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1、通脉养心通脉养心丸的实验和临床研究丸的实验和临床研究天津中医药大学天津中医药大学王 怡1研究背景研究背景前期工作基础前期工作基础实验研究实验研究临床研究临床研究汇报内容汇报内容2研究背景研究背景通脉养心丸系已通脉养心丸系已故天津名老中医故天津名老中医董晓初教授的经董晓初教授的经验方；验方；1965年年1月研制月研制成功并应用于临成功并应用于临床；床；四十多年来该药四十多年来该药以其独特的疗效，以其独特的疗效，成为治疗心血管成为治疗心血管疾病的经典名药疾病的经典名药之一；之一；3炙甘草汤炙甘草汤(张仲景张仲景)炙甘草、桂枝、地黄、炙甘草、桂枝、地黄、阿胶、麦冬等组成阿胶、麦冬等组成生脉饮生脉饮(
2、李东垣李东垣)人参人参(或党参或党参)、麦冬、麦冬、五味子等组成五味子等组成通脉止痛通脉止痛补气养阴补气养阴通脉养心丸通脉养心丸功效：缓解心绞痛、纠正心律失常、降低心梗的发生率，辅助心功效：缓解心绞痛、纠正心律失常、降低心梗的发生率，辅助心梗后期的机能恢复。梗后期的机能恢复。研究背景研究背景4l动物实验动物实验抗心肌缺血作用抗心肌缺血作用抗血栓形成作用抗血栓形成作用增强常压和减压条件下的耐缺氧能力增强常压和减压条件下的耐缺氧能力l临床试验临床试验气阴两虚型冠心病、心律失常气阴两虚型冠心病、心律失常 减轻胸痛、胸闷憋气、心悸气短等症状减轻胸痛、胸闷憋气、心悸气短等症状 减少心绞痛发作频数减少心绞
3、痛发作频数 减少硝酸甘油的用量减少硝酸甘油的用量前期工作基础前期工作基础5实实验验研研究究6对肾上腺素所致大鼠心律失常的影响对肾上腺素所致大鼠心律失常的影响对乌头碱所致大鼠心律失常的影响对乌头碱所致大鼠心律失常的影响对氯化钡所致大鼠心律失常的影响对氯化钡所致大鼠心律失常的影响对氯仿所致小鼠心律失常的影响对氯仿所致小鼠心律失常的影响对气阴两虚型大鼠心肌缺血的保护作用对气阴两虚型大鼠心肌缺血的保护作用整体实验整体实验整体实验整体实验抗大鼠心肌细胞缺氧损伤的作用及机制研究抗大鼠心肌细胞缺氧损伤的作用及机制研究体外实验体外实验体外实验体外实验安全性评价安全性评价安全性评价安全性评价 急性毒性实验；长期
4、毒性实验急性毒性实验；长期毒性实验7实验一实验一 对氯仿所致小鼠心律失常的影响对氯仿所致小鼠心律失常的影响 动物动物 小鼠小鼠 致心律失常药物致心律失常药物 氯仿氯仿 观察指标观察指标 心脏停搏心脏停搏(CA)(CA)的潜伏期的潜伏期 室颤发生率室颤发生率(%)(%)8实验分组：实验分组：（1 1）模型组，蒸馏水）模型组，蒸馏水（2 2）通脉养心丸，）通脉养心丸，1g/kg 1g/kg 剂量组剂量组（3 3）通脉养心丸，）通脉养心丸，2g/kg 2g/kg 剂量组剂量组（4 4）通脉养心丸，）通脉养心丸，4g/kg 4g/kg 剂量组剂量组（5 5）盐酸胺碘酮，）盐酸胺碘酮，50mg/kg 5
5、0mg/kg 剂量组剂量组 给药方法：灌胃给药一次，连续给药给药方法：灌胃给药一次，连续给药7 7天天 9图图1 1 各组小鼠氯仿致心脏停搏各组小鼠氯仿致心脏停搏(CA)(min)(CA)(min)的比较的比较 通脉养心丸通脉养心丸10表表1 1 通脉养心丸对氯仿所致小鼠心律失常的影响通脉养心丸对氯仿所致小鼠心律失常的影响(n=10)(n=10)组组 别别剂量剂量(g/kg)(g/kg)室颤发生率室颤发生率(%)(%)CACA的潜伏期的潜伏期(min)(min)模型组模型组 50 506.31.66.31.6通脉养心丸通脉养心丸4.0 4.0 20 20*8.52.7 8.52.7*通脉养心丸
6、通脉养心丸2.0 2.0 10 10*9.42.7*9.42.7*通脉养心丸通脉养心丸1.0 1.0 10 10*8.44.38.44.3盐酸胺碘酮盐酸胺碘酮0.050.05 20 20*8.71.9*8.71.9*11小小 结结 通脉养心丸可明显降低氯仿所致心律失常中室颤发生率，通脉养心丸可明显降低氯仿所致心律失常中室颤发生率，延长延长CACA潜伏期。表明通脉养心丸具有抗氯仿所致小鼠心律失潜伏期。表明通脉养心丸具有抗氯仿所致小鼠心律失常的作用。常的作用。12实验二实验二 对氯化钡所致大鼠心律失常的影响对氯化钡所致大鼠心律失常的影响 动物：动物：大鼠大鼠 致心律失常药物：致心律失常药物：氯化钡
7、氯化钡 观察指标：观察指标：心律失常的持续时间心律失常的持续时间 13图图2 2 各组大鼠氯化钡致心律失常持续时间（各组大鼠氯化钡致心律失常持续时间（minmin）比较）比较 通脉养心丸14小小 结结 通脉养心丸能显著缩短氯化钡所致大鼠心律失常通脉养心丸能显著缩短氯化钡所致大鼠心律失常持续时间。表明通脉养心丸具有抗氯化钡所致大鼠心持续时间。表明通脉养心丸具有抗氯化钡所致大鼠心律失常的作用。律失常的作用。15实验三实验三 对乌头碱所致大鼠心律失常的影响对乌头碱所致大鼠心律失常的影响 动物：动物：大鼠大鼠 致心律失常药物：致心律失常药物：乌头碱乌头碱 观察指标：观察指标：致大鼠心律失常阈剂量致大鼠
8、心律失常阈剂量(g/kg)动物的死亡率动物的死亡率(%)(%)16通脉养心丸通脉养心丸图图3 3 各组大鼠乌头碱致心律失常阈剂量各组大鼠乌头碱致心律失常阈剂量(g/kg)的比较的比较17通脉养心丸通脉养心丸图图4 4 各组大鼠乌头碱致心律失常死亡率各组大鼠乌头碱致心律失常死亡率(%)(%)的比较的比较 18小小 结结 通脉养心通脉养心丸丸4.0、2.0g/kg剂量组能够显著提高乌剂量组能够显著提高乌头碱致心律失常的阈剂量、缩短心律失常持续时间，头碱致心律失常的阈剂量、缩短心律失常持续时间，降低死亡率。降低死亡率。19实验四实验四 对肾上腺素所致大鼠心律失常的影响对肾上腺素所致大鼠心律失常的影响
9、 l 动物：动物：大鼠大鼠l 致心律失常药物：致心律失常药物：肾上腺素肾上腺素l 观察指标：观察指标：致大鼠心律失常阈剂量致大鼠心律失常阈剂量(g/kg)(g/kg)心律失常持续时间心律失常持续时间(min)(min)动物的死亡率动物的死亡率(%)(%)20通脉养心丸通脉养心丸图图5 5 各组大鼠肾上腺素致心律失常潜伏期各组大鼠肾上腺素致心律失常潜伏期(min)(min)的比较的比较 通脉养心丸通脉养心丸图图6 6 各组大鼠肾上腺素致心律失常持续时间各组大鼠肾上腺素致心律失常持续时间(min)(min)的比较的比较21通脉养心丸通脉养心丸图图7 7 各组大鼠肾上腺素致心律失常发生率各组大鼠肾上
10、腺素致心律失常发生率(%)(%)的比较的比较 22 通脉养心丸药物治疗组能延长肾上腺素所致大鼠心通脉养心丸药物治疗组能延长肾上腺素所致大鼠心律失常潜伏期，缩短心律失常的持续时间，降低心律失律失常潜伏期，缩短心律失常的持续时间，降低心律失常发生率，表明通脉养心丸具有抗盐酸肾上腺素所致大常发生率，表明通脉养心丸具有抗盐酸肾上腺素所致大鼠心律失常的作用。鼠心律失常的作用。小小 结结23实验五实验五 对实验性气阴两虚型大鼠心肌缺血的影响对实验性气阴两虚型大鼠心肌缺血的影响 动物：动物：大鼠大鼠 致病因素：致病因素：力竭性游泳力竭性游泳 (每天上、下午强制游泳每天上、下午强制游泳2 2小时，连续小时，连
11、续7 7天）天）药物：垂体后叶素药物：垂体后叶素 观察指标：观察指标：心电图心电图 血清血清CKCK、LDH LDH SOD SOD活性和活性和MDAMDA含量含量 24图图8 8 各组大鼠注射各组大鼠注射PitPit后不同时间点后不同时间点(0(03h)3h)导联心电图导联心电图 T T波变化的比较波变化的比较 25图图9 9 各组大鼠注射各组大鼠注射PitPit后后(0(03h)3h)心率变化率心率变化率(%)(%)比较比较26图图10 10 各组血清各组血清LDHLDH、CKCK活性的比较活性的比较27图图11 11 各组大鼠注射各组大鼠注射PitPit后血清后血清SODSOD、MDAM
12、DA含量的比较含量的比较 28小小 结结l通脉养心丸能够改善实验性气阴两虚型大鼠注射垂体后叶素通脉养心丸能够改善实验性气阴两虚型大鼠注射垂体后叶素(Pit)(Pit)后所引起的心肌缺血心电图的变化，对抗心肌缺血时心率后所引起的心肌缺血心电图的变化，对抗心肌缺血时心率减慢；减慢；l抑制受损心肌细胞释放抑制受损心肌细胞释放CKCK、LDHLDH；l升高升高SODSOD、降低、降低MDAMDA含量；含量；通脉养心丸具有抗气阴两虚型大鼠心肌缺血的作用。通脉养心丸具有抗气阴两虚型大鼠心肌缺血的作用。29实验六实验六 抗大鼠心肌细胞缺氧损伤的作用抗大鼠心肌细胞缺氧损伤的作用及机理研究及机理研究 模型：模型
13、：建立体外培养大鼠心肌细胞缺氧损伤模型建立体外培养大鼠心肌细胞缺氧损伤模型 方法：方法：血清药理学方法血清药理学方法 目的：目的：观察通脉养心丸抗大鼠心肌细胞缺氧损伤的作观察通脉养心丸抗大鼠心肌细胞缺氧损伤的作用，并探讨其作用机制，为临床用药提供实验依据。用，并探讨其作用机制，为临床用药提供实验依据。30研究内容研究内容 对细胞活力的影响对细胞活力的影响 对氧自由基的影响对氧自由基的影响 对心肌细胞内钙离子的影响对心肌细胞内钙离子的影响 对炎症反应的影响对炎症反应的影响 对心肌细胞凋亡的影响对心肌细胞凋亡的影响31检测指标检测指标 MTTMTT比色法测定细胞活力比色法测定细胞活力 心肌酶：心肌
14、酶：LDHLDH、CKCK 氧自由基方面：氧自由基方面：SODSOD、MDAMDA、GSHGSH、NONO 细胞内钙离子细胞内钙离子(Ca2+i)(Ca2+i)浓度变化浓度变化 炎性因子：炎性因子：IL-6IL-6、IL-1IL-1 流式细胞仪双标记法检测细胞凋亡率流式细胞仪双标记法检测细胞凋亡率32分组分组 空白对照组空白对照组 缺氧损伤组缺氧损伤组 通脉养心丸通脉养心丸 1g/kg1g/kg 2g/kg 2g/kg 4g/kg 4g/kg 8g/kg 8g/kg33通脉养心丸通脉养心丸(g/kg)图图1212 通脉养心丸对正常心肌细胞和缺氧损伤的心肌细胞活力的影响通脉养心丸对正常心肌细胞和
15、缺氧损伤的心肌细胞活力的影响 通脉养心丸通脉养心丸(g/kg)34通脉养心丸通脉养心丸(g/kg)通脉养心丸通脉养心丸(g/kg)图图13 13 通脉养心丸对缺氧心肌细胞通脉养心丸对缺氧心肌细胞LDHLDH、CKCK活性的影响活性的影响35通脉养心丸(g/kg)通脉养心丸(g/kg)图图14 14 通脉养心丸对缺氧心肌细胞通脉养心丸对缺氧心肌细胞SODSOD、MDAMDA含量的影响含量的影响 36通脉养心丸通脉养心丸(g/kg)通脉养心丸通脉养心丸(g/kg)图图15 15 通脉养心丸对缺氧心肌细胞通脉养心丸对缺氧心肌细胞NONO浓度的影响浓度的影响 图图16 16 通脉养心丸对缺氧心肌细胞通
16、脉养心丸对缺氧心肌细胞GSHGSH浓度的影响浓度的影响 37通脉养心丸通脉养心丸(g/kg)通脉养心丸通脉养心丸(g/kg)图图1717通脉养心丸对缺氧心肌细胞通脉养心丸对缺氧心肌细胞IL-6IL-6浓度的影响浓度的影响 图图18 18 通脉养心丸对缺氧心肌细胞通脉养心丸对缺氧心肌细胞IL-1IL-1浓度的影响浓度的影响 38图图19 19 通脉养心丸对缺氧心肌细胞凋亡率的影响通脉养心丸对缺氧心肌细胞凋亡率的影响 通脉养心丸通脉养心丸(g/kg)39图图20 20 通脉养心丸对缺氧心肌细胞钙离子荧光强度的影响通脉养心丸对缺氧心肌细胞钙离子荧光强度的影响 40小小 结结通脉养心丸能够提高正常大鼠心肌细胞及缺氧损伤心肌细胞通脉养心丸能够提高正常大鼠心肌细胞及缺氧损伤心肌细胞活力活力降低心肌细胞缺氧损伤后降低心肌细胞缺氧损伤后LDHLDH、CKCK的释放的释放通脉养心丸有显著升高通脉养心丸有显著升高SODSOD活性，升高活性，升高GSHGSH浓度，降低浓度，降低MDAMDA、NONO浓度的作用浓度的作用降低炎症因子降低炎症因子IL-6IL-6、IL-1IL-1的表达的表达降低缺氧损伤心肌细胞
