微生物的培养二课件

五、选择培养分离五、选择培养分离1.利用选择平板进行直接分离利用选择平板进行直接分离待分离的微生物的生长特征明显不同于其它微生物待分离的微生物的生长特征明显不同于其它微生物t 颜色反应颜色反应：分离特定的菌株；分离特定的菌株；t 牛奶平板牛奶平板：分离蛋白酶产生菌；分离蛋白酶产生菌；t 利用特定细菌的滑动特点进行利用特定细菌的滑动特点进行 分离纯化；分离纯化；五、选择培养分离五、选择培养分离2.富集培养富集培养从自然界中分离到所需的特定微生物从自然界中分离到所需的特定微生物特定的环境条件特定的环境条件仅适应于该条件的微生物旺盛生长仅适应于该条件的微生物旺盛生长待分离微生物在群落中的数量大大增加待分离微生物在群落中的数量大大增加2.富集培养富集培养富集培养是微生物学家最强有力的技术手段之一。营养和生理富集培养是微生物学家最强有力的技术手段之一。营养和生理条件的几乎无穷尽的组合形式可应用于从自然界选择出特定微条件的几乎无穷尽的组合形式可应用于从自然界选择出特定微生物的需要。生物的需要。根据微生物的特殊要求，从自然界分离出特定已知微生物种类；根据微生物的特殊要求，从自然界分离出特定已知微生物种类；分离培养在特定环境中能生长的微生物；分离培养在特定环境中能生长的微生物；六、二元培养物六、二元培养物 培养物中只含有二种微生物，而且是有意识的培养物中只含有二种微生物，而且是有意识的保持二者之间的特定关系的培养物称为二元培养物。保持二者之间的特定关系的培养物称为二元培养物。t 病毒和宿主细胞；病毒和宿主细胞；t 纤毛虫、变形虫和粘细菌；纤毛虫、变形虫和粘细菌；性状稳定的菌种是微生物学工作最重要的基本要求，性状稳定的菌种是微生物学工作最重要的基本要求，否则生产或科研都无法正常进行。否则生产或科研都无法正常进行。影响微生物菌种稳定性的因素：影响微生物菌种稳定性的因素：a）变异；变异；b）污染；污染；c）死亡；死亡；七、微生物的保藏技术七、微生物的保藏技术（一）菌种的衰退与复壮（一）菌种的衰退与复壮1）从衰退的菌种群体中把少数个体再找出来，重新获得具有从衰退的菌种群体中把少数个体再找出来，重新获得具有 原有典型性状的菌种。原有典型性状的菌种。2）有意识地利用微生物会发生自发突变的特性，在日常的菌种）有意识地利用微生物会发生自发突变的特性，在日常的菌种 维护工作中不断筛选维护工作中不断筛选“正变正变”个体。个体。大量群体中的自发突变大量群体中的自发突变菌种的复壮：菌种的复壮：a）纯种分离；纯种分离；b）通过寄主体进行复壮；通过寄主体进行复壮；菌种衰退的特点：菌种衰退的特点：（二）防止衰退的措施（二）防止衰退的措施1）减少传代次数；减少传代次数；2）创造良好的培养条件；）创造良好的培养条件；3）经常进行纯种分离，并对相应的指标进行检查；）经常进行纯种分离，并对相应的指标进行检查；4）采用有效的菌种保藏方法；）采用有效的菌种保藏方法；（三）菌种保藏（三）菌种保藏在一定时间内使菌种不死、不变、不乱在一定时间内使菌种不死、不变、不乱基本要求：基本要求：基本方法：基本方法：生活态生活态休眠态休眠态培养基传代培养培养基传代培养寄主传代培养寄主传代培养冷冻冷冻干燥干燥斜面、平板斜面、平板液氮、低温冰箱液氮、低温冰箱沙土管、冷冻真空干燥沙土管、冷冻真空干燥由于微生物的多样性，不同的微生物往往对不同的保藏方法由于微生物的多样性，不同的微生物往往对不同的保藏方法有不同的适应性，迄今为止尚没有一种方法能被证明对所有有不同的适应性，迄今为止尚没有一种方法能被证明对所有的微生物均适宜。因此，在具体选择保藏方法时必须对被保的微生物均适宜。因此，在具体选择保藏方法时必须对被保藏菌株的特性、保藏物的使用特点及现有条件等进行综合考藏菌株的特性、保藏物的使用特点及现有条件等进行综合考虑。对于一些比较重要的微生物菌株，则要尽可能多的采用虑。对于一些比较重要的微生物菌株，则要尽可能多的采用各种不同的手段进行保藏，以免因某种方法的失败而导致菌各种不同的手段进行保藏，以免因某种方法的失败而导致菌种的丧失。种的丧失。微生物学实验室的常规操作程序第二节第二节 显微镜和显微技术显微镜和显微技术几个基本概念：几个基本概念：放大放大 分辨率分辨率 反差反差被观察物越小，放大倍数应越大，否则难以看清！被观察物越小，放大倍数应越大，否则难以看清！能辨别两点之间最小距离的能力能辨别两点之间最小距离的能力被观察物区别于背景的程度被观察物区别于背景的程度与显微镜的自身特点有关，但也取决于进行显微观察时对显微与显微镜的自身特点有关，但也取决于进行显微观察时对显微镜的正确使用及良好的标本制作和观察技术，这就是显微技术。镜的正确使用及良好的标本制作和观察技术，这就是显微技术。一、显微镜的种类及原理1.1.普通光学显微镜普通光学显微镜复式显微镜简单显微镜一、显微镜的种类及原理一、显微镜的种类及原理1.1.普通光学显微镜普通光学显微镜光学显微镜一般配置的最大放大倍数是多少？为什么？光学显微镜一般配置的最大放大倍数是多少？为什么？如何实现光学显微镜配置的最大放大倍数？其原理？如何实现光学显微镜配置的最大放大倍数？其原理？目镜：目镜：10 15 ；物镜：；物镜：100 ；总放大倍数；总放大倍数10001500 ；使用油镜，即在使用油镜，即在100 物镜和载玻片之间滴加香柏油；物镜和载玻片之间滴加香柏油；0.5 l l分辨率（最小可分辨距离）分辨率（最小可分辨距离）=n sin q q1.1.普通光学显微镜普通光学显微镜分辨率与所用分辨率与所用波长成反比！波长成反比！1.1.普通光学显微镜普通光学显微镜 0.5 l l分辨率（最小可分辨距离）分辨率（最小可分辨距离）=n sin q qq为物镜镜口角的半数，它取决于物镜的直径和工作距离为物镜镜口角的半数，它取决于物镜的直径和工作距离1.1.普通光学显微镜普通光学显微镜 0.5 l l分辨率（最小可分辨距离）分辨率（最小可分辨距离）=n sin q qN：玻片与物镜间介质的折射率玻片与物镜间介质的折射率显微观察时可根据物镜的特性而选用不同的介质显微观察时可根据物镜的特性而选用不同的介质空气空气(n=1.0)、水水(n=1.33)、香柏油香柏油(n=1.52)玻璃玻璃(n=1.54)1.1.普通光学显微镜普通光学显微镜光线在穿过折射率不同的介质时发生折射光线在穿过折射率不同的介质时发生折射1.1.普通光学显微镜普通光学显微镜玻璃透镜的工作原理玻璃透镜的工作原理很多原来由于在透镜及载片表面的反射和折射而损失的很多原来由于在透镜及载片表面的反射和折射而损失的光线可以进入物镜，使照明亮度提高，改善观察效果。光线可以进入物镜，使照明亮度提高，改善观察效果。用浸没油取代空气的作用：用浸没油取代空气的作用：介质折射率提高介质折射率提高数值孔径值和分辨率均得到提高数值孔径值和分辨率均得到提高浸没油与玻璃的折射率相近浸没油与玻璃的折射率相近光学显微镜物镜的特性光学显微镜物镜的特性人眼的分辨能力在人眼的分辨能力在0.2 mm左右，因此光学显微镜的最大左右，因此光学显微镜的最大有效放大倍数（使用油镜）是有效放大倍数（使用油镜）是1,000到到1,500。普通光学显微镜又称普通光学显微镜又称明视野显微镜明视野显微镜 其照明光线直接进入视野，属透射照明。其照明光线直接进入视野，属透射照明。一、显微镜的种类及原理一、显微镜的种类及原理2.暗视野显微镜暗视野显微镜一、显微镜的种类及原理一、显微镜的种类及原理3.相差显微镜相差显微镜形成亮背景暗物象的形成亮背景暗物象的结果结果一、显微镜的种类及原理一、显微镜的种类及原理4.荧光显微镜荧光显微镜一、显微镜的种类及原理一、显微镜的种类及原理4.荧光显微镜荧光显微镜一、显微镜的种类及原理一、显微镜的种类及原理一、显微镜的种类及原理一、显微镜的种类及原理5.透射电子显微镜；透射电子显微镜；6.扫描电子显微镜扫描电子显微镜一、显微镜的种类及原理一、显微镜的种类及原理5.透射电子显微镜；透射电子显微镜；6.扫描电子显微镜扫描电子显微镜一、显微镜的种类及原理一、显微镜的种类及原理5.透射电子显微镜；透射电子显微镜；6.扫描电子显微镜扫描电子显微镜能否用扫描电镜来观察样品的内部结构，能否用扫描电镜来观察样品的内部结构，而用透射电镜来观察样品的表面结构？而用透射电镜来观察样品的表面结构？冰冰冻冻蚀蚀刻刻技技术术一、显微镜的种类及原理一、显微镜的种类及原理7.7.扫描隧道显微镜扫描隧道显微镜一、显微镜的种类及原理一、显微镜的种类及原理7.7.扫描隧道显微镜扫描隧道显微镜二、显微观察样品的制备二、显微观察样品的制备略！复习思考题：复习思考题：1.哪些固体培养基分离技术可以被用来获得目的微生物哪些固体培养基分离技术可以被用来获得目的微生物的纯培养？它们的使用范围及特点是什么？的纯培养？它们的使用范围及特点是什么？2.为什么光学显微镜的目镜通常都是为什么光学显微镜的目镜通常都是 15？是否可以采？是否可以采用更大放大倍率的目镜来进一步提高显微镜的总放大倍用更大放大倍率的目镜来进一步提高显微镜的总放大倍数？数？