《1.2 纯净的目标微生物可通过分离和纯化获得（第1课时） 高二生物 课件（2019浙科版选择性必修3）》由会员分享，可在线阅读，更多相关《1.2 纯净的目标微生物可通过分离和纯化获得（第1课时） 高二生物 课件（2019浙科版选择性必修3）（28页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、浙科版浙科版2019版版选择性选择性必修三必修三第一节体液调节是通过化学信号实现的调节第一节体液调节是通过化学信号实现的调节第一章第一章 发酵工程发酵工程第二节神经系统通过下丘脑控制内分泌系统第二节神经系统通过下丘脑控制内分泌系统第二节神经系统通过下丘脑控制内分泌系统第二节神经系统通过下丘脑控制内分泌系统第二节第二节 纯净纯净的目标微生物可通过的目标微生物可通过 分离分离和纯化和纯化获得获得素养目标浙科版浙科版2019版版选择性选择性必修三必修三采用划线或涂布的接种方法能够实现采用划线或涂布的接种方法能够实现对对 目标目标微生物的分离和纯化微生物的分离和纯化第一第一节体液调节是通过化学信号实现
2、节体液调节是通过化学信号实现的调节的调节第一节体液调节是通过化学信号实现的调节第一节体液调节是通过化学信号实现的调节第一章第一章 发酵工程发酵工程第二节神经系统通过下丘脑控制内分泌系统第二节神经系统通过下丘脑控制内分泌系统第二节神经系统通过下丘脑控制内分泌系统第二节神经系统通过下丘脑控制内分泌系统第二节第二节 纯净纯净的目标微生物可通过的目标微生物可通过 分离分离和纯化和纯化获得（获得（1 1）一、采用划线或涂布的接种方法能够实现对目标微生物的分离一、采用划线或涂布的接种方法能够实现对目标微生物的分离和纯化和纯化1.接种接种方法方法接种接种：微生物进入培养基质的：微生物进入培养基质的过程过程。
3、自然自然接种接种：牛奶暴露在空气中，会由于微生物落入、生长、繁殖而变质。牛奶暴露在空气中，会由于微生物落入、生长、繁殖而变质。人为人为接种接种：挑取目标微生物的纯种将其转移到液体培养基中培养，或挑取目标微生物的纯种将其转移到液体培养基中培养，或在培养基斜面连续划线用于保存菌种（接种环）。在培养基斜面连续划线用于保存菌种（接种环）。单菌落单菌落：在固体培养基上通过接种、培养获得的由在固体培养基上通过接种、培养获得的由一一个细胞分裂个细胞分裂形成形成的、肉眼可见的、有一定形态构造的的、肉眼可见的、有一定形态构造的子细胞子细胞集团集团。2.单菌落分离意义：单菌落的分离单菌落的分离是是消除杂菌污染的通
4、用方法，也是用于的通用方法，也是用于筛选高表达量菌株的的最简便方法之一最简便方法之一.单菌落分离或接种的方法：通过通过平板划线法和和稀释涂布平板法稀释涂布平板法等方法获得等方法获得单菌落单菌落3平板划线平板划线法法：（1 1）原理）原理 ：接种环划线的过程中，菌液被逐渐稀释，最终出现单个细菌，划线的过程中，菌液被逐渐稀释，最终出现单个细菌，培养后形成单菌落培养后形成单菌落。(2)方法：方法：通常用通常用_蘸蘸取取液体液体培养物或挑取固体培养物或挑取固体表面的表面的微生物后，在固体培养基表面进微生物后，在固体培养基表面进行连续平行划线、行连续平行划线、_或其他形式的划线，以实现或其他形式的划线，
5、以实现接种的目的。接种的目的。(3)划线方式的比较划线方式的比较扇形划线扇形划线接种环接种环（4 4）过程过程：不能使用脱脂棉，否不能使用脱脂棉，否则容易吸水，造成污则容易吸水，造成污染染。棉塞也可用封口封口膜膜替代或6层纱布封口（1 1）一旦划破，会造成划线不均匀，难以达到分离单）一旦划破，会造成划线不均匀，难以达到分离单菌落的目的；菌落的目的；（2 2）二是存留在划破处的单个细胞无法形成规矩的菌二是存留在划破处的单个细胞无法形成规矩的菌落，菌落会沿着划破处生长，会形成一个条状的菌落。落，菌落会沿着划破处生长，会形成一个条状的菌落。既既可以使培养基表面的水分更好地挥可以使培养基表面的水分更好
6、地挥发，又可防止皿盖上的水珠落入培养发，又可防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。基，造成污染。灼烧接种环灼烧接种环灼烧接种环灼烧接种环接种环接种环冷却后，蘸取带菌培养物后，蘸取带菌培养物在酒精灯在酒精灯火焰旁，让带菌种的接种环在固体培养基上，让带菌种的接种环在固体培养基上第一区第一区划线。烧灼接种环，从烧灼接种环，从第一区末端开始往第二区第一区末端开始往第二区划线 烧灼接种环，从烧灼接种环，从第二区末端开始往第三区第二区末端开始往第三区划线 烧灼接种环，从烧灼接种环，从第三区末端开始往第四区第三区末端开始往第四区划线 烧灼接种环，从烧灼接种环，从第四区末端开始往第五区第四区末端开始往第五区划
7、线 烧灼接种环，烧灼接种环，避免污染避免污染 培养皿培养皿倒置倒置，放入培养箱培养，放入培养箱培养 用用接种环蘸菌液接种环蘸菌液_次，在固体培养基表面次，在固体培养基表面划线，下一次划线应从上一次划线的，下一次划线应从上一次划线的_开始。每次划线前接种环要开始。每次划线前接种环要 ，聚集的菌种逐步稀释分散到培养基表面。，聚集的菌种逐步稀释分散到培养基表面。在数次划线后培养，可以在划线的末端出现不连续的在数次划线后培养，可以在划线的末端出现不连续的 。若共划线五次，接种。若共划线五次，接种环要烧灼环要烧灼_次。另外：每次划线都不能与之前的线条次。另外：每次划线都不能与之前的线条_；不能将最后一次
8、划线与第；不能将最后一次划线与第一次划线相连；不能一次划线相连；不能_培养基。培养基需培养基。培养基需 后，放入培养箱培养。后，放入培养箱培养。划破划破重叠重叠6 6末端1 1例题例题灭菌单菌落单菌落 倒置倒置注意注意：1 1.无论是何种划线法，蘸取菌种前和划线后，接种环都要灼烧灭菌。无论是何种划线法，蘸取菌种前和划线后，接种环都要灼烧灭菌。2 2.无论是何种划线法，菌种只蘸取一次。无论是何种划线法，菌种只蘸取一次。1.1.为什么在为什么在操作的第一步操作的第一步以及以及每次划线之前每次划线之前都要灼烧接种环？在都要灼烧接种环？在划线操作划线操作结束结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？时，仍
9、然需要灼烧接种环吗？为什么？思考思考：操作的第一步灼烧接种环：是为了灼烧接种环：是为了避免接种环上可能存在避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；的微生物污染培养物；每次划线前灼烧接种环：是为了灼烧接种环：是为了杀死上次划线结束后，接杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的接来源于上次划线的末端末端，从而通过划线次数的增加，使，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。划线结束后仍仍灼烧接种环：能及时灼烧接种环：能及时杀死接
10、种环上残留的菌杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。种，避免细菌污染环境和感染操作者。2.2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？3.3.在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？划线？以免接种环温度太高，杀死菌种。以免接种环温度太高，杀死菌种。划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加能使细菌的
11、数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。例题例题1.微生物接种的方法很多微生物接种的方法很多,平板划线法是常用的一种。下图是平板划平板划线法是常用的一种。下图是平板划线示意图线示意图,划线的顺序为划线的顺序为。下列相关叙述错误的是。下列相关叙述错误的是()A.划线操作时划线操作时,将蘸有菌种的接种环插入培养基将蘸有菌种的接种环插入培养基B.平板划线后平板划线后,培养微生物时要倒置培养培养微生物时要倒置培养C.不能将第不能将第区域的划线与第区域的划线与第区域的划线相连区域的划线相连D.在第在第区域中划线前都要对接种环进行
12、灭菌区域中划线前都要对接种环进行灭菌A划线时不能将接种环插入培养基划线时不能将接种环插入培养基,而是在培养基表面划线而是在培养基表面划线例题例题2.下列有关分离酵母菌实验操作的叙述下列有关分离酵母菌实验操作的叙述,错误的是错误的是()A.在第二次划线时在第二次划线时,接种环上的菌种直接来源于菌液接种环上的菌种直接来源于菌液B.第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物C.每次划线前每次划线前,灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后接种环上残留的菌灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后接种环上残留的菌种种D.划线结束后划线结束
13、后,灼烧接种环能及时杀死接种环上的菌种灼烧接种环能及时杀死接种环上的菌种,避免细菌污染环境避免细菌污染环境和感染操作者和感染操作者A例例3：在分离、纯化大肠杆菌实验中，划线接种在分离、纯化大肠杆菌实验中，划线接种 （甲）、培养结果（乙）如图所示。（甲）、培养结果（乙）如图所示。有关叙述错误的是有关叙述错误的是 （）接种前应对培养基进行高压蒸汽灭菌接种前应对培养基进行高压蒸汽灭菌 连续划线的目的是获得单个细菌形成的菌落连续划线的目的是获得单个细菌形成的菌落 接种过程中至少需要对接种环灼烧接种过程中至少需要对接种环灼烧 次次 甲中甲中 区域为划线的起始位置区域为划线的起始位置例例4下列有关微生物培
14、养的叙述中，不正确的是下列有关微生物培养的叙述中，不正确的是 （）获得纯净培养物的关键是防止杂菌污染获得纯净培养物的关键是防止杂菌污染 单菌落的分离是消除污染杂菌的通用方法单菌落的分离是消除污染杂菌的通用方法 培养基都必须使用高压蒸汽灭菌法灭菌培养基都必须使用高压蒸汽灭菌法灭菌 倒置平板防止培养皿盖上的冷凝水滴落倒置平板防止培养皿盖上的冷凝水滴落DC例例5：要筛选得到纯要筛选得到纯 净的菌种，通常在固体培养基上划线分离，下列操作正确的是（净的菌种，通常在固体培养基上划线分离，下列操作正确的是（）每次划线时，接种环都需蘸菌液一次每次划线时，接种环都需蘸菌液一次 划线分离时，需要把接种环深入到培养
15、基中进行接种划线分离时，需要把接种环深入到培养基中进行接种 在超净台中接种时要在酒精灯火焰旁进行在超净台中接种时要在酒精灯火焰旁进行 划线分离后将培养皿正放在恒温培养箱中培养划线分离后将培养皿正放在恒温培养箱中培养c例例6：若实验室为分离纯化优良菌种进若实验室为分离纯化优良菌种进 行如下操作，排序最合理的是行如下操作，排序最合理的是 （）B4稀释涂布平板法稀释涂布平板法接种时，通常需要先将菌液进行接种时，通常需要先将菌液进行_，并在培养，并在培养皿皿侧侧面或底面做好标记后，将稀释度不同的菌液各取面或底面做好标记后，将稀释度不同的菌液各取0.1 mL，（移液管，（移液管或枪）加或枪）加在固体培养
16、基表面，然后用在固体培养基表面，然后用_将菌液均匀地涂将菌液均匀地涂布布在在培养基表面上进行培养培养基表面上进行培养。这样在稀释度适当的固体培养基表面也能这样在稀释度适当的固体培养基表面也能得到得到单个细胞单个细胞生长繁殖成的单菌落。根据菌落的生长繁殖成的单菌落。根据菌落的形状，大小、颜色、边形状，大小、颜色、边缘或表面光滑与否缘或表面光滑与否等特征可以选取目标微生物继续培养。等特征可以选取目标微生物继续培养。梯度稀释梯度稀释涂布器涂布器a.a.原理原理 ：用用无菌水无菌水将菌液进行一系列的将菌液进行一系列的梯度稀释梯度稀释，在在适适当的当的稀释度稀释度下下，可培养可培养得到得到相互分开的相互分开的单菌落单菌落。分离、计数微生物稀释涂布平板法无法计数 159 17 2 0无法计数 141 13 1 0无法计数 150 11 3 1 9ml无菌水加入0.1ml稀释液（移液管）例：将1g土样加到盛有99ml无菌水的三角瓶中，如图进行稀释，每个稀释度涂布三个平板，根据结果计算1g土样中菌的数量？注意：1.分离得到单菌落一般以培养皿中有20个以内菌落为宜。2.计算微生物数量一般以培养皿中有30
