反相高效液相色谱法测定绞股蓝50%总皂苷提取物中芦丁和槲皮素的 【关键词】绞股蓝50%总皂苷提取物；,,芦丁；,,槲皮素；,,反相高效液相色谱法, 摘要：目的建立绞股蓝50%总皂苷提取物中芦丁与槲皮素的含量测定方法方法采用高效液相色谱仪，使用TURNERKrasilT18色谱柱〔250×4.6，5μ〕，流动相为0.4%磷酸水溶液甲醇乙腈进展梯度洗脱，流速为0.5l・in-1，检测波长为360n；柱温为40℃结果芦丁在0.37~3.70μg范围内有良好的线性关系，r=0.9999槲皮素在0.05~0.50μg范围内有良好的线性关系，r=0.9999；芦丁的平均加样回收率为99.2%，RSD为1.69%；槲皮素的平均加样回收率为99.1%，RSD为2.21%结论该方法简便快捷，准确度高 关键词：绞股蓝50%总皂苷提取物；芦丁；槲皮素；反相高效液相色谱法 DeterinatinfRutinandQueretinin50%TtalGypensideExtratinfGynsteabyRPHPL Abstrat：bjetiveTdeterinetheainflavnidsrutinandqueretinin50%ttalsapninsfGynsteabyRPHPL.ethdsTheseparatinasperfrednTURNERKrasilT18lun〔250×4.6，5μ〕，thebilephasensistedf0.4%phsphriaid-ethanl-aetnitrile，iththefllingratef0.5l・in-1at40℃，theavelengthfreasureentas360n.ResultsThealibratinurveserelinearintherangef0.37~3.70μgfrrutin(r=0.9999)andintherangef0.05~0.50μgfrqueretin(r=0.9999).Theaveragereveryfpundrutinas99.2%(RSD=1.69%),andthatfpundqueretinas99.1%(RSD=2.21%).nlusinThisethdisaurateandreprduible. Keyrds：50%TtalsapninsfGynstea;Rutin;Queretin;RPHPL绞股蓝(Gynstea)又名七叶胆，是葫芦科绞股蓝属植物。
该属植物我国有14种和3变种［1］现代药理学证明，绞股蓝具有抑制肿瘤、防止衰老、降低血脂、增强免疫力、镇静止痛、保护心脏和肝脏等作用［2］绞股蓝50%总皂苷提取物是总皂苷含量达50%的、一种适用于口服制剂消费的原料药，它具有很广的应用范围，故本文采用反相高效液相色谱法，可对绞股蓝50%总皂苷提取物中的芦盯槲皮素等成分进展有效的别离和准确的含量测定，并且操作简便、快速、灵敏度高、重现性好，能为建立绞股蓝50%总皂苷提取物的质量标准提供根据 1仪器与试药 DINEXP680高效液相色谱仪〔四元泵、hrelen色谱工作站、UVD170U检测器〕，AT201电子分析天平〔d=0.01g，瑞士〕，芦丁对照品〔中国药品生物制品检定所，批号0080－9705〕、槲皮素对照品〔中国药品生物制品检定所，批号081－9003〕；甲醇〔色谱纯，天津大茂化学仪器供给站〕、乙腈〔色谱纯，天津大茂化学仪器供给站〕，其它试剂均为分析纯，水为双蒸水绞股蓝原50%总皂苷提取物由湖北中医学院中药制剂教研室提供 2方法与结果 2.1色谱条件色谱柱为TURNERKrasilT〔4.6×250，5μ〕；以0.4%磷酸水溶液为流动相A，以甲醇为流动相B，以乙腈为流动相；按表1进展梯度洗脱，检测波长为360n；流速为0.5l・in-1，柱温为40℃。
理论板数按芦盯槲皮素峰计算应不低于3000色谱图见图1~4 表1梯度洗脱〔略〕 图1芦丁对照品HPL图谱〔略〕 图2槲皮素对照品HPL图谱〔略〕 图3绞股蓝50%总皂苷提取物供试品的HPL图谱〔略〕 图4空白溶剂图谱〔略〕 2.2供试品溶液的制备取本品0.2g，精细称定，置具塞锥形瓶中，精细参加甲醇50l，称定重量，超声处理30in，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，精细量取20l，蒸干，残渣用甲醇溶解并转移至5l量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得 2.3对照品溶液的制备精细称取芦丁对照品适量，加甲醇制成每毫升含0.368g的溶液，即得芦丁对照品溶液；精细称取槲皮素对照品适量，加甲醇制成每毫升含0.0548g的溶液，即得槲皮素对照品溶液 2.4标准曲线的制备分别精细汲取芦盯槲皮素对照品溶液1.0，2.0，4.0，6.0，8.0，10.0μl，注入液相色谱仪，测定峰面积值，结果见表1，以进样量为横坐标〔X〕，峰面积为纵坐标〔Y〕，绘制标准曲线，得芦丁的回归方程为：y=61.1945x+1.1004，r=0.9999；槲皮素的回归方程为：y=129.0360X－0.8334，r=0.9999。
线性范围：芦丁为0.37~3.70μg；槲皮素为0.05~0.50μg转贴于论文联盟.ll. 图5芦丁标准曲线〔略〕 图6槲皮素标准曲线〔略〕 2.5精细度实验取2.3项下芦丁和槲皮素对照品溶液各5μl，分别连续进样5次，测定峰面积，结果见表2～3芦丁和槲皮素的RSD分别为：0.08%和0.26% 表2芦丁精细度实验结果〔略〕 表3槲皮素精细度实验结果〔略〕 2.6稳定性实验取2.2项下样品溶液室温放置0，3，6，9，12，24h后测定，结果见表4~5，测得芦丁和槲皮素峰面积根本不变，RSD分别为1.77%，2.80%，说明样品溶液在24h之内稳定 表4芦丁稳定性实验结果〔略〕 表5槲皮素稳定性实验结果〔略〕 2.7重复性实验取同一批样品5份，照2.2项下的方法依法制备，测定样品中芦丁和槲皮素的含量，结果见表6~7测得芦丁和槲皮素含量的分别为0.955%和0.222%，RSD分别为1.29%和1.71% 2.8加样回收实验取含量的本品粉末6份，每份0.1g，精细称定，分别参加一定量的芦盯槲皮素对照品，按2.2项下的方法依法制备，按上述色谱条件进展测定，结果见表8~9。
芦丁加样回收率为99.6%，RSD为1.07%，槲皮素加样回收率为99.1%，RSD为2.21% 2.9样品测定按2.2项下方法配制样品溶液5份，依法测定，结果见表10 表6芦丁重复性实验结果〔略〕 表7槲皮素重复性实验结果〔略〕 表8芦丁加样回收实验结果〔略〕 表9槲皮素加样回收试验结果〔略〕 表105批绞股蓝药材中芦盯槲皮素含量测定结果〔略〕 3讨论 3.1提取方法的选择在绞股蓝原药材芦盯槲皮素的含量测定中，我们曾对不同极性的提取溶剂〔如：不同浓度的甲醇、不同浓度的乙醇〕和不同的提取方式〔如：超声、回流等〕进展过考察，并对提取时间进展了单因素实验，综合考虑以石油醚回流提取，除去脂溶性较大的成分，再以甲醇回流提取3h实际工资效果最好 3.2检测波长的选择在检测波长选择中根据对芦丁对照品、槲皮素对照品溶液紫外光谱的测定，在360n处有最大吸收，最终选择测定波长为360n 3.3流动相的选择流动相的选择曾使用过乙腈-水、乙腈-甲醇-水、甲醇-水、乙腈-0.4%磷酸等流动相进展等度及梯度洗脱，由于干扰峰难以别离，最后根据别离情况选择了表1中的流动相绞股蓝50%总皂苷提取物色谱图中除芦盯槲皮素的色谱峰外还有其他的色谱峰，别离度也较好，亦可以作为指纹图谱用于绞股蓝50%总皂苷提取物的鉴别。
经方法学验证，此方法能对绞股蓝50%总皂苷提取物中的芦盯槲皮素进展有效的别离和准确的含量测定，并且操作简便、快速、灵敏度高、重现性好，为建立适用于口服制剂的绞股蓝50%总皂苷提取物的质量标准提供了科学的根据 参考文献： ［1］丁树利,朱兆仪,李勇.绞股蓝及同属植物的生药学研究［J］.中国药学杂志,1994,29(2)：79. ［2］杨静.绞股蓝化学成分研究［J］.陕西中医，2000,21(8)：377.转贴于论文联盟.ll.。