人参皂苷Rg1与Rh1对树突状细胞表达HLA睤R、CD25、CD44、CD54、CD11c及E瞫electin的影响【摘要】目的：观察人参皂苷rg1和rh1对树突状细胞（dendritic cell，dc）表面分子cd25、hla瞕r、cd44、icam1、cd11c及e瞫electin表达的影响方法：用不同浓度的rg1和rh1分别加入成熟dc中，刺激一定时间后，用免疫组化法观察，并用图像分析法分析结果结果：除e瞫electin外，rg1和rh1均可不同程度地促进hla瞕r、cd25、cd11c、cd44和icam1的表达结论：rg1、rh1可增强dc表面促进t细胞活化的第一、二类信号系统分子的表达,提高其抗原递呈能力，并促进dc瞭细胞簇的形成而活化初始t细胞关键词】树突状细胞 人参皂苷 cd25 hla瞕r cd44 icam1 effect of ginsenoside rg1 and rh1 on the expression of hla瞕r,cd25,cd44, cd11c and e瞫electin on dendritic cell wang yi, hao yu, qiu quan瞴ing, huang qi瞗u. microbiology and immunology department, beijing university of chinese medicine, beijing 100029, china ［abstract］objective:to test the effect of ginsenoside rg1 and rh1 on the expression of cd25,hla瞕r,cd44,icam1,cd11c and e瞫electin on the surface of dendritic cell(dc).methods:mature dcs were treated with different doses of rg1 and rh1. certain time later, the expression of adhesion molecular was detected with immunohistochemical method and the results were recorded with imaging data.results:except for e瞫electin, both of rg1 and rh1 could increase the expression of hla瞕r,cd25,cd11c,cd44 and icam1 on dcs.conclusion:expression increase of surface molecular, including in two signals required by t cell activation, stimulated by rg1 and rh1, is propitious to the formation of dc t cell cluster that would enhance the antigen瞤resenting function of dc. ［key words］dendritic cell；ginsenoside；cd25；hla瞕r；cd44；icam1 人参皂苷rg1(rg1) 是人参的主要活性物质，具有增强免疫力及抗衰老活性［1］。
我们以往的研究表明，口服给药后，rg1及其肠内菌代谢产物rh1均可经人肠壁吸收入血，并发现rg1及rh1可通过增强前体dc与血管内皮细胞的黏附，而促进dc前体细胞的移行和发育成熟［2，3］；增加dc分泌il12p40蛋白及其mrna的转录，刺激t细胞的增殖及增强lpak细胞杀伤肿瘤的活力［46］因此，rg1及rh1具有启动和增强免疫应答的作用 成熟dc可表达多种辅助分子，包括高表达mhcⅰ、ⅱ类分子、b71、b72，某些黏附分子cd11c、cd50、cd54（icam1）、cd102和cd58，归巢受体cd105、cd44以及cd1、cd2、cd5、cd40、cd83、cd25等［7］这些表面分子的表达，是dc抗原递呈作用及活化初始t细胞的物质基础本实验用免疫组化法及图像分析，观察人参皂苷rg1和rh1对dc表面cd25、hla瞕r、cd44、icam1、cd11c及e瞫electin表达的影响，以阐明其对dc功能影响的分子机制 1材料与方法 1.1主要试剂及仪器正常人外周血白细胞层，由北京红十字血站提供；人参皂苷rg1标准品（北京生物制品检定所）；rh1由长春中医学院王本祥教授惠赠；淋巴细胞分层液（ρ=1.077）（上海第二化工厂）；rpmi1640、hepes、胎牛血清（fcs）、胰蛋白酶(美国gibco)；青霉素、链霉素（华北制药总厂）；rhil4(北京大学医学院免疫室)；gm瞔sf临床用制剂（利百复，华北制药厂生产）；鼠抗人cd44单抗（1∶3 000）（军事医学科学院微生物病菌研究所免疫室罗振革博士和孔祥英老师惠赠）；鼠抗人icam1单抗（深圳晶美生物医学公司）；鼠抗人cd25单抗（1∶10）（北京赛斯公司）；鼠抗人hla瞕r单抗（1∶50）、鼠抗人cd11c单抗（1∶50）及sabc瞐p免疫组化试剂盒（武汉博士德生物工程有限公司）。
co2恒温培养箱（美国froma）；倒置相差显微镜及显微照相系统（日本olympus）；涂片机（军事医学科学院仪器厂，ltp瞔离心涂片机）；低温冷冻离心机（日本hitachi）；leicadmirb图像分析仪；leica qwin soft分析软件 1.2方法 1.2.1dc的分离培养及鉴定见文献［5］ 1.2.2dc常规培养第7天后，将经鉴定后纯度为99%的成熟dc离心，加入rpmi1640完全培养基，调细胞浓度为1×105个/ml, 加入6孔板中，每孔3 ml分别加入rg1(100、10、1 μg/ml)和rh1(100、10、1 μg/ml)，同时设未加药的阴性对照，5%～7%co2培养箱培养2天后，用离心涂片机制备细胞涂片（每组3张）,涂片于室温干燥2小时以上，丙酮固定20分钟, pbs洗3次，按说明书步骤操作：滴加正常血清封闭液，室温20分钟，甩去多余液体；分别滴加待测的适当稀释的一抗，37℃温育2小时, 0.01 mol/l tbs洗3次；滴加生物素化山羊抗鼠igg，于37℃温育20分钟, 0.01 mol/l tbs洗3次；滴加试剂sabc瞐p，于37℃放置20分钟, 0.01 mol/l tbs洗4次，水洗1次；bcip/nbt用0.01 mol/l tbs(ph 9.0～9.5)按1∶20稀释混匀后加至涂片，37℃显色10～30分钟,镜下控制反应时间，水洗；核固红轻度复染，水洗，干燥后水溶性封片剂封片。
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