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1、一氧化氮在大鼠单侧睾丸扭转复位后对侧睾丸早期损伤中的作用_医学论文 【摘要】 目的:了解单侧睾丸扭转后对侧睾丸早期的病理改变及组织中一氧化氮（NO）含量的变化，阐明NO与对侧睾丸早期损伤之间的关系。方法:将56只青春期前SD大鼠随机分为假手术组和扭转组，每组28只。假手术组将左侧阴囊打开分离暴露睾丸后，不予扭转，即将睾丸再固定于阴囊壁上，并缝合阴囊。扭转组则依Turner法建立左侧睾丸扭转模型，均于扭转4 h后复位。两组分别于复位后1 h、4 h、24 h、1周各处死大鼠7只，取右侧睾丸行一氧化氮合酶（NOS）活性、NO含量、丙二醛（MDA）含量检测及病理评分。结果:与假手术组比较，扭转组对侧
2、睾丸的MDA含量、NO含量、NOS活性、病理评分等均有不同程度升高，且生精细胞层数结合精细小管直径所示的预后情况亦较差。结论:单侧睾丸扭转后对侧睾丸早期即可出现继发性损伤，过量NO在单侧睾丸扭转复位后对侧睾丸早期损伤中起主导作用。 【关键词】 一氧化氮 一侧睾丸扭转 对侧睾丸损伤 机制Abstract: Objective: To investigate the biochemical and histological changes in contralateral testes of rats with unilateral testicular torsion and elucidate
3、 the effects of nitric oxide (NO) in early mechanism of contralateral testis injury. Methods:56 prepubertal Sprague-Dawley rats were randomly divided into 2 groups, 28 rats in each group. Rats in group 1 underwent a sham operation of the left testes under general anaesthesia. Rats in Group 2 underwe
4、nt a similar operation but the left testes was rotated 720 clockwise for 4 h, maintained by fixing the testes to the scrotum, then detorsion was performed. All the right(untwisted) testes were removed from rats at 1 hour, 4 hour, 24 hour, 1 week intervals after surgery, seven rats were taken from ea
5、ch group each time. Then the biochemical parameters such as malondialdehyde (MDA), nitric oxide (NO), nitric oxide synthase (NOS) activity were evaluated; histology and seminiferous tubule diameter were assessed. Results:Compared with Group 1 (the sham operation group), the biochemical parameters an
6、d histological grades which were used to show the prognoses of the testicular function in group 2(the torsion/detorsion group) were increased with different levels, and associated with the decreased mean seminiferous tubule diameter, there were a worse prognoses in group 2. Conclusion: These results
7、 suggest the injury of contralateral testes may occur in early time after unilateral testicular torsion/detorsion, and the profuse tissue NO concentration may play a significant role in the contralateral testis.Key words: NO; unilateral testicular torsion; contralateral testis injury; mechanism睾丸扭转，
8、即精索扭转，可引发精索内营养血管箝闭，除致同侧睾丸急性缺血损伤外1，还可能致对侧睾丸不同程度的受损2。据Skoglund统计，该病主要集中于青春期前发病，平均发病年龄为14.9岁3。本研究拟通过动物实验证明单侧睾丸扭转后对侧睾丸早期是否可出现损伤，并试图阐明过量NO在对侧睾丸早期损伤中的作用。1 材料和方法 1.1 动物分组 选取出生约2830 d（青春期前）的健康雄性SD大鼠56只，体重150200 g，随机分为假手术组、安慰剂组，每组28只。1.2 动物模型建立 所有大鼠均在术前以25%乌拉坦行腹腔注射全麻。假手术组将左侧阴囊打开，分离暴露左侧睾丸后即予固定缝合。扭转组依Turner法建立
9、左侧睾丸扭转模型4:左下腹小切口，游离左侧睾丸，切断睾丸引带，分离周围组织至附睾头。睾丸顺时针扭转720，固定扭转侧睾丸防止 自然 复位，维持4 h后原切口打开复位扭转睾丸,关闭切口。1.3 标本制备 各组大鼠分别于术后1 h、4 h、24 h、1周时快速脱颈法处死7只，采集未扭转侧睾丸标本，将所有睾丸标本沿中轴切开分为两部分，一部分睾丸用于制备组织匀浆，另一部分睾丸迅速置于10%的中性福尔马林中待制作石蜡切片常规HE染色。1.4 检测方法1.4.1 生化指标检测：按试剂盒要求制备组织匀浆；以硝酸还原酶法测定NO含量，化学比色法测定丙二醛（MDA）含量与NOS活性。均严格按照试剂盒说明书操作。
10、1.4.2 睾丸组织病 理学 检查：置于光镜下镜检，观察睾丸曲细精管结构，计数生精上皮层数，测量平均曲细精管直径（MSTD），对睾丸组织结构依Cosentino法5评分，详见图14。1.5 统计学处理方法 用SPSS13.0统计软件进行分析，相关性用Pearson法检验，多组比较用单因素方差分析，组间两两比较方差齐性用LSD检验，方差不齐性用Dunnett T3检验。2 结果 扭转组中NO含量与病理评分呈正相关（P0.05)，MDA与病理评分间无明显相关(P0.05)。相对于假手术组，扭转组MDA含量、NO含量、NOS活性、病理评分等均在术后有明显升高。其中，MDA含量于术后4 h起增加，NO
11、S活性、NO含量于术后1 h起增加，病理评分于术后4 h起增加（均P0.05），详见表1。按大鼠生长周期，早期生精上皮层计数及MSTD无明显统计学意义，故取1周时进行比较。结果示术后1周时，假手术组生精上皮层计数及MSTD分别为(3.410.45)和(202.6122.64)，扭转组为(1.970.75)和(137.2228.05)，两组同类项相比差异有显著性（均P 3 讨论 当前关于单侧睾丸扭转复位后是否可致对侧睾丸损伤尚存在争论，部分学者认为早期对侧睾丸无损伤6，多数学者则认为对侧睾丸早期即可出现病理性改变7-10。本实验扭转组中，MDA作为细胞膜脂质受氧自由基攻击后的产物自复位后4 h起
12、升高，提示睾丸组织存在过氧化损伤；病理评分则在复位后24 h起升高，提示存在光镜下可见的生殖细胞损伤；复位后1周时扭转组的生精上皮层计数与MSTD明显降低，提示生精功能预后不良。结合上述现象，我们认为单侧睾丸扭转复位后可致对侧睾丸早期出现损伤。 单侧睾丸扭转复位后对侧睾丸早期损伤机制复杂，争议颇多。近年来多数学者认为，对侧睾丸损伤是由于扭转侧睾丸复位后再灌注损伤引起的，再灌注时生成的氧自由基、由NOS激活合成的NO均可直接或间接引起对侧睾丸组织损伤11。本实验中，MDA浓度高低可间接反映氧自由基攻击睾丸组织（即脂质过氧化反应）的强度，但其与直接反应睾丸损害的病理评分相关性并不显著；而NO含量则
13、与病理评分呈正相关，提示NO浓度越高，组织损伤越大；表明单侧睾丸扭转复位后对侧睾丸早期损伤中，相比于氧自由基，过量NO的损伤作用占了主导地位。结合研究资料12，我们对NO的损伤作用进行 总结 ：当单侧睾丸扭转复位后，一方面扭转侧生成过量的NO与氧自由基结合形成更具毒性的ONOO-，导致对侧睾丸组织的损伤;另一方面通过NO的促炎症递质聚集、过度扩张血管、诱导细胞凋亡等作用于对侧睾丸组织；同时，上述损伤可以激活更多的NOS致NO大量合成，形成恶性循环，造成更大的损伤。此外，我们发现在24 h1周时扭转组的NO值继续上升，而合成NO的NOS却没有相应增加；统计学检验示无明显相关，估计24 h1周时增
14、加的NO可能是由对侧睾丸通过局部血运转移而来。【 参考 文献 】 1 姜涛,张仁科,宋希双,等.睾丸扭转处理与探讨J.中华男 科学 ,2004,10(37),185-187.2 林涛,李旭良.单侧睾丸扭转后对另侧睾丸影响的研究进展J.临床小儿外科杂志,2003,2(6):442-443.3 李铁强,朱朝阳,姜鸿胥,等.睾丸扭转(附18例报告)J.中华泌尿外科杂志,2002,23(10):631-632.4 Turner TT, Bang HJ, Lysiak JL.The molecular pathology of experimental testicular torsion sugges
15、ts adjunct therapy to surgical repairJ. J Urol, 2004, 172(6): 2574-2578.5 Cosentino MJ, Nishida M, Rabinowitz R, et al. Histopathol-ogy of prepubertal rat testes subjected to various durations of spermatic cord torsionsJ. Androl,1986,7(1):23-31.6 Aydin S, Ugras S, Odabas O, et al. Experimental testi
16、cular torsion and its effects on the contralateral testicleJ. Int Urol Nephrol, 1997, 29(6): 661-665.7 Savas C, Ozguner IF, Ozguner M, et al. The effects of unilat-eral testicular ischemia and hemicastration on contralateral testicular IGF-1 level,histology and lipid peroxidationJ.Int Urol Nephril,2003,35(2):231-235.8 Otcu S, Durakogugil
