精选学习资料 - - - - - - - - - 一、装柱 装柱子（添硅胶）时,常用的有两种方法：即湿法装柱和干法装柱,二 者各有优劣；不论干法仍是湿法, 硅胶（称为固定相更为广义 ）的上表面肯定要平整,并且硅胶（固定相）的高度一般为15cm 左右（ 长度没有肯定之说,根据自身情形而定,制备的大柱可以长达一米 ）,太短了可能分别成效不好,太长了也会由于扩散或拖尾导致分别成效不好；湿法装柱是先把硅胶用适当的溶剂拌匀后,再填入柱子中,然后再加压（土方法可以用养鱼的氧气泵加压或是用氮气,当然不加压也可以 ）用淋洗剂 "走柱子 ",本法最大的优点是一般柱子装的比较牢固, 没有气泡；（我一般都用湿法装柱 ）干法装柱就是直接往柱子里填入硅胶,然后再轻小扣打柱子两侧（湿法也要敲的,成效好点）,至硅胶界面不再下降为止,然后再填入硅胶至合适高度,最终再用油泵直接抽,这样就会使得柱子装的很牢固（ 一般 柱子不敢用油泵抽, 怕把柱子抽裂了 ）；接着是用淋洗剂 "走柱子 ",一般 淋洗剂是采纳 TLC 分析得到的绽开剂的比例再稀释一倍后的溶剂；通 常上面加压,下面再用油泵抽,这样可以加快速度；干法装柱较便利,但最大的缺陷在于 "走柱子 "时,由于溶剂和硅胶之间的吸附放热（可以 用手摸柱子明显感觉到） （梯度洗脱时,湿法装柱也会显现该情形,比较不好处理,可以缓慢转变溶剂,且置于通风处）,简单产愤怒泡,这名师归纳总结 一点在使用低沸点的淋洗剂时如乙醚（用乙醚最最明显 ）,二氯甲烷更第 1 页,共 5 页- - - - - - -精选学习资料 - - - - - - - - - 为明显；虽然产生的气泡在加压的情形下不易察觉,但是,一旦撤去压 力,如在上样、加溶剂等操作的时候,气泡就会释放出来,严峻时,整 个柱子变花,样品不行能平整地通过,当然也就谈不上分别了；解决的方法是：第一、硅胶肯定要压牢固；其次、 肯定要用较多的溶剂 复原到室温后再撤去压力；"走柱子 ",肯定要到柱子的下端不再发烫,也有介绍在硅胶的最上层填上一小层石英砂 〔我一般垫张滤纸,撒上石英砂,再放些棉花 〕,防止添加溶剂的时候,使得样品层不再整齐；但我的感觉是假如当心上样,添加溶剂,就没有这个必要；二、上样上样也有干法和湿法之分：干法（ 也称硅胶制沙 ）就是把待分别的样品用少量溶剂溶解后,在加入少量硅胶,拌匀后再旋去溶剂； 如此得到的粉末再当心加到柱子的顶层；干法上样较麻烦, 但可以保证样品层很平整； （我一般喜爱用这种方法,除非不能用 ）湿法上样就是用少量溶剂 （最好就是绽开剂, 假如绽开剂的溶解度不好,就可以用一极性较大的溶剂,但必需少量）将样品溶解后,再用胶头滴管转移得到的溶液, 沿着层析柱内壁匀称加入； 然后用少量溶剂洗涤后,再加入；名师归纳总结 - - - - - - -第 2 页,共 5 页精选学习资料 - - - - - - - - - 湿法较便利,但不溶剂让其完全被硅胶匀称吸附,不简单跑的很平整柱层析关键在于柱子是否装好（这是最大影响因素 ）和淋洗剂是否挑选恰当；而淋洗剂的挑选就是通过 TLC 确定；这里要指出的一点是： TLC（作用仍是很大的 ）的作用除了跟踪反应进程, 检测试剂和原料纯度外,一个重要的用途就是为柱层析挑选适当的淋洗剂；上样完毕后,接着即用淋洗剂淋洗；淋洗剂一般采纳 TLC 分析得到的绽开剂的比例再稀释一倍后的溶剂；由于层析柱和薄板的不同,即使两者使用的硅胶都相同,但是在把TLC 分析得到的绽开剂用在柱层析时,也显得极性偏大,所以要稀释一倍,但又不能稀释太多,否就成了靠扩散 作用来分别,成效也不会好； （这一点很有用,不过有些特别情形也不 肯定,假如要保险可以先做根小柱子跑一下,这样最安全,就是花点时 间）三、收集主要依靠 TLC（ 据说国外有石英柱, 直接用荧光灯照能看出来, 不过太 贵了,在国内不肯定适用 ）,需要切记的是：第一、某种样品在这种绽开剂中只显示一个点,并不等于在别的绽开剂 中也只显示一个点；因此在查找绽开剂时,多尝试几种比例不同,成分名师归纳总结 不同的绽开剂；绽开剂的极性太小,点分不开,极性太大,也分不开.第 3 页,共 5 页- - - - - - -精选学习资料 - - - - - - - - - 一般以目标产物的 Rf 值在 0.3 左右为正确；其次、点不能点得太浓（ 在最终时应当点的浓点,这样看看有无收尽产品）,否就简单重叠 ,不易判定 ,由于假如两个点相近的话 ,一浓就变成一个点了；第三、板上点的绽开的清晰程度和溶剂的极性和物质在该溶剂中的溶解性有关,只有两者比较合适才能有一个交好的分别成效；挑选适当的绽开剂是首要任务.一般常用溶剂依据极性从小到大的次序排列大致为：石油迷 <己烷 <苯 <乙醚 绽开剂的比例要靠尝试 . 一般依据文献（ 这是首选 ）中报道的该类化合物用什么样的绽开剂,就第一尝试使用该类绽开剂,然后不断尝试比例,直到找到一个分别成效好的绽开剂；许多时候 ,绽开剂的挑选要靠自己不断变换绽开剂的组成来达到正确效果；不行可以尝试两两混合,三者混合,一般把两种溶剂混合时 ,采纳高极性 /低极性的体积比为1/3 的混合溶剂 ,假如有分开的迹象 ,再调整比例,达到正确成效,假如没有分开的迹象,最好是换溶剂；在利用 TLC 跟踪反应时,在点板的时候往往是反应体系的混和溶液点一个点 A,每种难挥发的原料各点一个点B,C, D 等等,然后全部的原名师归纳总结 料和反应体系的混合溶剂再共同点一个混合点X,这些点在板上的位第 4 页,共 5 页置如下列图：A X B C D - - - - - - -精选学习资料 - - - - - - - - - 这样的好处是绽开后可以清晰地观察每个点的位置,把 A 这个点绽开后的各个层份的 点与 B,C, 等原料比较,从而判定原料消逝没有,点混合点 X 的目的在于,便利观看,由于有时候,板绽开后,各点的位置有些变形,或者由于边缘效应等等,使得判定不易；（我喜爱用小板,跑的快,很快见到结果,为了防止小板的边缘,用机器板较好 ）利用 TLC 判定物质的纯度时,假如不能完全确定,可以再结合其他检 测手段,如 NMR ,由于某种样品在这种绽开剂中只显示一个点,并不 等于在别的绽开剂中也只显示一个点；但好玩的是,由于H-NMR 可鉴别 的纯度也就在95%左右,有时候H NMR 现示较纯的东西,一点板就会发觉有几个点；所以,两者要结合 使用；假如有标准品或是以前做过的,对个对比最便利；名师归纳总结 - - - - - - -第 5 页,共 5 页。