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1、食品中农药及兽药残留的测定食品中农药及兽药残留的测定 第四章第四章食品中农药及兽药残留的测定食品中农药及兽药残留的测定第一节第一节 食品中农药残留的测定食品中农药残留的测定第二节第二节 食品中兽药的测定食品中兽药的测定食品中农药及兽药残留的测定食品中农药及兽药残留的测定第一节第一节 食品中农药残留的测定食品中农药残留的测定 一、食品中有机氯农药残留量的测定一、食品中有机氯农药残留量的测定 （一）气相色谱法（一）气相色谱法 1、原理、原理 样品中六六六、滴滴涕经提取、净化后用气相色谱法测定，与标准比较定量。电子捕获检测器对于电负性强的化合物具有较高的灵敏度，利用这一特点，可分别测出微量的六六六和
2、滴滴涕。在适合的色谱条件下，不同异构体和代谢物可同时分别测定。食品中农药及兽药残留的测定食品中农药及兽药残留的测定 2 2、试剂、试剂 使用的试剂一般系分析纯，有机溶剂需经重蒸馏。丙酮、正己烷石油醚（沸程3060）、苯、硫酸、无水硫酸钠、硫酸钠溶液（20g/L）。六六六、滴滴涕标准使用液 将上述标准储备液以己烷稀释至适宜浓度，一般为0.01g/mL。3 3、仪器仪器 小型粉碎机、小型绞肉机、组织捣碎机、电动振荡器、旋转浓缩蒸发器、吹氮浓缩器、气相色谱仪：具有电子捕获检测器（ECD）。食品中农药及兽药残留的测定食品中农药及兽药残留的测定 4 4、测定步骤、测定步骤 （1）提取 称取具有代表性的样
3、品（适用于生的及烹调加工过的蔬菜、水果或谷类、豆类、肉类、蛋类）约200g，加适量水，于捣碎机中捣碎，混匀。称取匀浆2.005.00g，于50mL具塞三角瓶中，加1015mL丙酮，在振荡器上振荡30min，过滤于100mL分液漏斗中，残渣用丙酮洗涤四次，每次4mL，用少许丙酮洗涤漏斗和滤纸，合并滤液3040mL，加石油醚20mL，摇动数次，放气。振摇lmin，加20mL硫酸钠溶液（20g/L），振摇1min，静置分层，弃去下层水溶液。用滤纸擦干分液漏斗颈内外的水，然后将石油醚液缓缓放出，经盛有约10g无水硫酸钠的漏斗，滤入50mL三角瓶中。再以少量石油醚分三次洗涤原分液漏斗、滤纸和漏斗，洗液并
4、入滤液中，将石油醚浓缩，移入10mL具塞试管中，定容至5.0mL或10.0mL。食品中农药及兽药残留的测定食品中农药及兽药残留的测定 称取具有代表性的乳样品2.00g，于10mL具塞试管中，加4mL丙酮，振摇lmin，加4mL石油醚，振摇lmin。静置分层。将上层石油醚溶液移入另一25mL具塞试管中，再加lmL石油醚于原试管中，不摇。取出上层石油醚合并于25mL试管中，重复两次。再加与石油醚等体积的硫酸钠溶液（20g/L），摇混，分层。将上层石油醚溶液取出经无水硫酸钠滤入10mL具塞试管中，再加lmL石油醚于原25mL试管中，不摇。取出上层液合并于10mL试管中，重复两次。提取液定容至4.0m
5、L。称取具有代表性的均匀食用油样品0.50g以石油醚溶解于10mL试管中，定容至10.0mL。食品中农药及兽药残留的测定食品中农药及兽药残留的测定 （2）净化 5.0mL提取液加0.50mL浓硫酸，盖上试管塞。振 摇 数 次 后，打 开 塞 子 放 气，然 后 振 摇 0.5min，于1600r/min，离心15min，上层清液，供气相色谱法分析用。（3）测定 .气相色谱参考条件 色谱柱 内径34mm，长1.22m的玻璃柱，内装涂以OV-17（15g/L）和QF-1（20g/L）的混合固定液的80100目硅藻土。Ni-电子捕获检测器 汽化室温度：215；色谱柱温度：195；检测器温度：225；
6、载气（氮气）流速：90mL/min；纸速：0.5cm/min。食品中农药及兽药残留的测定食品中农药及兽药残留的测定 测量与计算 电子捕获检测器的线性范围窄，为了便于定量，选择样品进样量使之适合各组分的线性范围。根据样品中六六六、滴滴涕存在形式，相应的制备各组分的标准曲线，从而计算出样品中的含量。六六六、滴滴涕及异构体或代谢物含量按下式计算。式中 X样品中六六六、滴滴涕及其异构体或代谢物的单一含量，mg/kg；Al被测定用样液中六六六或滴滴涕及其异构体或代谢物的单一含量，ng；V1样品净化液体积，mL；V2样液进样体积，L；m1样品质量，g。结果的表述：报告平行测定的算术平均值的二位有效数。允许
7、差：相对误差15。食品中农药及兽药残留的测定食品中农药及兽药残留的测定 （二）薄层色谱法（二）薄层色谱法 1 1原理原理 样品中六六六、滴滴涕经有机溶剂提取，并经硫酸处理，除去干扰物质，浓缩，点样展开后，用硝酸银显色，经紫外线照射生成棕黑色斑点，与标准比较，可概略定量。2 2分析步骤分析步骤（1）提取、净化 同气相色谱法。（2）薄层板的制备 称取氧化铝G4.5g，加lmL硝酸银溶液（10g/L）及6mL水，研磨至糊状，立即涂在三块5cm20cm的薄层板上，涂层厚度0.25mm，于100烘0.5h，置于干燥器中，避光保存。食品中农药及兽药残留的测定食品中农药及兽药残留的测定 （3）点样 离薄层板
8、底端2cm处，用针划一标记。在薄层板上点110L样液和六六六、滴滴涕标准溶液，一块板可点34个。中间点标准溶液，两边点样品溶液。也可用滤纸移样法点样。（4）展开 在展开槽中预先倒入10mL丙酮-己烷（1+99）或丙酮-石油醚（1+99）。将经过点样的薄层板放入槽内。当溶剂前沿距离原点1012cm时取出，自然挥干。（5）显色 将展开后的薄层板喷以10mL硝酸银显色液，干燥后距紫外灯8cm处照1020min，六六六、滴滴涕等全部显现棕黑色斑点。食品中农药及兽药残留的测定食品中农药及兽药残留的测定 3 3计算计算 式中 X样品中六六六、滴滴涕及其异构体或代谢物的单一含量，mg/kg；A被测定用样液中
9、六六六或滴滴涕及其异构体或代谢物的单一含量，g；V1样品浓缩液总体积，mL；V2点板样液体积，L；m样品质量，g。结果的表述：报告平行测定的算术平均值的二位有效数。允许差：相对误差15。食品中农药及兽药残留的测定食品中农药及兽药残留的测定二、食品中有机磷农药残留量的测定二、食品中有机磷农药残留量的测定有机磷农药种类很多，按照其结构可分为磷酸酯和硫化磷酸酯两大类，常见的有机磷农药有：内吸磷（又名1059）、对硫磷（又名1605）、甲拌磷（又名3911）、敌敌畏（DDVP）、敌百虫、乐果、马拉硫磷（又名4049）、倍硫磷、杀螟硫磷（又名杀螟松）、稻瘟净（又名EBP）等，此外还有毒性很高的甲基对硫磷
10、、乙基对硫磷（E-1605）、甲胺磷等。有机磷农药残留的测定常采用气相色谱法、薄层色谱-酶抑制法等。食品中农药及兽药残留的测定食品中农药及兽药残留的测定（一）水果、蔬菜、谷类中有机磷农药的多残留测定方法一）水果、蔬菜、谷类中有机磷农药的多残留测定方法 1 1.原理原理 含有机磷的样品在富氢焰上燃烧，以HPO碎片的形式，放射出波长526nm的特性光；这种光通过滤光片选择后，由光电倍增管接收，转换成电信号，经微电流放大器放大后被记录下来。样品的峰面积或峰高与标准品的峰面积或峰高进行比较定量。2 2.试剂试剂丙酮、二氯甲烷、氯化钠、无水硫酸钠、助滤剂Celite545、含磷农药标准品。含磷农药标准溶
11、液的配制 分别准确称取标准品，用二氯甲烷为溶剂，分别配制成1.0mg/mL的标准储备液，储于冰箱（4）中，使用时用二氯甲烷稀释配成单一品种的标准使用液（1.0g/mL）。再根据各农药品种的食品相应值或最小检测限，吸取不同量的标准储备液，用二氯甲烷稀释成混合标准使用液。食品中农药及兽药残留的测定食品中农药及兽药残留的测定 3 3.仪器仪器组织捣碎机、粉碎机、旋转蒸发仪、气相色谱仪：附有火焰光度检测器（FPD）4 4.试样的制备试样的制备 取粮食样品经粉碎机粉碎，过20目筛制成粮食试样；取水果、蔬菜样品洗净，晾干，去掉非可食部分后制成待分析试样。5 5.测定步骤测定步骤（1）提取 水果、蔬菜 称取
12、50.00g试样，置于300mL烧杯中，加入50mL水和100mL丙酮（提取液总体积为150mL），用组织捣碎机提取12min。匀浆液经铺有二层滤纸和约10gCelite545的布氏漏斗减压抽滤。从滤液中分取100mL移至500mL分液漏斗中。食品中农药及兽药残留的测定食品中农药及兽药残留的测定 谷物 称取25.00g试样，以下步骤同自“置于300mL烧杯中，加入50mL水和100mL丙酮”起，依法操作。（2）净化 向提取的滤液中加入1015g氯化钠使溶液处于饱和状态。猛烈振摇23min，静置10min，使丙酮从水相中盐析出来，水相用50mL二氯甲烷振摇2min，再静置分层。将丙酮与二氯甲烷提
13、取液合并，经装有2030g无水硫酸钠的玻璃漏斗脱水滤入250mL圆底烧瓶中，再以约40mL二氯甲烷分数次洗涤容器和无水硫酸钠。洗涤液也并入烧瓶中，用旋转蒸发器浓缩至约2mL，浓缩液定量转移至525mL容量瓶中，加二氯甲烷定容至刻度。食品中农药及兽药残留的测定食品中农药及兽药残留的测定 （3）气相色谱测定 色谱参考条件 色谱柱 玻璃柱 2.6m3mm（i.d），填装涂有4.5（m/m）DC-200+2.5（m/m）OV-17的ChromosorbWAWDMCS（80100目）的担体。玻 璃 柱 2.6m3mm（i.d），填 装 涂 有 1.5（m/m）DCOE-1的ChromosorbWAWDM
14、CS（6080目）。气体速度 氮气（N2）50mL/min、氢气（H2）100mL/min、空气50mL/min。温度 柱箱240、汽化室260、检测器270。（4）测定 吸取25L混合标准液及样品净化液注入色谱仪中，以保留时间定性。以试样的峰高或峰面积与标准比较定量。食品中农药及兽药残留的测定食品中农药及兽药残留的测定 6 6.计算计算 式中 Xii组分有机磷农药的含量，mg/kg；Ai试样中i组分的峰面积，积分单位；Asi混合标准液中i组分的峰面积，积分单位；V1试样提取液的总体积，mL；V2净化用提取液的总体积，mL；V3浓缩后的定容体积，mL；V4进样体积，mL；Esi注入色谱仪中的i
15、标准组分的质量，ng；m样品的质量，g。结果的表述：报告算术平均值的二位有效数。相对误差15。食品中农药及兽药残留的测定食品中农药及兽药残留的测定 （二）食品中辛硫磷农药残留量测定方法二）食品中辛硫磷农药残留量测定方法 1 1.原理原理 含有机磷的样品在富氢焰上燃烧，以氢磷氧（HPO）碎片的形式，放射出波长526nm的特征光，这种特征光通过滤光片选择后，由光电倍增管接收，转换成电信号，经微电流放大器放大后，分别记录标准和样品的峰高，以外标法定量样品的含量。2 2.试剂试剂丙酮、石油醚、无水硫酸钠、活性炭（用3mol/L盐酸浸泡过夜，抽滤，用水洗至中性，在120下烘干备用）。食品中农药及兽药残留
16、的测定食品中农药及兽药残留的测定辛硫磷标准品 辛硫磷（phoxim）99。标准溶液的配制 准确称取辛硫磷标准品，用丙酮溶解，配成lmg/mL标准储备液，使用时用丙酮稀释成lg/mL的标准使用液，储藏于冰箱中。3.3.仪器仪器气相色谱仪（带火焰光度检测器）、电动振荡器、K-D浓缩器、索氏提取器、具塞锥形瓶（250mL）、分液漏斗（250mL）。4 4.试样的制备试样的制备 取谷物实验样品，经粉碎机粉碎，过20目筛后，制成谷物试样。取蔬菜和水果实验样品洗净、晾干，去掉非食部分后，剁碎或经组织捣碎机捣碎，制成蔬菜或水果试样。食品中农药及兽药残留的测定食品中农药及兽药残留的测定 5 5.测定步骤测定步骤（1）提取和净化 谷物 称取谷物试样20g，精确至0.001g，置于具塞锥形瓶中，加入50mL石油醚，避光浸提5h，抽滤，残渣用100mL石油醚分三次洗涤，合并滤液过无水硫酸钠，于K-D浓缩器上浓缩，定容至5mL，待气相色谱分析。蔬菜 称取蔬菜试样50g，精确至0.001g，置于具塞锥形瓶中，用石油醚-丙酮（1:1）（V/V）溶液100mL避光浸提12h，后加13g（根据蔬菜色素含量）活性炭振荡
