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1、第第39讲微生物的培养及应用讲微生物的培养及应用2017备考备考最新考纲最新考纲1.微生物的分离和培养。微生物的分离和培养。2.培养基对微生物的选择作用。培养基对微生物的选择作用。1考点一微生物的实验室培养考点一微生物的实验室培养自自主主梳梳理理1.培养基培养基(1)概念:人们按照微生物对概念:人们按照微生物对 的不同需求的不同需求,配制出供其配制出供其 的营养基质。的营养基质。(2)营养组成:一般都含有营养组成:一般都含有 和和无无机机盐盐。此此外外,还需要满足微生物生长对还需要满足微生物生长对 、氧气以及、氧气以及 的的要求。要求。营养物质营养物质生长繁殖生长繁殖水、碳源、氮源水、碳源、氮
2、源pH特殊营养物质特殊营养物质固体固体液体液体22.无菌技术无菌技术(1)关键:防止关键:防止 的入侵。的入侵。(2)不同对象的无菌操作方法不同对象的无菌操作方法连一连连一连外来杂菌外来杂菌33.大肠杆菌的纯化培养大肠杆菌的纯化培养(1)制备牛肉膏蛋白胨固体培养基制备牛肉膏蛋白胨固体培养基(2)纯化大肠杆菌的方法纯化大肠杆菌的方法纯化培养原理:想方设法在培养基上得到纯化培养原理:想方设法在培养基上得到 的肉眼可见的的肉眼可见的,即可获得较纯的菌种。即可获得较纯的菌种。纯化大肠杆菌的关键步骤:纯化大肠杆菌的关键步骤: 。常用的微生物接种方法有两种常用的微生物接种方法有两种a.平板划线法:是通过平
3、板划线法:是通过在琼脂固体培养基表面在琼脂固体培养基表面 的操作的操作,将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。表面。由一个细胞繁由一个细胞繁殖而来殖而来称量称量灭菌灭菌倒平板倒平板菌落菌落接种接种接种环接种环连续划线连续划线4b. 法:是将菌液进行一系列的法:是将菌液进行一系列的 ,然然后后将将的的菌菌液液分分别别涂涂布布到到琼琼脂脂固固体体培培养养基基的的表表面面,进进行行培养。培养。(3)菌种的保存方法菌种的保存方法对于频繁使用的菌种对于频繁使用的菌种,可以采用可以采用 的方法。的方法。对于需要长期保存的菌种对于需要长期保存的菌种,可以采用可以采用 的方
4、法。的方法。稀释涂布平板稀释涂布平板梯度稀释梯度稀释不同稀释度不同稀释度临时保藏临时保藏甘油管藏甘油管藏5跟进题组跟进题组1.微微生生物物培培养养过过程程中中,要要十十分分重重视视无无菌菌操操作作,现现代代生生物物学学实实验验中中的的许许多多方方面面也也要要进进行行无无菌菌操操作作,防防止止杂杂菌菌污污染染,请请分分析析下下列列操操作中错误的是作中错误的是()煮煮沸沸消消毒毒可可以以杀杀死死微微生生物物的的营营养养细细胞胞和和部部分分芽芽孢孢 接接种种操操作作要要在在酒酒精精灯灯火火焰焰附附近近进进行行 无无菌菌繁繁殖殖脱脱毒毒苗苗时时,植植物物的的外外植植体体要要进进行行消消毒毒 家家庭庭制
5、制作作葡葡萄萄酒酒时时要要将将容容器器和和葡葡萄萄进进行行灭灭菌菌 培培养养基基要要进进行行高高压压蒸蒸汽汽灭灭菌菌 加加入入培培养养基基中中的的指指示示剂剂和和染染料不需要灭菌料不需要灭菌A. B.C.D.6解解析析无无菌菌操操作作包包括括消消毒毒和和灭灭菌菌。需需进进行行消消毒毒处处理理的的有有植植物物的的外外植植体体及及操操作作人人员员的的双双手手等等,需需进进行行灭灭菌菌的的有有器器皿皿、培培养养基基、添添加加剂剂(指指示示剂剂或或染染色色剂剂)等等。煮煮沸沸可可以以杀杀死死微微生生物物的的营营养养细细胞胞和和一一部部分分芽芽孢孢,属属于于消消毒毒;为为防防止止空空气气中中杂杂菌菌污污
6、染染,接接种种时时要要在在酒酒精精灯灯火火焰焰附附近近进进行行;家家庭庭制制作作葡葡萄萄酒酒时时所所利利用用的的微微生生物物是是葡葡萄萄表表面面的的酵酵母母菌菌,故故不不能能灭灭菌菌;培培养养基基常常进进行行高高压压蒸蒸汽汽灭灭菌菌。故故操作错误。操作错误。参考答案参考答案D72.下图甲、乙是微生物接种常用的两种方法下图甲、乙是微生物接种常用的两种方法,请回答相关问题。请回答相关问题。(1)图图 甲甲 是是 利利 用用 _法法 进进 行行 微微 生生 物物 接接 种种 ,图图 乙乙 是是 利利 用用_法法进进行行微微生生物物接接种种。这这两两种种方方法法所所用用的的接接种种工工具具分分别别是是
7、_和和_;对对这这两两种种接接种种工工具具进进行行灭灭菌菌和和消消毒毒的的方法依次是方法依次是_和酒精消毒。和酒精消毒。(2)接种操作为什么一定要在火焰附近进行?接种操作为什么一定要在火焰附近进行?_。8(3)下下图图是是采采用用上上述述接接种种方方法法接接种种后后培培养养的的效效果果图图解解,其其接接种种方方法是法是_(填填“图甲图甲”或或“图乙图乙”)。参参考考答答案案(1)平平板板划划线线稀稀释释涂涂布布平平板板接接种种环环涂涂布布器器灼烧灭菌灼烧灭菌(2)火焰附近存在着无菌区域火焰附近存在着无菌区域(3)图乙图乙91.实验室常用的消毒和灭菌的方法实验室常用的消毒和灭菌的方法项目概念常用
8、方法应用范围消毒使用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分微生物(不包括芽孢和孢子)煮沸消毒法:在100下煮沸56min一般物品巴氏消毒法:在7075下煮30min或在80下煮15min一些不耐高温的液体,如牛奶化学药剂消毒法如用酒精擦拭双手、用氯气消毒水源等紫外线消毒法:紫外灯照射30min接种室、操作台10灭菌使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物(包括芽孢和孢子)灼烧灭菌:酒精灯火焰接种工具的灭菌和试管口的灭菌干热灭菌:在160170下灭菌12h玻璃器皿、金属工具的灭菌高压蒸汽灭菌:在压力为100kPa,温度为121的条件下,灭菌1530min培养基及容器的灭菌112.两
9、种纯化细菌的方法的比较两种纯化细菌的方法的比较项目优点缺点适用范围平板划线法可以观察菌落特征,对混合菌进行分离不能计数适用于好氧菌稀释涂布平板法可以计数,可以观察菌落特征吸收量较少,较麻烦,平板不干燥效果不好,容易蔓延适用于厌氧菌和兼性厌氧菌123.平板划线操作平板划线操作3个易错点个易错点(1)灼灼烧烧接接种种环环之之后后,要要冷冷却却后后再再进进行行取取种种,以以免免温温度度太太高高杀杀死死菌菌种种(2)划线时最后一区域不要与第一区域相连划线时最后一区域不要与第一区域相连(3)划线用力要大小适当划线用力要大小适当,防止用力过大将培养基划破防止用力过大将培养基划破13考点二微生物的筛选和计数
10、考点二微生物的筛选和计数自主梳理自主梳理1.土壤中分解尿素的细菌的分离与计数土壤中分解尿素的细菌的分离与计数项目详细内容实验原理(1)能合成的细菌才能分解尿素(2)配制以为唯一氮源的培养基,能够生长的细菌就是能分解尿素的细菌数量统计(1)法(显微镜下用特定细菌计数板或血细胞计数板)(2)间接计数法:实验流程土壤取样配制土壤溶液和制备培养基 涂布平板与培养菌落脲酶脲酶尿素尿素直接计数直接计数稀释涂布平板法稀释涂布平板法系列稀释系列稀释计数计数142.分解纤维素的微生物的分离分解纤维素的微生物的分离(1)纤维素酶纤维素酶组成:纤维素酶是一种组成:纤维素酶是一种,一一般般认认为为它它至至少少包包括括
11、三三种种组组分分,即即 。作用作用复合酶复合酶C1酶、酶、Cx酶和葡萄糖苷酶酶和葡萄糖苷酶纤维二糖纤维二糖葡萄糖葡萄糖(2)纤维素分解菌的筛选纤维素分解菌的筛选原理原理红色复合物红色复合物透明圈透明圈15筛选方法:筛选方法: 染色法染色法,即通过是否产生即通过是否产生 来来筛筛选选纤纤维素分解菌。维素分解菌。培养基:以培养基:以 为唯一碳源的选择培养基。为唯一碳源的选择培养基。实验流程实验流程土壤取样:富含土壤取样:富含 的环境的环境选择培养:用选择培养:用 培养培养,以增加纤维素分解菌的浓度以增加纤维素分解菌的浓度 :制备系列稀释液:制备系列稀释液 涂布平板:将样品涂布到涂布平板:将样品涂布
12、到的培养基上的培养基上 挑选产生挑选产生 的菌落的菌落刚果红刚果红透明圈透明圈纤维素纤维素纤维素纤维素选择培养基选择培养基梯度稀释梯度稀释鉴别纤维素分解菌鉴别纤维素分解菌透明圈透明圈163.判断正误判断正误(1)选择培养基可以鉴定某种微生物的种类选择培养基可以鉴定某种微生物的种类()(2)从物理性状的角度看从物理性状的角度看,选择培养基多属于固体培养基选择培养基多属于固体培养基()(3)对对细细菌菌进进行行计计数数只只能能采采用用稀稀释释涂涂布布平平板板法法,而而不不能能用用平平板板划划线法线法()(4)筛筛选选能能分分解解尿尿素素的的细细菌菌所所利利用用的的培培养养基基中中,尿尿素素是是唯唯
13、一一的的氮氮源源()(5)分分解解尿尿素素的的细细菌菌在在分分解解尿尿素素时时,可可以以将将尿尿素素转转化化为为氨氨,使使得得培培养基的酸碱度降低养基的酸碱度降低()(6)纤纤维维素素是是组组成成植植物物细细胞胞壁壁的的主主要要成成分分在在纤纤维维素素酶酶的的作作用用下下,纤维素可以水解成葡萄糖纤维素可以水解成葡萄糖()参考答案参考答案(1)(2)(3)(4)(5)(6)17跟进题组跟进题组1.苯苯酚酚是是工工业业生生产产排排放放的的有有毒毒污污染染物物质质,自自然然界界中中存存在在着着降降解解苯苯酚酚的的微微生生物物。某某工工厂厂产产生生的的废废水水中中含含有有苯苯酚酚,为为了了降降解解废废
14、水水中中的的苯苯酚酚,研研究究人人员员从从土土壤壤中中筛筛选选获获得得了了只只能能降降解解利利用用苯苯酚酚的的细细菌菌菌菌株株,筛筛选选的的主主要要步步骤骤如如图图所所示示,为为土土壤壤样样品品。请请回回答答下下列列问题:问题:18(1)中中培培养养目目的的菌菌株株的的选选择择培培养养基基中中应应加加入入_作作为为碳碳源源,中中不不同同浓浓度度碳碳源源的的培培养养基基_(A.影影响响;B.不不影影响响)细细菌菌的数量的数量,如果要测定如果要测定中活细菌数量中活细菌数量,常采用常采用_法。法。(2)为为对对照照,微微生生物物在在中中不不生生长长,在在中中生生长长,与与培培养养基基的的主要区别在于
15、主要区别在于_;使使用用_法法可可以以在在上上获获得得单单菌菌落落。采采用用固固体平板培养细菌时进行倒置培养的原因是体平板培养细菌时进行倒置培养的原因是_。(3)实验过程中如何防止其他微生物的污染?实验过程中如何防止其他微生物的污染?_。19参考答案参考答案(1)苯酚苯酚A稀释涂布平板稀释涂布平板(2)的的培培养养基基没没有有加加入入苯苯酚酚作作为为碳碳源源,的的培培养养基基加加入入苯苯酚酚作作为为碳碳源源稀稀释释涂涂布布平平板板法法或或平平板板划划线线防防止止冷冷凝凝后后形形成成的的水水珠滴落在培养基上污染培养基珠滴落在培养基上污染培养基(3)培养基灭菌培养基灭菌,接种环境灭菌接种环境灭菌,
16、接种过程无菌操作接种过程无菌操作202.(2014新新课课标标全全国国卷卷)植植物物秸秸秆秆中中的的纤纤维维素素可可被被某某些些微微生生物物分解。回答下列问题。分解。回答下列问题。(1)分分解解秸秸秆秆中中纤纤维维素素的的微微生生物物能能分分泌泌纤纤维维素素酶酶,该该酶酶是是由由3种种组组分分组组成成的的复复合合酶酶,其其中中的的葡葡萄萄糖糖苷苷酶酶可可将将_分分解解成成_。(2)在在含含纤纤维维素素的的培培养养基基中中加加入入刚刚果果红红(CR)时时,CR可可与与纤纤维维素素形形成成_色色复复合合物物。用用含含有有CR的的该该种种培培养养基基培培养养纤纤维维素素分解菌时分解菌时,培养基上会出现以该菌的菌落为中心的培养基上会出现以该菌的菌落为中心的_。21(3)为为从从富富含含纤纤维维素素的的土土壤壤中中分分离离获获得得纤纤维维素素分分解解菌菌的的单单菌菌落落,某某同同学学设设计计了了甲、乙两种培养基甲、乙两种培养基(成分见下表成分见下表):酵母膏无机盐淀粉纤维素粉琼脂CR溶液水培养基甲培养基乙注:注:“”表示有表示有,“”表示无。表示无。据据表表判判断断,培培养养基基甲甲_(填填“能