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1、猪轮状病毒临床诊断案例轮状病毒(RV)，毒如其名，是哺乳动物幼兽肠道的一大宿敌。车轮状的轮状病毒粒子人类医学界至今流传着关于它的传说：“几乎世界上每个大于五岁的小孩都曾感染过轮状病毒至少一次”。当轮状病毒感染一个年出栏15万头仔猪的母猪场会发生什么呢？本案例将为大家展示轮状病毒是如何摧残仔猪的肠绒毛，并最终长期影响母猪场的生产效益的。病史调查这是南方的一个万头母猪场，地处平原，四条生产线田字型排布，高度集中；猪场连续生产，栏舍周转紧张。在很长一段时间内，产房哺乳仔猪死亡数占出生活仔数的比例偏高。该场产房哺乳仔猪某一周的死亡率为11.5%（黑色箭头）猪场实验室的日常腹泻监测结果显示轮状病毒长期存
2、在（1年以上，并且期间还发生过一起持续6个月的PEDV疫情）。虽然坚持产房的严格洗消和全进全出，并跟胎免疫轮状病毒的组织灭活疫苗，但轮状病毒仍在四条生产线此起彼伏。仔猪腹泻粪便RV检测阳性（每条线10个产房）母猪场环境监测RV阳性各线产房仔猪死亡原因统计显示，死亡主要为处死、压死和弱死仔猪，和腹泻直接相关的死亡并不多。对各线死亡仔猪的日龄进行统计，发现10日龄之后的死亡，甚至断奶前后的死亡异常高。这与驻场兽医和猪场管理者反馈的弱仔、次品苗增多相一致。具体统计各线腹泻仔猪的发病日龄，发现腹泻发生的严重程度3线（581窝）4线（281窝）2线（139窝）1线（136窝），与各线仔猪死亡总数排名一致
3、；大致有两个发病高峰，7日龄左右和/或12日龄左右，可能与产房工作流程有关，尤其需要上产床的操作，例如补铁剪尾去势。临床症状与尸检大体病变由驻场兽医挑取6头未使用抗生素治疗的活体急性腹泻仔猪和2头活体正常仔猪传递至猪场外围的无害化处理区进行病理剖检。外观检查发现，腹泻仔猪呈糊状或乳糜状腹泻，脱水症状较轻。糊状或乳糜状腹泻，脱水症状较轻剖检大体观察发现，胃扩张，内有大量凝乳；小肠轻度到重度扩张，内容物稀薄，浆膜颜色充血潮红或失去血色和紧张性，或无明显改变；结肠外观颜色异常，呈白色或黄色（正常呈灰色）。腹泻猪肠系膜淋巴结肿大。腹泻猪肠系膜淋巴结肿大肠黏膜无变色、灶状坏死等炎症性病变；腹泻仔猪黏膜绒
4、毛较不腹泻猪变短、变稀疏。感谢台湾大学刘振轩老师（美国兽医病理学家，ACVP）传授的现场肉眼观察肠绒毛的方法，只需准备一根直底的玻璃试管便可以评估肠绒毛的发育情况和黏膜的损伤情况。腹泻猪黏膜绒毛较不腹泻猪变短、变稀疏实验室诊断粪便虫卵检查收集腹泻仔猪直肠末端粪便，使用饱和葡萄糖NaCl漂浮液进行虫卵检查，结果多见大量未消化脂滴，只在一头仔猪的粪便中发现一枚正在孵出的线虫虫卵。多见未消化的脂滴，只发现一枚正在孵出的线虫虫卵实验室诊断细菌分离（失败经验）剖检现场接种环采集腹泻仔猪（编号1-3号）和正常猪（编号4号）的空肠内容物和肠系膜淋巴结切面体液接种血琼脂平板，分别进行有氧和厌氧培养（三菱厌氧产
5、气袋和密封袋），有氧生长菌落直接使用TSB培养基摇菌，然后菌液送检测序公司做16S菌种鉴定，结果测序序列存在套峰，勉强能用的序列比对出一个令人疑惑的结果：虽然送检菌液的革兰氏染色与不动杆菌的形态描述吻合（存在短杆状和球状两种形态），但笔者至今未能对该细菌在本案例的出现及其影响作出合理解释（属于污染还是潜在致病？）。以上临床细菌分离鉴定操作至少有点值得改进的地方：不要使用肠内物作为细菌分离的样品；细菌分离后要对优势菌进行纯化；细菌16S鉴定不要直接送检菌液，容易出现套峰，应自己提取菌液核酸并进行16s rDNA扩增，最后送检未纯化的PCR样品；细菌分离最好在实验室超净工作台中操作。实验室诊断组织
6、病理选取正常猪和腹泻猪大体观察病变典型、严重的十二指肠、空肠、回肠（肠壁菲薄、绒毛变短）进行组织固定（注意取材过程中动作要轻柔，固定部分黏膜不可用解剖器械刮蹭、拉扯），委外制片染色，结果如下：轮状病毒感染十二指肠组织病理观察我们再来回顾一下正常十二指肠绒毛形态：正常十二指肠组织形态轮状病毒感染空肠、回肠组织病理观察细菌啃食上皮细胞-空肠轮状病毒感染肠系膜淋巴结组织病理观察诊断结果腹泻仔猪小肠黏膜损伤严重，黏膜上皮细胞肿胀脱落，肠绒毛断裂、萎缩、消失，耐过仔猪肠粘膜开始修复。总结以上病史信息和实验室检测结果，该产房仔猪腹泻病例诊断为轮状病毒腹泻，继发、偶发条件致病菌的感染。造成的损失主要表现为肠粘膜损伤，造成吸收不良，营养缺乏，生长阻滞，最终导致断奶前处死、弱死仔猪增多，死淘率增高，断奶仔猪成本升高。. RV防控建议做好产房保温，尤其对于无大功率加热设备的母猪场产房；有效的免疫：做好后备母猪驯化，弱毒活苗效果基因匹配灭活苗效果基因不匹配灭活苗效果；有效的产房生物安全，做好产房洗消和母猪分娩前洗澡。加强仔猪的肠道健康，产房生物安全固然重要但不可过度，别忘记关心新生仔猪肠道菌群的自然定值和发育，可尝试将益生菌拌在干燥粉中在分娩时为新生仔猪施用（个人杜撰，没有实践过）；
