《酵母核糖核酸的提取及测定》由会员分享，可在线阅读，更多相关《酵母核糖核酸的提取及测定（4页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、本文格式为Word版，下载可任意编辑酵母核糖核酸的提取及测定 酵母RNA的提取及测定 姓名：张弛 学号：202200140157 班级：生院2022级生物基地 时间：2022年3月18日 测验目的 1、掌管稀碱法提取酵母RNA 2、了解测量核酸浓度不同方法的原理 3、掌管紫外吸收法测核酸浓度的原理和技术 测验原理 酵母核酸中RNA含量较多，DNA那么少于2%。RNA可溶于碱性溶液，当碱被中和后，可加乙醇使其沉淀，由此即可得到粗RNA制品。 核酸具有吸收紫外线的性质，在波长260nm处有最大吸收，且在确定浓度范围内吸收值与浓度成正比（5-45g/mL），符合朗伯-比尔定律。优点：样品用量少，不用
2、显色，测完后样品可以持续使用。 试剂与仪器 材料：干酵母粉、0.2%氢氧化钠溶液、pH试纸（pH1-14）、标准核酸：200g/mL 仪器：紫外分光光度计、细致电子天平、烧杯、量筒、离心机、移液枪、试管 测验步骤 1.提取： 称取4g酵母，研钵中研磨成粉末，倒入200mL三角瓶中，然后参与40ml 0.2%NaOH溶液，混匀，沸水浴30分钟。 2.分开： 4000转/分，15min，留存上清液。 3.沉淀RNA： 在上清液中参与40mL酸性乙醇，边加边搅拌，静置5min左右，再4000转/分开心，5min，留存沉淀。 4.洗涤纯化： 用20mL95%乙醇分两次洗涤沉淀，每次洗后3000转/分开
3、心5min；再用20mL无水乙醇洗涤两次，每次洗后3000转/分开心5min；收集沉淀 5.含量测定（紫外分光光度法）：切实称取0.2-0.25g样品核酸，加2mL0.2%氢氧化钠溶液和1mL水浸泡，再参与50mL左右的水调成糊状，转移至100mL烧杯中，用0.2%氢氧化钠溶液调pH至7，定容至100mL。 测定步骤： 取11支试管，编号，按下表参与试剂： 编号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 1 / 3 标准0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 1.4 1.6 0 0 0 RNA/mL 水/mL 7.8 7.6 0 7.4 0 7.2 0 7.0 0 6.8 0 6
4、.6 0 6.4 0 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0 待测液 0 摇匀，测定吸光值 测验结果 编号 1 吸光0.00值 1 2 4 3 3 4 5 5 9 6 9 7 4 8 5 9 8 10 8 11 0.274 0.140.240.300.410.510.600.710.270.26 样品RNA平均吸光值=0.273 由图可知样品RNA浓度（所测）=18.7g/mL 稀释前RNA浓度=18.7250=1870g/mL 100mL溶液中RNA=0.187g RNA含量=0.187/0.2411=77.6% 留神事项 1、沸水浴时，电炉下务必垫上大理石板，以防止桌面被烫坏。 2
5、、其次次洗涤时，按理应当用无水乙醚来洗，但是乙醚极易挥发，过多吸入会产生危害，所以从安好考虑改用无水乙醇。 3、离心时液体务必对称放置，相对的两个离心管所盛物体务必质量相等，用天平校准。 4、测RNA含量时，溶解样品先参与一片面NaOH调成糊状，再加溶液定容。 5、测吸光度时，以5g/mL的试管为参照。 6、计算时留神稀释度。 2 / 3 斟酌议论 1、RNA的吸光值与溶液的pH有关系，标准曲线是在确定pH下测出的，所以RNA溶解后要将pH调至7.0。 2、测验中会有屡屡转移、离心、沉淀、洗涤，期间不成制止地有样品损失，断定会造成RNA提取量降低。 3、核酸在260nm处有紫外吸光最大值，在R
6、NA浓度为5-45g/mL时，吸光值于浓度成正比，所以在溶解RNA后需要计算并稀释样品，使之浓度落在成正比的范围内，否那么会使测量结果不切实。 4、在测定RNA样液时，要制止假重复，不是取其次次定容后的样品连续测量三次，而是取第一次定容后的样液取三次，分别再定容，分别测定，这样可以消释定容、移液时的误差，假设分别测定的结果相差较大，可以再取第一次定容后的溶液持续定容。 5、在测量吸光度时要选择好比较，用于校正。可以选用蒸馏水或是5g/mL的标准RNA溶液来做对照。但考虑到吸光值与浓度成正比的范围是5-45g/mL，而蒸馏水RNA的浓度不在这个范围内，所以最好选择5g/mL的标准RNA溶液来最对照。 3 / 3 4
