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1、ABO血型系统及定型血型系统及定型上海市血液中心 郭忠慧l正定型（细胞定型）l用已知抗体特异性的试剂血清检查红细胞的抗原 玻片法 试管法 微量板法ABO常规定型常规定型ABO常规定型常规定型l反定型（血清定型）l用已知血型的试剂红细胞检查血清中的抗体 试管法 微量板法正反定型结果相符时，才可以记录血型结果。ABO正反不符时正反不符时l受检红细胞是洗涤后悬浮于NS.吗?l是用最敏感的试管法吗?l受检者年龄60吗?l病人的丙种球蛋白减低吗?l病人血清与O型普检红细胞的反应与试剂红细胞一样吗?l病人是白血病、肠道阻塞、胃癌、结肠或直肠癌吗？l混合视野反应是输血后标本吗？技术上错误的常见来源技术上错误
2、的常见来源l血液标本或试管鉴定不当l红细胞悬浮液过浓或过淡及纤维蛋白、小血凝块的干扰l人为的书写错误l标本混乱l忽略观察溶血现象l未加入试剂l未按照试剂生产商的说明操作l离心机校准不良l试剂受到污染l温度在离心过程中增高造成正反定型不符的造成正反定型不符的4种变异情况种变异情况l减弱的或减少的抗原反应l未知的抗原反应l减弱的或缺少的抗体反应l未知的抗体反应减弱或减少的抗原反应减弱或减少的抗原反应lA或B抗原的亚血型lA、B及AB型RBC与试剂抗血清作实验时，预期反应：4l细胞分型法减弱的凝集反应：健康献血员可能A/B亚型l抗AB 血清能检出某些不与抗A/抗B试剂发生反应的A/B亚型减弱或减少的
3、抗原反应减弱或减少的抗原反应l疾病状态下,抗原强度减弱l如:A型白血病/肿瘤患者在疾病活动期改变为A2或A3亚型,疾病缓解期复原l疾病状态下,血型物质过量,中和抗A/抗B试剂,造成假阴性/弱凝集:卵巢囊肿 胃癌 胰腺癌 肠道阻塞l对策:试管法 红细胞三洗未知抗原反应未知抗原反应l获得性Al奇异变形杆菌感染的O/B:与抗A反应呈混合视野未知抗原反应未知抗原反应l获得性BlRBC反应象AB型,血清中有抗B抗体l细胞分型法:A抗原B抗原获得性获得性B的成因的成因lGerbal等假设细菌的脱乙酰基酶deactetylases可以将A的免疫结构域糖N乙酰氨基半乳糖胺转化为半乳糖胺。l这个半乳糖胺与B的免
4、疫多糖半乳糖非常的相似，可以与某些抗B发生反应。抗体致敏的红细胞抗体致敏的红细胞l抗体吸附于红细胞表面，可显示直抗阳性l自身免疫性溶血性贫血l抗高血压药物l输血反应l新生儿溶血病l放散技术移去抗体减弱或缺少抗体反应减弱或缺少抗体反应l年龄70l丙球蛋白过低血症l丙球蛋白缺乏血症未知的抗体反应未知的抗体反应l缗钱状凝集l冷自身抗体l未知的ABO同种抗体l未知的其它同种抗体ABO抗体的区别抗体的区别特异性血清其它来源血型频率性 质抗BA全部常属IgM效价 8-512初乳 唾液泪液(IgA)抗ABO、Oh全部常属IgG,与Ax,A3凝集抗A在蜗牛鱼卵中也可发现抗AB全部常属IgM效价 32-2048
5、抗A1A2B A2Ax22-35%1-8%大多数少数报告有输血反应用A2细胞吸收过的抗A血清;双花扁豆(Doliekos biflorus)抗HOh 非Oh全部部分被H物质抑制欧洲荆豆(Ulex europaeus)天然抗体和免疫抗体天然抗体和免疫抗体l天然抗体l未经可察觉的抗原刺激而产生的抗体lO型血清中多为IgG抗A和抗BlA/B型血清中大多为IgM抗体l免疫抗体l妊娠/输血等缗钱状凝集缗钱状凝集l球蛋白浓度增高:多发性骨髓瘤/原发性巨球蛋白血症l纤维蛋白原增高l血管扩张剂l霍奇金淋巴瘤l新生儿脐带血中的华尔道胶冷自身抗体冷自身抗体l抗I是反定型中最常见的自身抗体l有时也见抗i和抗Prl抗
6、I通常凝集所有供者RBC包括患者自身及反定型所用RBCl抗I引起的凝集比抗A抗B所引起的凝集弱l脐带血所带的I抗原量少通常不被凝集抗抗HIl与冷凝集有关的最常见的特异性抗体是抗Il有些冷抗体与I和H抗原强的细胞如（O和A2细胞）反应最强，称之为抗HI联合抗体。冷自身抗体之鉴别冷自身抗体之鉴别l 抗I 抗i 抗H 抗HI 抗Pr 成OI +-+成AI +-+脐Oi -+-+l酶OI +-+l抗HI：O成A2成B/A成脐O脐AB未知的同种抗体未知的同种抗体lABO同种抗体:A2/A2B中的抗A1l A1/A1B中的抗Hl未知的同种抗体:l筛选细胞及反定型中的O细胞l一组谱细胞鉴定抗体特异性ABO亚
7、型亚型lA抗原中主要为A1和A2 l其它A亚型：A3、Ax、Aend、Am、Ay、和AellB亚型一般比A亚型更少：B3、Bx、Bm和Bel等判断判断ABO亚型亚型:l1 红细胞与抗A抗A1抗B及抗AB的凝集程度l2 红细胞上H物质活性的强弱l3 血清中是否存在抗A1l4 分泌型人的唾液中A、B和H物质A1和和A2的鉴别的鉴别项目A1细胞A2细胞与抗A反应42与抗A1反应成人抗原位点100万25万脐血抗原位点31万25万乙酰D半乳糖胺转移酶PH 6时最多PH 7时最多各种弱各种弱A亚型的鉴别程序亚型的鉴别程序红细胞弱凝集混合外观(Mf）A60A3与抗AA3 Ax10 红细胞呈十分弱的mf凝集A
8、end及/或抗Aend只与抗AB呈弱凝集AxA1B反应不凝集容易吸附放散抗AAm能吸附分泌型唾液中有一定量的A物质及放散不容易吸附放散抗AAy抗A分泌型唾液含少量的A物质Am Ay 吸附放散抗AAelAel分泌型唾液只含H物质无A物质A2l与人源性抗A试剂的反应强度为4,与抗H+/2+l可能有不规则抗A1存在 (sometimes)l1-8%A2和22-35%的A2B存在抗 A1l血型物质 A Hl举例 抗A 抗B Ac Bc Ocl 4+4+-A2lA1和A2决定簇的区别是仅存在量的差异l还是抗原决定簇结构不同？l用A2细胞重复吸收来源于B型个体的抗A血清可以移去所有抗体，表明二者之间仅是量
9、的差别。lA2和A2B个体常常产生抗A1，说明A2细胞上缺乏A1细胞上的一种决定簇。血型前体物质：血型前体物质：lType1 Gal13GlcNAc 1R（血清）lType2 Gal14GlcNAc 1R（红细胞）lType3 Gal13GalNAc1R（红细胞）lType4 Gal13GalNAc 1R（红细胞）lType5 Gal13Gal 1R（人工合成）lType6 Gal14Glc 1RA1和和A2同样存在质的区别同样存在质的区别lA1细胞出现重复的3型A抗原结构，但A2细胞却没有。l抗A1是3型或4型A特异性的，或者抗A1可以优先与3型或4型A反应。l只有A1转移酶能够转化3型H加
10、一个N乙酰氨基半乳糖基成为3型Al因此A2细胞上可以检测到3型H而不是3型A抗原。l双花扁豆植物血凝素检测N乙酰氨基半乳糖胺，当过量的浓度下，它可以凝集A2细胞，因此将它用作A亚型分型试剂更多是依赖A1和A2表现型数量上的差异。A3l最早由Friedenreich在1936年描述l与抗A和抗AB共同孵育时：“混合视野外观”（mixed field agglutination）。即：小的凝集块周围是大量未凝集的细胞。l与抗A反应强度低于A2l与抗AB反应呈混合视野,但并不增强l偶有抗A1(occasionally)l血型物质 A HlA3不像是A2和O细胞的嵌合体 Aend（Afinn，Aban
11、tu）lAend最早由Weiner 等于1959年描述l类似于A3细胞：它们与一些抗A和抗AB表现很弱的混合视野外观lAend分泌型的唾液中只有H物质，但是无A物质l抗A1出现在部分Aend个体的血清中l10细胞凝集（Mf）AmlAm细胞不能被抗A和抗AB凝集，或者仅能发生很弱的凝集。Am细胞可以吸附放散抗A。lAm分泌型的唾液中包含正常含量的A和H物质，Am血清中通常无抗A1。lAm作为ABO位点上一个稀有的等位基因遗传lAm在法国献血者的频率是150 000中有1例。（A型人中占0.0015%），中国台湾的数据是400 000万人中1例。Aml抗原性较弱 抗A:-/w+l抗H 4+(甚至会
12、超过Oc)l无抗A1产生,与抗AB反应不增强l血型物质:A HAxlAx表现型最初由Fischer和Hahn于1935年报道，它的主要血清学特点是：l红细胞与多数来源于B型血清的抗A不发生反应，但是可以被大多数来源于O型个体的抗AB凝集，没有混合视野表现。l血清中含有抗A1，后者有时候可以凝集A1和A2细胞。l除了H物质，Ax分泌型个体唾液中可以捡出痕量的A物质Axl抗A:-/w+l抗H:4+(与Oc的抗H差不多)l常有抗A1(Frequently),比A2 A3都高l与抗A+B的反应比抗A明显增强l血型物质 HAxlAx表现型具有很高的遗传异质性：l许多家系资料表明Ax以ABO位点上一种稀有
13、的等位基因的方式遗传l在一些家庭中遗传背景不清楚l在两项独立的研究中，法国Ax的频率为1/77000(A型人中的0.003%)和1/44000 Aintl与抗A1反应较弱 2+l与抗A及抗H反应较强 4+/3+l仅有A1和Aint的细胞与抗A1发生反应AintlLandsteiner和Levine：有些A型个体的红细胞既不能定义为A1也不能定义为A2lAint在黑人中较白人更为常见，lAint是作为ABO位点上的一个等位基因遗传的。l它的H抗原强度象A2一样强，甚至更强。Aell在通常的条件下，Ael细胞与抗A和抗AB不发生凝集，虽然它们可以结合这些抗体，结合的抗体可以通过吸收放散技术检测到l
14、Ael分泌型唾液中无A物质，仅有H物质，血清中常含有抗A1，也可以含有能够凝集A2细胞的抗体Ael l在Ael血清和红细胞膜上不能检出A转移酶。l在法国150000例献血者中，没有检测到Ael表现型，在中国台湾400000人中捡出5例Ael个体lAel以ABO位点上的一种稀有的等位基因遗传的。AwlOlsson等l对其它弱A亚型的ABO基因的外显子、剪切部位和启动子进行序列测定l那些表现型不太容易被划分到任何现存的分类中。这些异常的基因被称作Aw（15）。Subgroups of APheno-typeRed cellstestedWith anti-seraSerum tested with
15、Known red cellsSalivaof secretorsAnti-A-B-AB-A1-HA1A2BO A1V_VV_V_A and HAint+_V+_V_A and HA2+_V_+Some-times.+_V_A and HA3+mf_+mf_+Occa-sionally.+_V_A and HAm-/w+_-/w+_V_V_A and HAx-/W+_+/+_VFre-quently +_V_HB亚型亚型l弱的B变异型是很少的。l可能是由于在许多群体中B基因的频率要相对低得多。l弱B亚型较难以分类。lSalmon做出结论：B亚型最好的分类应参照A变异型：B3、Bx、Bm和Bel
16、，另外加上那些不符合其它4种类型的Bw。B3l1972年 Wiener和Cioffi首先报道一例ABH非分泌型B3。l它被作为最稀少的一种B亚型 l这种表现型以与抗B和抗AB呈现混合视野反应为特点l血清中缺乏抗Bl唾液中含有正常含量的B抗原lB3通常是由于ABO位点上的稀有等位基因所致。Bxl一种异质性的血型l典型的Bx红细胞与抗B和抗AB呈弱凝集。l血清中含有弱的抗BlBx分泌型唾液中含有一些B物质，后者常常仅能通过Bx细胞与抗B的凝集抑制试验才能检测到lBx是ABO位点上的一种稀有的等位基因。BmlBm细胞不能被抗B或抗AB凝集lB抗原仅能通过敏感的技术比如吸收放散抗B才能检测到。lBm分泌型唾液中B物质的含量接近正常BlBm个体的血清中不含有抗B。l通常Bm是作为ABO位点上一个变异的基因来遗传的，但是有几个例外报道。BellBel红细胞与抗B和AB不发生凝集反应，但是它们的确可以结合抗B，抗体可以通过放散技术被检测到。lBel分泌型唾液中不出现B物质，血清中可能存在抗B抗体。lBel作为ABO位点上的稀有基因而遗传，BwlOlsson等确认了7种新的等位基因，它们与正常B基因相
