痰液脱落细胞检查专家讲座

第六章 细胞病理学诊疗工作相关技术指南第一节 痰液脱落细胞病理学检验痰液脱落细胞检查 第1 页一、目标 是经过检验痰液中脱落细胞形态学改变来检验呼吸道及肺部病变一个细胞病理学方法。检验含有非损伤性、非介入性且经济、方便、特异性高等优点，与其它部位细胞病理学检验不一样是痰液细胞病理学检验主要是检出恶性肿瘤细胞（癌细胞），而对癌前病变检验无意义。痰液脱落细胞检查 第2 页 采集痰液方法和质量直接影响痰检验阳性率，采集痰液分析基本要求是：痰液必须是从肺部咳出；痰液必须新鲜；对首次痰检验患者，应亲自指导和观察患者咳痰。痰液脱落细胞检查 第3 页痰液检验 v 起源：肺泡、支气管、气管所产生分泌物v 目标:辅助诊疗：支气管哮喘、支气管扩张 确诊：肺结核、肺癌 观察疗效和预后判断对原发肺癌敏感性可达60%-80%，特异性到达100%。痰液脱落细胞检查 第4 页二、方法学（一）标本准备1、咳痰v 提议用晨痰，涮牙、嗽口后进行，深咳。v 有条件者可采取雾化吸入后诱咳采痰。v 纤维支气管镜检后咳取痰液能提升阳性率。痰液脱落细胞检查 第5 页2、采集v 一次咳痰提议留取3-5口痰液。v 存放标本容器必须是无吸水性干燥塑料或玻璃器皿,须有盖子密封,标签明确，标签应统计相关内容,包含姓名、门诊号（住院号）、送检时间等。v 二种标准送检方法：每日一次，连续三天送检，天天制片。每日一次，连续三天，天天搜集后先预固定，一次性提取细胞成份后离心沉渣涂片或制成细胞蜡块（CB）。痰液脱落细胞检查 第6 页3、送检：标准上留取后马上送检，保持标本新鲜；普通夏天存放时间应2小时，冬天4小时，如确有困难或须做沉渣切片则能够预固定后放置冰箱内冷藏，但不宜5天。4、接收：查对送检单与样本盒（瓶）上相关信息，一致后签收标本，若信息不一致则需重新与相关人员、科室查对，标本签收制度必须严格按要求执行。痰液脱落细胞检查 第7 页注意事项：l 留痰：先漱口，取深部痰液。l 查24小时痰量和分层检验：无色广口瓶。细菌学检验：无菌容器，及时送检。细胞学检验：3-5口（约5ml）,或早晨9-10时新鲜痰液。无痰或痰少患者：化痰药(雾化吸入法)。昏迷患者：清理口腔，负压吸引法吸痰。幼儿：棉拭刺激喉部，棉拭刮取。纤维支气管镜检验：直接病灶采集。痰液脱落细胞检查 第8 页l 痰标本应尽快涂片，在室温下，能够保留24小时，在冰箱内可保留两天；痰液量普通以3ml-5ml(3-5口痰)为宜；l 采痰时应采取内面涂蜡痰盒，可预防痰液被吸收而难于挑痰制片；l 采集痰标本没有禁忌证，但假如病人在行支气管镜检验之后，马上进行痰细胞学检验，往往会混有一些嗜酸性细胞碎片和炎性细胞，而误认为高分化鳞癌。最好在支气管镜检验510天后再行痰细胞学检验。痰液脱落细胞检查 第9 页（二）制片1、标本取样（1）大致观察：v 量：无或少许，呼吸道粘膜和肺泡受刺激时增多。v 颜色:正常：无色或灰白色，病理情况有以下改变：水样痰：黏液少，呈水样，常有泡沫。灰白色黏液痰：黏液丰富，胶样。红色或棕红色：含血液或血红蛋白 血性痰:血液量多，肺癌、肺结核、支气管扩张 粉红色泡沫样:急性肺水肿 铁锈色:大叶性肺炎,肺梗死 黄色脓痰:呼吸道化脓性感染，化脓性支气管炎,肺结核;黄绿色:绿脓杆菌,干酪性肺炎 烂桃样灰黄色:肺吸虫病;棕褐色:阿米巴肺脓肿、慢性充血性心衰肺淤血 黑色:煤矿,锅炉工人或大量吸烟者 痰液脱落细胞检查 第10 页 性状:粘液痰：多见于慢性支气管炎缓解期、支气管哮喘或肺癌病例。痰液透明、无色、粘稠，用镊子牵拉时，往往可拉成很长细丝。假如其中有乳白色颗粒状物，往往提醒有肺癌可能，必须取这部分痰液做涂片检验。粘液脓性痰：是在粘液痰基础上混有一部分脓液。检验时必须仔细挑选粘液丝部分做细胞学检验，以提升癌细胞检验阳性率。脓性痰：为黄色或黄绿色粘痰，因细菌种类不一样，痰粘稠度和颜色可有不一样。常见于气管、支气管和肺化脓性感染。其中有大量中性粒细胞和核碎片。对这种痰最好经抗感染治疗后再送检，以取得很好结果。泡沫痰：即痰呈泡沫状，此种痰应在除去泡沫后，采取其中粘液丝做涂片检验。血丝痰：即痰内带有少许血液，这是支气管黏膜某个局部小血管破裂出血或肺泡内出血所致。常见于肺癌或支气管结核，有时也见于支气管炎。为了明确出血原因，应将带血丝及其附近部分痰全部制成涂片，进行检验。气味:正常无特殊气味,血腥味(血性痰),恶臭(合并厌氧感染)，特殊臭味(晚期肺癌)痰液脱落细胞检查 第11 页（2）取样：选择性取有价值部分 用镊子、竹签等无吸水性材料夹取,不主张用玻璃制品、棉签等取样。标准上优先选取以下部位：含血丝粘液痰。灰白色豆渣样痰丝（形似白色细线）。透明粘液丝丰富处。血液与粘液交界处痰液。黏液丰富样本与水样样本应注意区分取样痰液量，普通情况下后者取样量应多于前者。痰液脱落细胞检查 第12 页2、制片普通涂片：直接涂片：用镊子或竹签直接涂抹在玻片上，尽可能分开粘液丝及血性部份，做到相对均匀，涂片面积应超出玻片空白部位三分之二，其优点是粘液丝分布显著，病变细胞相对集中，缺点是涂片厚薄不匀、重合现象多见而影响观察及封片，普通一次制片二张以上。压拉涂片：将取样标本置于一张玻片上后另一张玻片正面朝下压拉下一张玻片，屡次推拉、挤压均匀后二边分开得到二张涂片；优点是相对厚薄均匀，但可能细胞挤压分散，镜下沿粘液丝查找线索相对不显著。痰液脱落细胞检查 第13 页液基制片：是指经过标本预处理后先把痰液粘液溶解、液化且细胞固定后再经过一定技术伎俩把细胞成份转移到玻片上制片方法，制作过程等同普通液基片，然应注意标本预处理中以下方面。v 选取痰液样本量通常为一张普通制片痰液量3-5倍。v 在清洗、固定作用保留液内存放15分钟以上，保留液各厂家不尽相同，但主要成份类似：酒精、甲醛、甲醇等。v 1，4-二硫苏糖醇（DTT）液消化粘液：用清洗液加10%DTT粉剂配制成DTT液加入到保留液中1-2ml,震荡10分钟以上，即可完全溶解保留液中粘液，使标本完全液体化。痰液脱落细胞检查 第14 页沉渣涂片或细胞蜡块制作：v需要较大样本量，通常是用三天咳痰量混合在一起制作取样，须注意标本预固定及适当保留。v标本需作液化、离心沉淀预处理（同前）。v沉淀后细胞量少作涂片用，3-5张；沉淀后细胞丰富者作细胞蜡块。v普查、科研等情况下应用较多，因其样本量大也可深入应用分子、免疫等新技术。痰液脱落细胞检查 第15 页3、制片质量控制v 样本选取：直接关系到检验阳性率，屡次检验多张涂片结果前后一致性应大于80%以上。v 涂片应相对均匀，重合部份面积20%，涂片部分面积应大于玻片面积三分之二以上，合格涂片百分比应80%。痰液脱落细胞检查 第16 页（三）固定 必须采取湿固定，即制片后马上固定，一旦固定不及时，涂片在空气中干燥后，细胞形态特征将显著受损，所以及时固定非常主要。普通要求制片后马上固定，通常5秒钟。固定时间涂片15分钟，细胞蜡块30分钟。固定液：为常规固定液。垂直快速放入或自由落体放入固定液，不然会出现细胞堆积而引发皱折现象。必须注意固定液及时更换。固定槽内多个样本同时放置要杜绝相互间交叉污染。痰液脱落细胞检查 第17 页（四）染色痰液脱落细胞病理学检验常规染色方法是H.E染色和巴氏染色,特殊需要时也可使用抗酸染色，（五）透明及封片为保留痰液中细胞结构清楚，涂片染色脱水后必须经二甲苯透明及中性树胶封固。痰液脱落细胞检查 第18 页（六）痰液标本安全管理与院感控制 痰液样本因经常伴随特异性感染，而且需开放性处理，所以其试验室安全管理及院感控制必须引发重视。v必须使用密闭性器皿来存放标本。v制片操作人员必须带口罩、帽子等隔离办法。v有条件单位对痰液样本在制片前可进行预消毒固定处理,惯用预固定液为2%聚乙二醇和50%乙醇混合。v 每日一次空气、环境紫外线消毒，并统计时间，定时检测紫外灯管紫外线强度。v残留样本及盛具统一1%过氧乙酸液消毒处理,统一存放专用医疗垃圾袋后处理，处理标本过程中产生相关污染液体经专用医用污水管道排放。痰液脱落细胞检查 第19 页其配制方法：10g聚乙二醇(熔点为43-46)在50-100 温箱中溶化后倒入500ml 50%乙醇液中混匀成聚乙二醇溶解液备用(此液不会凝固).。1升2%聚乙二醇和50%乙醇溶解混合液组成配方为：水 437ml 95%乙醇液 526ml 聚乙二醇乙醇液 40ml痰液脱落细胞检查 第20 页（七）分子病理学技术在痰液样本中应用 痰液细胞学样本分子病理学检测尽管临床应用较少，但在科研、专题普查等领域则经常开展，应用最多是经过PCR或原位杂交技术检测上皮细胞以下项目：v端粒及端粒酶检测vP16基因甲基化检测v异源核糖核蛋白A2及其异构体vP53基因vEGFR相关基因等痰液脱落细胞检查 第21 页痰液检验镜检：观察有形成份种类、数量、形态改变 1、白细胞：正常少许 2、中性粒细胞/脓细胞：化脓性炎症或有混合感染 3、嗜酸性粒细胞：支气管哮喘、过敏性支气管炎、肺吸虫病等 4、淋巴细胞：肺结核病 5、红细胞：正常无 6、呼吸道疾病、出血性疾病（镜检/隐血试验）痰液脱落细胞检查 第22 页痰液检验7、上皮细胞：正常少许 炎症/其它呼吸系统疾病时大量增加8、肺泡巨噬细胞：炭末细胞：吞噬炭粒（炭末从容症及大量烟尘吸入者）含铁血黄素细胞/心力衰竭细胞：吞噬含铁血黄素 心力衰竭引发肺淤血、肺梗死、肺出血9、硫磺样颗粒：黄色小颗粒，放线菌病 压平可见菌丝放射状排列呈菊花形(放线菌)10、寄生虫及虫卵 肺吸虫卵：肺吸虫病 溶组织阿米巴滋养体：阿米巴肺脓肿/阿米巴肝脓肿入肺痰液脱落细胞检查 第23 页痰液检验镜检 染色:脱落细胞：肺部咳出，标本新鲜，一小时内固定 巴氏(papanicolaou)染色、苏木素-伊红(H-E)染色 细菌学涂片检验：革兰(Gram)染色：检测细菌、真菌 抗酸染色：检测结核杆菌 荧光染色：检测真菌、支原体痰液脱落细胞检查 第24 页 镜检前准备及镜检规范：镜检内容1、标本满意度评定：在满意标本前提下检验样本才含有可信性，才可确保检验敏感性与特异性。满意样本要求：合格申请单，有详细临床资料和病史提供，咳痰方法已经过指导，方法正确。涂片面积大于玻片面积三分之二以上，分布均匀，厚薄相对一致，可见粘液丝（普通涂片）。镜下见到以下成份表明此样本合格：v吞噬反应组织细胞（尘细胞）。v柱状上皮细胞（伴或不伴退变）。v支气管形成粘液丝（枯丝曼氏螺旋体）。三、痰液涂片脱落细胞病理学诊疗痰液脱落细胞检查 第25 页 不满意样本：不能作出诊疗意见，提议重新取样制片。申请单内容不全，咳痰时未经专业指导。不能确认标本与申请单一致性。涂片面积少于二分之一阴性标本。缺乏满意样本应有三种成份阴性标本。固定、染色效果差，细胞严重变形。v以上评定可写入汇报单内容中，以将标本满意度信息反馈给临床医师及患者。痰液脱落细胞检查 第26 页 脱落细胞检验基本知识 第一节 细胞诊疗学基本概念一、细胞增生活跃 细胞体积增大，核显著增大，核染色质增多，颗粒 增粗，核仁增大增多，核浆百分比失常，胞浆蓝染（巴氏），可伴核分裂像。二、组织修复细胞 组织损伤或修复过程中从新生上皮脱落下来细胞。特征：细胞多成片出现，似合体细胞，排列规则；细胞稍增大，胞核也增大，核不深染，胞浆尚丰富，深染；核仁显著增大或增多；可能出现核分裂像。2/27/2023 27痰液脱落细胞检查 第27 页组织修复细胞痰液脱落细胞检查 第28 页三、细胞化生1、未成熟鳞状上皮化生细胞特征：似正常上皮外底层细胞大小；多成群出现，可呈铺砖式排列；细胞呈圆或卵圆形，边缘有小突起；胞浆常有小空泡使胞浆透亮。2、成熟鳞状上皮化生细胞特征：细胞似正常鳞状上皮中层细胞大小；多成群出现，细胞呈多边形，有锐角突起，形态多样；胞浆中常见小空泡。胞浆少，排列紧密，无细胞间桥。痰液脱落细胞检查 第29 页鳞状化生痰液脱落细胞检查 第30 页痰液脱落细胞检查 第31 页痰液脱落细胞检查 第32 页四、贮备细胞增生 贮备细胞是柱状上皮细胞下一层含有分化潜