基因诊断技术及其原理聚合酶链反应（聚合酶链反应（PCRPCR）PCR-PCR-单链构象多态性（单链构象多态性（SSCPSSCP）限制性片段多态性（限制性片段多态性（RFLPRFLP）等位基因特异性寡核苷酸分析（等位基因特异性寡核苷酸分析（ASOASO）基因芯片技术（基因芯片技术（gene chipgene chip）逆转录逆转录PCRPCR（RTRTPCRPCR）核酸分子杂交核酸分子杂交STRSTR技术技术单核苷酸多态性单核苷酸多态性(SNP)(SNP)DNADNA测序技术测序技术上一页上一页下一页下一页返回返回rever
8、se primerforward primer3553553553553553553PCRPCR的原理的原理链式反应的雪崩效应链式反应的雪崩效应355355335535533553553355355335535533553553上一页上一页下一页下一页返回返回PCRPCR技术的分类技术的分类 免疫免疫PCRPCR（ImmunoImmunoPCRPCR，I-PCRI-PCR）套式引物套式引物PCRPCR（Nested primer PCRNested primer PCR）反转录反转录 PCRPCR（Reverse transcription Reverse transcription PCRP
9、CR，RT-PCRRT-PCR）反向反向PCRPCR（Reverse PCRReverse PCR）标记标记PCRPCR（LabelledLabelled primers PCR primers PCR）不对称不对称PCRPCR（Asymmetric PCRAsymmetric PCR）玻片玻片PCRPCR（SlidePCRSlidePCR）定量定量PCR PCR 锚定锚定PCRPCR（Anchored PCRAnchored PCR）上一页上一页下一页下一页返回返回二、核酸分子杂交技术二、核酸分子杂交技术 核核酸酸分分子子杂杂交交是是指指两两条条互互补补单单链链核核酸酸（DNADNA或或RN
10、ARNA）在在一一定定条条件件下下按按碱碱基基互互补补配配对对原原则则退退火火形形成双链的过程。成双链的过程。它它是是研研究究核核酸酸结结构构与与功功能能的的常常用用技技术术。杂杂交交的的双双方方是是探探针针与与待待检检核核酸酸，杂杂交交后后形形成成的的双双链链分分子子称称为为杂杂交交分分子子（DNADNADNADNA、DNADNARNARNA或或RNARNARNARNA）。）。上一页上一页下一页下一页返回返回（一）（一）（一）（一）SouthernSouthernSouthernSouthern印迹杂交印迹杂交印迹杂交印迹杂交 英英英英国国国国人人人人SouthernSouthernSout
11、hernSouthern于于于于1975197519751975年年年年创创创创建建建建。其其其其基基基基本本本本方方方方法法法法是是是是将将将将待待待待检检检检测测测测的的的的DNADNADNADNA分分分分子子子子用用用用/不不不不用用用用限限限限制制制制性性性性内内内内切切切切酶酶酶酶消消消消化化化化后后后后，通通通通过过过过琼琼琼琼脂脂脂脂糖糖糖糖凝凝凝凝胶胶胶胶电电电电泳泳泳泳进进进进行行行行分分分分离离离离，继继继继而而而而将将将将其其其其变变变变性性性性并并并并按按按按其其其其在在在在凝凝凝凝胶胶胶胶中中中中的的的的位位位位置置置置转转转转移移移移到到到到硝硝硝硝酸酸酸酸纤纤纤纤
12、维维维维素素素素薄薄薄薄膜膜膜膜或或或或尼尼尼尼龙龙龙龙膜膜膜膜上上上上，固固固固定定定定后后后后再再再再与与与与同同同同位位位位素素素素或或或或其其其其他他他他标标标标记记记记物物物物标标标标记记记记的的的的DNADNADNADNA或或或或RNARNARNARNA探探探探针针针针进进进进行行行行反反反反应应应应。如如如如果果果果待待待待检检检检物物物物中中中中含含含含有有有有与与与与探探探探针针针针互互互互补补补补的的的的序序序序列列列列，则则则则两两两两者者者者通通通通过过过过碱碱碱碱基基基基互互互互补补补补的的的的原原原原理理理理进进进进行行行行结结结结合合合合，洗洗洗洗涤涤涤涤游游游游
13、离离离离探探探探针针针针后后后后用用用用自自自自显显显显影影影影或或或或其其其其他他他他合合合合适适适适的的的的技技技技术术术术进进进进行行行行检检检检测测测测，从从从从而而而而显显显显示示示示出出出出待待待待检检检检的片段及其相对大小。的片段及其相对大小。的片段及其相对大小。的片段及其相对大小。临临临临床床床床上上上上主主主主要要要要用用用用于于于于进进进进行行行行疾疾疾疾病病病病的的的的连连连连锁锁锁锁分分分分析析析析、基基基基因因因因缺缺缺缺失失失失诊诊诊诊断断断断。由由由由于于于于DNADNADNADNA印印印印迹迹迹迹杂杂杂杂交交交交技技技技术术术术相相相相对对对对较较较较烦烦烦烦琐
14、琐琐琐，需需需需要要要要的的的的DNADNADNADNA量量量量较较较较大大大大,在在在在取取取取材材材材量量量量受限的疾病诊断中已被其他方法所取代。受限的疾病诊断中已被其他方法所取代。受限的疾病诊断中已被其他方法所取代。受限的疾病诊断中已被其他方法所取代。上一页上一页下一页下一页返回返回（二）（二）（二）（二）NorthernNorthernNorthernNorthern印迹杂交印迹杂交印迹杂交印迹杂交 是是是是一一一一种种种种研研研研究究究究 RNARNARNARNA的的的的方方方方法法法法，可可可可用用用用于于于于测测测测定定定定细细细细胞胞胞胞的的的的总总总总RNARNARNARNA
15、或或或或mRNAmRNAmRNAmRNA分分分分子子子子量的大小。量的大小。量的大小。量的大小。其基本原理和基本过程与其基本原理和基本过程与其基本原理和基本过程与其基本原理和基本过程与SouthernSouthernSouthernSouthern杂交相似，不同之处在于：杂交相似，不同之处在于：杂交相似，不同之处在于：杂交相似，不同之处在于：NorthernNorthernNorthernNorthern印印印印迹迹迹迹杂杂杂杂交交交交检检检检测测测测的的的的对对对对象象象象为为为为RNARNARNARNA，而而而而SouthernSouthernSouthernSouthern印印印印迹迹迹
16、迹杂杂杂杂交交交交检检检检测的是测的是测的是测的是DNADNADNADNA。NorthernNorthernNorthernNorthern印印印印迹迹迹迹杂杂杂杂交交交交是是是是在在在在RNARNARNARNA电电电电泳泳泳泳前前前前对对对对其其其其进进进进行行行行变变变变性性性性，并并并并在在在在电电电电泳泳泳泳时时时时加加加加入入入入变变变变性性性性剂剂剂剂，使使使使RNARNARNARNA电电电电泳泳泳泳时时时时保保保保持持持持变变变变性性性性状状状状态态态态，而而而而SouthernSouthernSouthernSouthern印印印印迹迹迹迹杂杂杂杂交是在电泳后进行变性。交是在电泳后进行变性。交是在电泳后进行变性。交是在电泳后进行变性。上一页上一页下一页下一页返回返回（三）斑点杂交（三）斑点杂交（三）斑点杂交（三）斑点杂交 斑斑斑斑点点点点杂杂杂杂交交交交（dot dot dot dot blottingblottingblottingblotting）即即即即狭狭狭狭缝缝缝缝杂杂杂杂交交交交，其其其其基基基基本本本本原原原原理理理理是是是是将将将将被被被被检检检检样样样
