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1、专题15 现代生物科技专题书本黑体字速记1、基因工程至少需要的三种工具，即准确切割DNA的“手术刀”限制酶、将DNA片段再连接起来的“缝合针”DNA连接酶、将体外重组好的DNA导入受体细胞的“运输工具”运载体。限制酶切割DNA分子后产生黏性末端、平末端。2、获取目的基因（主要是编码蛋白质的结构基因）是实施基因工程的第一步。获取目的基因方法有直接获取、从基因文库中获取、人工合成、逆转录获取等3、基因表达载体的构建是实施基因工程的第二步，也是基因工程的核心。4、将目的基因导入受体细胞是实施基因工程的第三步。（植物：农杆菌转化法导入双子叶植物和裸子植物、基因枪法、花粉管通道法；动物：显微注射法；微生
2、物细胞：Ca2+处理成感受态细胞、再完成转化）5、目的基因的检测与鉴定 这是基因工程的第四步工作。检测目的基因是否导入采用DNA分子杂交法、检测是否转录采用分子杂交技术、检测翻译是否采用抗原-抗体杂交。6、基因工程的应用：抗虫转基因植物、抗病转基因植物、其他抗逆转基因植物、利用转基因改良植物的品质、用于提高动物生长速度、用于改善畜产品的品质、用转基因动物生产药物、用转基因动物作器官移植的供体（优点：不发生免疫排斥）。7、基因工程在原则上只能生产自然界已存在的蛋白质，基因工程中DNA分子能正确拼接的结构基础是DNA分子具有规则的双螺旋结构。 基因治疗的实质是利用基因工程获得正常细胞、再回输给病人
3、，原理是基因重组。8、具有某种生物全部遗传信息的任何一个细胞，都具有发育成完整生物体的潜能，也就是说，每个生物细胞都具有全能性的特点。9、植物组织培养就是在无菌和人工控制条件下，将离体的植物器官、组织、细胞（外植体），培养在人工配制的培养基上，给予适宜的培养条件（水、无机盐、生长素、细胞分裂素、糖类等），诱导其产生愈伤组织、丛芽，最终形成完整的植株。10、植物体细胞杂交就是将不同种的植物体细胞，在一定条件下融合成杂种细胞，并把杂种细胞培育成新的植物体的技术。诱导方法：物理法（离心、振动、电激），化学法（用聚乙二醇(PEG)处理）。细胞之间若有密度差，则在失重的条件下更好。11、植物细胞工程的实
4、际应用：植物繁殖的新途径微型繁殖、作物脱毒、人工种子；作物新品种的培育单倍体育种、突变体的利用；细胞产物的工厂化生产。12、动物细胞培养（初次培养-原代培养；转移后的培养-传代培养）就是从动物机体中取出相关的组织，将它分散(用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理)成单个细胞，然后，放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。动物细胞培养的条件：无菌、无毒的环境，营养充足（常加入血清、血浆等），适宜的温度和pH，气体环境（主要有O2和CO2）13、动物核移植是将动物的一个细胞的细胞核（越幼嫩细胞的核越好），移入一个已经去核的卵母细胞（减II中期）中，使其重组并发育成一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育为动物个体
5、。14、动物细胞融合也称细胞杂交，是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。诱导方法：物理法、化学法及灭活病毒法。应用：利用杂交瘤细胞（既能分泌抗体，又能无限增殖）生产单克隆抗体（第一次筛选得到杂交瘤细胞；第二次筛选得到分泌专一抗体的杂交瘤细胞）。单克隆抗体的特点：特异性强、灵敏度高、能大量制备。单克隆抗体另外一种生产方法：基因工程。15、胚胎移植是指将雌性动物的早期胚胎，或者通过体外受精及其他方式得到的胚胎，移植到同种的、生理状态相同的其他雌性动物的体内，使之继续发育为新个体的技术。精子（动物体形的大小不影响精子的大小）形成时变形特点：高尔基体顶体；线粒体线粒体鞘；中心体尾；细胞质原生质
6、滴 。卵子受精的重要标志：在卵黄膜和透明带的间隙出现两个极体。阻止多个精子入卵的屏障：透明带反应、卵黄膜封闭作用。胚胎发育过程：受精卵桑椹胚（细胞没分化，之后出现分化）囊胚原肠胚16、胚胎分割是指采用机械方法将早期胚胎切割成2等份、4等份或、8等份等，经移植获得同卵双胎或多胎的技术。要均等分割内细胞团。应用：迅速繁殖大量个体胚胎的来源：体外受精、冲卵17、生态经济主要是通过实行“循环经济”的原则，使一个系统产出的污染物，能够成为本系统或者另一个系统的生产原料，从而实现废弃物的资源化，而实现循环经济最重要的手段之一就是生态工程。生态工程的原理：物质循环再生原理（实质无废物）、物种多样性原理（多种
7、生物）、协调与平衡原理（引入合适的生物、不要超出K值）、整体性原理（社会-经济-自然）、系统学和工程学原理（优化组分之间的结构、组分之间的比例）18、 在肯定生态工程的作用，特别是对恢复和重建受损一态环境的重要作用的同时，不要忘记大自然固有的强大的生态恢复力量；更不能误认为只要有了生态工程，就可以走发达国家“先污染、破坏后治理”的老路。必背基础知识点1.基因工程又叫DNA重组技术，其实质是基因重组，三种基本工具包括限制酶、DNA连接酶和载体。2.DNA连接酶分为EcoliDNA连接酶（来源大肠杆菌连接黏性末端）和T4DNA连接酶（来源T4噬菌体连接黏性末端和平末端）。DNA聚合酶只能将单个核苷
8、酸加到已有的核苷酸片段的末端，形成磷酸二酯键。3.载体具备的条件能自我复制具有一至多个限制酶切割位点，供外源DNA片段插入具有标记基因。载体的种类：质粒、噬菌体的衍生物、动植物病毒；4.最常用的载体是质粒,它是双链环状DNA分子。5.基因工程操作程序四步骤：目的基因的获取、基因表达载体的构建（核心）、将目的基因导入受体细胞、目的基因的检测与鉴定。6.原核基因一般采取直接分离获得，真核基因一般是人工合成。常用的获取目的基因的三种方法：从基因文库中获取、利用PCR技术扩增、用化学方法人工合成。7.基因文库分为基因组文库和部分基因文库（如cDNA文库）。8.PCR（多聚酶链式反应）原理：DNA双链复
9、制过程：第一步变性：加热，DNA解旋；第二步复性：冷却，引物结合到互补DNA链；第三步延伸：加热，热稳定DNA聚合酶（Taq酶）从引物起始互补链的合成。前提：要有一段已知目的基因的核苷酸序列以便合成引物。冷却的目的：使引物结合的互补DNA链上。9.基因表达载体的组成：目的基因启动子终止子标记基因 基因表达载体构建目的：使目的基因稳定存在并可遗传能够表达和发挥作用。10.标记基因的作用：为了鉴别受体细胞中是否含有目的基因，从而将含有目的基因的细胞筛选出来。11.将目的基因导入植物细胞常采用农杆菌转化法，是将目的基因插入Ti质粒中的T-DNA中，利用了T-DNA可转移至受体细胞并且整合到受体细胞染
10、色体的DNA上的特点;导入动物细胞：最常用的方法是显微注射技术。12.分子水平检测是否插入了目的基因的方法是DNA分子杂交技术；是否转录出mRNA的方法是分子杂交技术；是否翻译成蛋白质的方法是抗原抗体杂交，原理是抗原抗体特异性结合，均可通过是否有杂交带出现来判断。个体生物学水平的鉴定的方法举例：抗虫的接种实验。DNA分子杂交技术和分子杂交技术均用放射性同位素标记的目的基因作为探针。13.提高动物生长速度用外源生长激素基因；降低乳汁中乳糖含量用肠乳糖酶基因。14.用转基因动物生产药物：将药用蛋白基因与乳腺蛋白基因的启动子等调控组件重组在一起，通过显微注射方法，导入哺乳动物的受精卵中，将受精卵送入
11、母体内使其发育成转基因动物（必须是雌性动物），后者可以通过泌乳生产药物，称为乳腺生物反应器。15.基因治疗是把正常基因导入病人体内，使该基因的表达产物发挥功能，是基因替代不是基因修复，原理是基因重组，分为体外基因治疗和体内基因治疗，目前都处于初期的临床试验阶段。16.基因工程原则上只能生产自然界已存在的蛋白质。17.蛋白质工程是指以蛋白质分子的结构规律及其与生物功能的关系作为基础，通过基因修饰或基因合成，对现有蛋白质进行改造，或制造一种新的蛋白质，以满足需求。18.蛋白质工程的流程：从预期的蛋白质功能出发 设计预期的蛋白质结构 推测应有的氨基酸序列 找到相对应的脱氧核苷酸序列 19.用蛋白质工
12、程制成的电子元件具有体积小、耗电少和效率高的特点；蛋白质工程难度很大是因为对大多数蛋白质的高级（空间）结构了解不够。20.植物组织培养技术理论基础（原理）：植物细胞的全能性过程：离体的植物器官、组织或细胞（外植体）愈伤组织（具分生能力的薄壁细胞）胚状体或丛芽 植物体21.人工种子是以植物组织培养得到的胚状体、不定芽、顶芽和腋芽等为材料，经过人工薄膜包装得到的种子。22.单倍体育种是通过花药离体培养获得单倍体植物，再经秋水仙素或低温处理使染色体加倍；优点是后代能稳定遗传极大缩短育种年限。23.制作人工种子培养到胚状体阶段；突变体的利用和细胞产物的工厂化生产培养到愈伤组织阶段。24.植物体细胞杂交
13、技术原理：细胞膜的流动性和植物细胞的全能性去细胞壁用纤维素酶和果胶酶人工诱导原生质体融合的方法：物理法包括离心、振动、电激等，化学法一般是用聚乙二醇（PEG）作为诱导剂诱导细胞融合。流程：先进行植物细胞融合再进行植物组织培养原生质体成功融合的标志是再生出细胞壁意义：克服了远缘杂交不亲和的障碍。25.动物细胞培养（1）原理：细胞增殖（2）流程：取动物组织块（动物胚胎或幼龄动物的器官或组织，原因分化程度低，增殖能力强）剪碎用胰蛋白酶处理分散成单个细胞制成细胞悬液转入培养瓶中进行原代培养贴满瓶壁的细胞重新用胰蛋白酶处理分散成单个细胞继续传代培养。（3）悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁
14、，要求培养瓶表面光滑、无毒，易于贴附。当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就会停止分裂增殖，称为细胞的接触抑制，此时细胞的层数为一层。（4）目前使用的细胞在10代以内的原因：保持细胞正常的二倍体核型（或10代以内细胞遗传物质没有发生改变）。（5）条件无菌、无毒的环境：培养液进行无菌处理，添加一定量抗生素，以防杂菌污染。应定期更换培养液，防止代谢产物积累对自身造成危害。营养：合成培养基成分：糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等。需加入血清、血浆等天然成分。温度：36.50.5；pH：7.27.4。气体环境：95%空气5%CO2。O2是细胞代谢所必需的，CO2维持培养液的pH。26.动物
15、体细胞核移植技术和克隆动物（1）原理：动物细胞核的全能性；细胞增殖。（2）分类：胚胎细胞核移植和体细胞核移植（比较难）。（3）用核移植的方法得到的动物称为克隆动物。（4）过程：取供体细胞进行细胞培养；同时采集卵母细胞，在体外培养到减中期，去核（方法：显微操作）注：用卵母细胞原因：营养物质丰富；体积大，易操作；含有激发细胞核全能性的物质；将供体细胞注入去核卵母细胞；通过电刺激使两细胞融合，供体核进入受体卵母细胞，构建重组胚胎；将胚胎移入受体母体内；生出与供体遗传物质基本相同的幼体。27.动物细胞融合（1）原理：细胞膜的流动性（2）诱导动物细胞融合的方法：聚乙二醇诱导、灭活的病毒诱导、电激等。（3）意义：克服了远缘杂交的不亲和的障碍（4）最重要应用：制备单克隆抗体28.单克隆抗体（1）一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体。（2）杂交瘤细胞的特点：既能迅速大量繁殖，又能产生专一抗体。（3）细胞融合时出现多种类型的原因：细胞融合是随机的，且融合率达不到100。（4）单克隆抗体的优点（特点）：特异性强，灵敏度高，并能大量制备。（5）制备过程：对注射特定的抗原蛋白免疫小鼠；提取B淋巴细胞；同时用动物细胞培养的方法培养骨髓瘤细胞并提取；促使它们细胞融合；在特定的选择性培养基上筛选出融合的杂交瘤细
