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1、色谱色谱分离法分离法n薄层薄层色谱色谱n柱柱色谱色谱n纸纸色谱色谱n实验内容：实验内容： 色色谱谱法法的的基基本本原原理理是是利利用用混混合合物物中中各各组组分分在在某某一一物物质质中中的的吸吸附附或或溶溶解解性性能能（即即分分配配）的的不不同同，或或其其它它亲亲和和作作用用性性能能的的差差异异，使使混混合合物物的的溶溶液液流流经经该该物物质质时时进进行行反反复复的的吸吸附附或或分分配配等作用，从而将各组分分开。等作用，从而将各组分分开。 流流动动的的混混合合物物溶溶液液称称为为流流动动相相；固固定定的的物物质质称称为为固固定定相相（可可以以是是固固体体或或液液体体）。根根据据组组分分在在固固
2、定定相相中中的的作作用用原原理理不不同同，可可分分为为吸吸附附色色谱谱、分分配配色色谱谱、离离子子交交换换色色谱谱、排排阻阻色色谱谱等等；根根据据操操作作条条件件不不同同，可可分分为为柱柱色色谱谱、纸纸色色谱谱、薄薄层层色色谱谱、气相色谱及高效液相色谱气相色谱及高效液相色谱等类型。等类型。返回固定相（吸附剂）的要求：固定相（吸附剂）的要求：1.具有较大的表面积和一定的吸附能力具有较大的表面积和一定的吸附能力2.与流动相及试液中各组分不发生化学反应，并不溶于流动相与流动相及试液中各组分不发生化学反应，并不溶于流动相3.应粒度均匀，颗粒细小应粒度均匀，颗粒细小常见官能团的极性常见官能团的极性常用流
3、动相的极性常用流动相的极性薄层色谱薄层色谱(Thin Layer Chromatography)常用常用TLC表示，表示，又称薄层层析，属于又称薄层层析，属于固液吸附色谱固液吸附色谱。是近年来发展起来的。是近年来发展起来的一种微量、快速而简单的色谱法，它兼备了柱色谱和纸色谱一种微量、快速而简单的色谱法，它兼备了柱色谱和纸色谱的优点。的优点。它展开时间短（几十分钟就能达到分离目的），分离效率高它展开时间短（几十分钟就能达到分离目的），分离效率高（可达到（可达到300-400块理论塔板数）。块理论塔板数）。一方面一方面适用于小量样适用于小量样品（几到几十微克，甚至品（几到几十微克，甚至0.01 g
4、）的分离的分离；另一方面若在；另一方面若在制作薄层板时，把吸附层加厚，将样品点成一条线，则可制作薄层板时，把吸附层加厚，将样品点成一条线，则可分分离多达离多达500mg的样品。因此又可用来精制样品的样品。因此又可用来精制样品。 薄薄层层色色谱谱是是在在被被洗洗涤涤干干净净的的玻玻板板（103cm左左右右）上上均均匀匀的的涂涂一一层层吸吸附附剂剂或或支支持持剂剂，待待干干燥燥、活活化化后后将将样样品品溶溶液液用用管管口口平平整整的的毛毛细细管管滴滴加加于于离离薄薄层层板板一一端端约约1cm处处的的起起点点线线上上，凉凉干干或或吹吹干干后后置置薄薄层层板板于于盛盛有有展展开开剂剂的的展展开开槽槽内
5、内，浸浸入入深深度度为为0.5cm。待待展展开开剂剂前前沿沿离离顶顶端端约约1cm附附近近时时，将将色色谱谱板板取取出出，干干燥燥后后喷喷以以显显色色剂剂，或或在在紫紫外外灯灯下下显显色色。记记下下原原点点至至主主斑斑点点中中心心及及展展开开剂剂前前沿沿的的距距离离，计计算算比比移移值值（Rf）：）：良好的分离，良好的分离，Rf 值应在值应在0.15-0.75之间之间1、定定性性分分析析物物质质。（通通过过与与已已知知标标准准物物对对比比的的方方法进行法进行未知物未知物 的鉴定的鉴定，检验物质是否纯净检验物质是否纯净）2、快快速速分分离离少少量量物物质质。 （几几到到几几十十微微克克，甚甚至至
6、0.01 g） 3、跟跟踪踪反反应应进进程程。在在进进行行化化学学反反应应时时，常常利利用用薄薄层层色色谱谱观观察察原原料料斑斑点点的的逐逐步步消消失失，来来判判断断反反应应是是否否完成。完成。4、用薄层色谱法确定柱色谱的淋洗剂。、用薄层色谱法确定柱色谱的淋洗剂。 薄层色谱的用途：薄层色谱的用途： 此法特别适用于此法特别适用于挥发性较小或在较高温度易挥发性较小或在较高温度易发生变化发生变化而不能用气相色谱分析的物质。而不能用气相色谱分析的物质。薄层薄层色谱色谱n吸附剂的选择吸附剂的选择n薄层板的制作薄层板的制作n展开剂的选择展开剂的选择n点样与展开点样与展开n显色显色n实验关键步骤：实验关键步
7、骤：n定性与定量定性与定量吸附剂的选择吸附剂的选择 薄薄层层色色谱谱用用的的吸吸附附剂剂和和支支持持剂剂：薄薄层层吸吸附附色色谱谱的的吸吸附附剂剂最最常常用用的的是是氧氧化化铝铝和和硅硅胶胶；分分配配色色谱谱的的支支持持剂剂为为硅硅藻藻土土和纤维素。和纤维素。 其颗粒大小一般为其颗粒大小一般为260260目以上目以上。颗粒太大，展开剂移。颗粒太大，展开剂移动速度快，分离效果不好；反之，颗粒太小，溶剂移动动速度快，分离效果不好；反之，颗粒太小，溶剂移动太慢，斑点不集中，效果也不理想。太慢，斑点不集中，效果也不理想。吸附剂的活性与其含水量有关，吸附剂的活性与其含水量有关，含水量越低，活性越高。含水
8、量越低，活性越高。 化合物的吸附能力与分子极性有关化合物的吸附能力与分子极性有关，分子极性越强，分子极性越强，吸附能力越大。吸附能力越大。化化合合物物的的吸吸附附性性与与它它们们的的极极性性成成正正比比，化化合合物物分分子子中中含含有有极极性性较较大大的的基基团团时时，吸吸附附性性也也较较强强，各各种化合物对氧化铝的吸附性按以下次序递减：种化合物对氧化铝的吸附性按以下次序递减：酸酸和和碱碱 醇醇、胺胺、硫硫醇醇 酯酯、醛醛、酮酮 芳芳香香族族化合物化合物 卤代物、醚卤代物、醚 烯烯 饱和烃饱和烃n硅胶：常用吸附剂。硅胶：常用吸附剂。n氧化铝：用于非极性化合物的分离，根据制备时的氧化铝：用于非极
9、性化合物的分离，根据制备时的PH不同，又分为碱性、中性和酸性。不同，又分为碱性、中性和酸性。n聚酰胺；分离易生成氢键的极性化合物。聚酰胺；分离易生成氢键的极性化合物。n纤维素：极性有机化合物及金属阳离子、阴离子分离。纤维素：极性有机化合物及金属阳离子、阴离子分离。吸附剂的选择吸附剂的选择薄层板制备的好坏直接影响色谱的结果。薄层应薄层板制备的好坏直接影响色谱的结果。薄层应尽量均匀且厚度（尽量均匀且厚度（0.251mm）要固定。否则，要固定。否则，在展开时前沿不齐，色谱结果也不易重复。在展开时前沿不齐，色谱结果也不易重复。 （1）平平铺铺法法：用用薄薄层层涂涂布布器器涂涂布布，它它适适合合于于科科
10、研研工工作作中数量较大要求较高的需要中数量较大要求较高的需要（2）浸浸渍渍法法：把把两两块块干干净净的的玻玻片片叠叠合合，浸浸入入调调制制好好的的吸附剂浆料中，取出后分开、凉干。吸附剂浆料中，取出后分开、凉干。 （3）简易平铺法（倾注法）简易平铺法（倾注法）：将配制好的浆料倾注：将配制好的浆料倾注到清洁干燥的载玻片上，拿在手中轻轻的左右摇晃，使到清洁干燥的载玻片上，拿在手中轻轻的左右摇晃，使其表面均匀平滑，在室温下凉干后进行活化。其表面均匀平滑，在室温下凉干后进行活化。 本实验用此法制备薄层板本实验用此法制备薄层板6片：吸附剂为硅胶片：吸附剂为硅胶G（ 4g4g ），用用0.5%的羧甲基纤维素
11、钠水溶液（的羧甲基纤维素钠水溶液（8-108-10mlml ）调成浆料。）调成浆料。薄层板的制作薄层板的制作 薄层板的活化薄层板的活化 将将涂涂布布好好的的薄薄层层板板置置于于室室温温凉凉干干后后，放放在在烘烘箱箱内内加热活化，活化条件根据需要而定。加热活化，活化条件根据需要而定。硅硅胶胶板板一一般般在在烘烘箱箱中中渐渐渐渐升升温温，维维持持105110活化活化30min。氧氧化化铝铝板板在在200烘烘4h可可得得到到活活性性为为级级的的薄薄板板，在在150160烘烘4h可得活性为可得活性为级的薄板。级的薄板。展开剂的选择展开剂的选择 薄层色谱展开剂的选择，主要根据薄层色谱展开剂的选择，主要根
12、据样品的极性、溶解度样品的极性、溶解度和吸附剂的活性和吸附剂的活性等因素来考虑。凡溶剂的极性越大，则对一等因素来考虑。凡溶剂的极性越大，则对一化合物的洗脱能力也越大，即化合物的洗脱能力也越大，即Rf值也越大（如果样品在溶剂值也越大（如果样品在溶剂中有一定溶解度）。薄层色谱用的展开剂绝大多数是有机溶中有一定溶解度）。薄层色谱用的展开剂绝大多数是有机溶剂，剂， 常用展开剂的极性按如下次序递增：常用展开剂的极性按如下次序递增：己己烷烷和和石石油油醚醚 环环己己烷烷 四四氯氯化化碳碳 三三氯氯乙乙烯烯 二二硫硫化化碳碳 甲甲苯苯 苯苯 二二氯氯甲甲烷烷 氯氯仿仿 乙乙醚醚 乙乙酸酸乙乙酯酯 丙丙酮酮
13、丙醇丙醇 乙醇乙醇 甲醇甲醇 水水 吡啶吡啶 乙酸乙酸所用展开剂必须所用展开剂必须纯粹和干燥纯粹和干燥，否则会影响吸附剂的活性和，否则会影响吸附剂的活性和分离效果。分离效果。 展开剂的选择展开剂的选择微量圆圈法点样与展开点样与展开n定性分析用玻璃毛细管点样，定量用微量注射器定性分析用玻璃毛细管点样，定量用微量注射器n样品溶液应为均一体系样品溶液应为均一体系通通常常将将样样品品溶溶于于低低沸沸点点溶溶剂剂（丙丙酮酮、甲甲醇醇、乙乙醇醇、氯氯仿仿、苯苯、乙乙醚醚和和四四氯氯化化碳碳）配配成成1%的的溶溶液液，用用内内径径小小于于1mm管管口口平整的毛细管点样：平整的毛细管点样：（1）先先用用铅铅笔
14、笔在在距距薄薄层层板板一一端端1cm处处轻轻轻轻划划一一横横线线作作为为起起始始线线，然然后后用用毛毛细细管管吸吸取取样样品品，在在起起始始线线上上小小心心点点样样，斑斑点点直径一般不超过直径一般不超过2mm。（2）若若因因样样品品溶溶液液太太稀稀，可可重重复复点点样样，但但应应待待前前次次点点样样的的溶溶剂剂挥挥发发后后方方可可重重新新点点样样，以以防防样样点点过过大大，造造成成拖拖尾尾、扩扩散散等现象，而影响分离效果。等现象，而影响分离效果。（3）若在同一板上点几个样，样点间距离应为）若在同一板上点几个样，样点间距离应为11.5cm。（4）点样要轻，不可刺破薄层点样要轻，不可刺破薄层。在在
15、薄薄层层色色谱谱中中，样样品品的的用用量量对对物物质质的的分分离离效效果果有有很很大大影影响响，所所需需样样品品的的量量与与显显色色剂剂的的灵灵敏敏度度、吸吸附附剂剂的的种种类类、薄薄层层的的厚厚度度均均有有关关系系。样样品品太太少少，斑斑点点不不清清楚楚，难难以以观观察察，但但样样品品量量太太多多时时往往往往出出现现斑斑点点太太大或拖尾现象，以至不易分开。大或拖尾现象，以至不易分开。 薄层色谱的展开，需要在密闭容器中进行。为使溶剂蒸薄层色谱的展开，需要在密闭容器中进行。为使溶剂蒸气迅速达到平衡，可在展开槽内衬一滤纸。常用的展开槽有：气迅速达到平衡，可在展开槽内衬一滤纸。常用的展开槽有：长方形
16、盒式和广口瓶式长方形盒式和广口瓶式 展开方式有：展开方式有：（1）上上升升法法 将将色色谱谱板板垂垂直直于于盛盛有有展展开开剂剂的的容容器器中中，适适合合于于含含粘合剂的色谱板。粘合剂的色谱板。（2）倾倾斜斜上上行行法法 色色谱谱板板倾倾斜斜1015角角【适适用用于于干干板板或或无无粘粘合合剂剂软软板板的的展展开开】；色色谱谱板板倾倾斜斜4560角角，适适用用于于含含有有粘粘合合剂剂的色谱板。的色谱板。（3）下下降降法法 用用滤滤纸纸或或纱纱布布等等将将展展开开剂剂吸吸到到薄薄层层板板的的上上端端，使使展展开剂沿板下行，这种连续展开的方法适用于开剂沿板下行，这种连续展开的方法适用于Rf值小的化合物。值小的化合物。（4）双双向向色色谱谱法法 将将样样品品点点在在方方形形薄薄层层板板的的角角上上，先先向向一一个个方方向向展展开开，然然后后转转动动90角角的的位位置置，再再换换另另一一种种展展开开剂剂展展开开。适适合合于成分复杂的化合物分离。于成分复杂的化合物分离。 显显色色凡凡可可用用于于纸纸色色谱谱的的显显色色剂剂都都可可用用于于薄薄层层色色谱谱。薄薄层层色色谱谱还还可可使使用用腐腐蚀蚀
