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1、预防用疫苗临床前研究预防用疫苗临床前研究技术指导原则技术指导原则l由病毒、细菌或其他病原微生物为起始由病毒、细菌或其他病原微生物为起始材料，经培养增殖制成的减毒、灭活的材料，经培养增殖制成的减毒、灭活的病原体，或再经纯化、裂解、亚单位病原体，或再经纯化、裂解、亚单位（包括细菌类毒素）等方法处理制备的（包括细菌类毒素）等方法处理制备的富含免疫原性，刺激机体产生特异性免富含免疫原性，刺激机体产生特异性免疫学反应而达到预防某种疾病的产品，疫学反应而达到预防某种疾病的产品，为为预防用疫苗预防用疫苗。l本指导原则适用于用病毒、细菌或其他本指导原则适用于用病毒、细菌或其他病原微生物制备的预防用疫苗，其目的
2、病原微生物制备的预防用疫苗，其目的是为该类制剂提供一个共同的原则，指是为该类制剂提供一个共同的原则，指导制定临床前研究的方案，和确定具体导制定临床前研究的方案，和确定具体的研究内容。的研究内容。l一、基本原则一、基本原则（一）应符合国家药品管理法等相（一）应符合国家药品管理法等相关法律法规的要求；关法律法规的要求；（二）对所预防的疾病的流行情况进行（二）对所预防的疾病的流行情况进行研究研究,包括疾病的危害程度所涉及的人群包括疾病的危害程度所涉及的人群及病原的型和亚型等；及病原的型和亚型等；（三）对研制该类制品用于预防疾病的（三）对研制该类制品用于预防疾病的有效性、安全性及必要性进行分析；有效性
3、、安全性及必要性进行分析；l（四）应对该制品用于预防该疾病的利（四）应对该制品用于预防该疾病的利益风险比进行研究。根据该制品的预防益风险比进行研究。根据该制品的预防方案可能达到的效果及可能出现的副作方案可能达到的效果及可能出现的副作用或危害，对总体的利弊权衡进行评价，用或危害，对总体的利弊权衡进行评价，并提出拟采取避免或减少其危害性或副并提出拟采取避免或减少其危害性或副作用的措施。这种评价将是该方案能否作用的措施。这种评价将是该方案能否获得批准的重要依据之一。获得批准的重要依据之一。二、用于疫苗研究用的菌毒种二、用于疫苗研究用的菌毒种研究疫苗所用的研究疫苗所用的菌毒种菌毒种必须证明为引必须证明
4、为引起本病的细菌、病毒或其他病原体，如该起本病的细菌、病毒或其他病原体，如该菌毒株分离自人体，下述内容必须清楚。菌毒株分离自人体，下述内容必须清楚。（一）菌毒株名称及来源：（一）菌毒株名称及来源：1菌毒株名称菌毒株名称2菌毒株来源菌毒株来源（1）分离菌毒株的宿主一般情况；）分离菌毒株的宿主一般情况；（2）发病地点、发病日期；临床确诊日期、实验）发病地点、发病日期；临床确诊日期、实验室确诊日期；病人病程及病人转归。室确诊日期；病人病程及病人转归。l菌、毒种系指直接用于制造和检定生物菌、毒种系指直接用于制造和检定生物制品的细菌、立克次体或病毒。制品的细菌、立克次体或病毒。 3菌毒株分离原样本：菌毒
5、株分离原样本：咽试子、漱口液、咽试子、漱口液、痰液、血液、粪便、尿液、尸解标本的组痰液、血液、粪便、尿液、尸解标本的组织名称；取样日期；取样时病人的病期。织名称；取样日期；取样时病人的病期。4鉴于人类的血液在同一时间内较少感染鉴于人类的血液在同一时间内较少感染多种病毒或细菌，而咽试子、漱口液、痰多种病毒或细菌，而咽试子、漱口液、痰液、尿液、粪便等样品难免污染其他外源液、尿液、粪便等样品难免污染其他外源因子，因此用病人血液分离的菌、毒株较因子，因此用病人血液分离的菌、毒株较适宜用于研究疫苗。适宜用于研究疫苗。5分离菌、毒株的其他自然样本名称、来分离菌、毒株的其他自然样本名称、来源、数量、取样方法
6、等。源、数量、取样方法等。l（二）菌、毒株分离过程（二）菌、毒株分离过程1用细胞分离病毒，所用细胞名称、代次、用细胞分离病毒，所用细胞名称、代次、来源应清楚，应进行细胞无菌检测、支原来源应清楚，应进行细胞无菌检测、支原体和外原因子等检测；病毒分离不宜使用体和外原因子等检测；病毒分离不宜使用肿瘤原性的细胞系。尽可能使用非肿瘤原肿瘤原性的细胞系。尽可能使用非肿瘤原性细胞，如人二倍体细胞或性细胞，如人二倍体细胞或Vero细胞（非细胞（非洲绿猴肾细胞洲绿猴肾细胞 ）等。）等。2用动物分离病毒，对所用动物名称、品用动物分离病毒，对所用动物名称、品系、系、级别级别、年龄、接种途径、饲养条件和、年龄、接种途
7、径、饲养条件和制备毒种的动物脏器名称等须详细记载；制备毒种的动物脏器名称等须详细记载；如再适应到细胞，则还应参照上述对分离如再适应到细胞，则还应参照上述对分离用细胞的要求。用细胞的要求。l医学实验动物分为四级：医学实验动物分为四级： 一级为普通动物；一级为普通动物； 二级为清洁动物；二级为清洁动物； 三级为无特定三级为无特定病病原体动物；原体动物； 四级为无菌动物和悉生动物。四级为无菌动物和悉生动物。 l普通动物（普通动物（Conventioalanimals）是未经）是未经积极的微生物学控制，普遍地饲养在开放积极的微生物学控制，普遍地饲养在开放卫生环境里的动物。垫料和食物不经高压卫生环境里的
8、动物。垫料和食物不经高压消毒，饮水为自来水，不喂青饲料。鼠应消毒，饮水为自来水，不喂青饲料。鼠应排除肺炎病毒，沙门氏菌和链球菌，地鼠排除肺炎病毒，沙门氏菌和链球菌，地鼠不应有蛲虫。普遍动物只能供教养和一般不应有蛲虫。普遍动物只能供教养和一般性实验，不适用于研究实验。性实验，不适用于研究实验。l清洁普通动物（清洁普通动物（Clean conventional Clean conventional animal,CCVanimal,CCV）（亦称最低限度疾病动物）（亦称最低限度疾病动物MOAMOA）或称清洁动物（）或称清洁动物（Clean animal,CLClean animal,CL）l来自屏
9、障系统的来自屏障系统的SPFSPF动物，饲养在温湿度动物，饲养在温湿度恒定的普通设施中的动物。垫料、饲料、恒定的普通设施中的动物。垫料、饲料、用具等均应经过高压消毒。空气亦应经过用具等均应经过高压消毒。空气亦应经过一定的过滤，工作人员穿干净服装操作，一定的过滤，工作人员穿干净服装操作，此类动物的微生物控制标准基本与此类动物的微生物控制标准基本与SPFSPF相相同，不同之处为血清病毒抗体检查（脑脊同，不同之处为血清病毒抗体检查（脑脊髓炎病毒、鼠肝炎病毒髓炎病毒、鼠肝炎病毒）经常可检出）经常可检出一定滴度的抗体，但不允许出现临床症状一定滴度的抗体，但不允许出现临床症状和脏器的病理变化和自然死亡。和
10、脏器的病理变化和自然死亡。 l无特定病原体动物（无特定病原体动物（Specefic pathogen-Specefic pathogen-free animalsfree animals）是指机体内无特定的微生）是指机体内无特定的微生物和寄生虫存在的动物，简称物和寄生虫存在的动物，简称SPFSPF动物。动物。但非特定的微生物和寄生虫是允许存在的，但非特定的微生物和寄生虫是允许存在的，实际上就是指无传染病的健康动物。一般实际上就是指无传染病的健康动物。一般大多先培育出无菌动物或悉生动物后，再大多先培育出无菌动物或悉生动物后，再把其转移到有封闭系统（把其转移到有封闭系统（Barrier Barri
11、er SystemSystem）的设施中饲育繁殖。原则上）的设施中饲育繁殖。原则上SPFSPF动物室内是不允许存在病原菌的，但在封动物室内是不允许存在病原菌的，但在封闭系统环境中，难免有很多非病原性微生闭系统环境中，难免有很多非病原性微生物会逐渐进入动物机体内，故亦有人把这物会逐渐进入动物机体内，故亦有人把这个转移过程称之为通常动物化。个转移过程称之为通常动物化。l悉生动物（悉生动物（Cnotobiotes animalsCnotobiotes animals）是指）是指机体内带着已知微生物的动物。此种动物机体内带着已知微生物的动物。此种动物原是无菌动物，系人为的将指定微生物投原是无菌动物，系
12、人为的将指定微生物投给其体内，例如使大肠杆菌定居在无菌小给其体内，例如使大肠杆菌定居在无菌小鼠体内，在进行微生物检查时，仅能检出鼠体内，在进行微生物检查时，仅能检出大肠杆菌。亦有人工投给二种以上的已知大肠杆菌。亦有人工投给二种以上的已知微生物。悉生动物一般分为单菌微生物。悉生动物一般分为单菌（MonoxenieMonoxenie）、双菌（）、双菌（DixenieDixenie）、三菌）、三菌（TrixenieTrixenie），或多菌（），或多菌（PolyxeniePolyxenie）动）动物。此种动物同无菌动物一样是放在隔离物。此种动物同无菌动物一样是放在隔离器内饲育的，但因其带有已知的微生
13、物，器内饲育的，但因其带有已知的微生物，故隔离器内有微生物及其代谢产物的污染。故隔离器内有微生物及其代谢产物的污染。l无菌动物（无菌动物（Germ free animalsGerm free animals）是指机）是指机体内外均无任何寄生物（微生物和寄生虫）体内外均无任何寄生物（微生物和寄生虫）的动物。此种动物在自然界中并不存在，的动物。此种动物在自然界中并不存在，必须用人为的方法培育出来。方法：一般必须用人为的方法培育出来。方法：一般将临产前的健康动物用麻醉药品或颈椎臼将临产前的健康动物用麻醉药品或颈椎臼法处死后，立即浸泡在法处死后，立即浸泡在3737灭菌液中，送灭菌液中，送进无菌室（或无
14、菌隔离器），按无菌手术进无菌室（或无菌隔离器），按无菌手术进行剖腹，切除带胎子宫（子宫内首先应进行剖腹，切除带胎子宫（子宫内首先应无菌），将其浸入消毒液里并输送到另一无菌），将其浸入消毒液里并输送到另一隔离器中，切开子宫取胎，经用灭菌纱布隔离器中，切开子宫取胎，经用灭菌纱布揩拭仔体并断脐（电刀切断）后，放隔离揩拭仔体并断脐（电刀切断）后，放隔离器内人工喂乳或用其它品系的无菌母鼠作器内人工喂乳或用其它品系的无菌母鼠作保姆供养。保姆供养。l象小鼠和大鼠等用人工喂乳非常麻烦，故象小鼠和大鼠等用人工喂乳非常麻烦，故采用保姆代养较为方便。而象豚鼠因在一采用保姆代养较为方便。而象豚鼠因在一定程度上能自力饮
15、乳，故人工哺乳较容易。定程度上能自力饮乳，故人工哺乳较容易。另外，象禽类、鱼类、昆虫类，因是在卵另外，象禽类、鱼类、昆虫类，因是在卵中无菌的前提下进行的，故用药物将卵周中无菌的前提下进行的，故用药物将卵周围灭菌后移入无菌隔离器内使其孵化即可，围灭菌后移入无菌隔离器内使其孵化即可，而且，这些动物一般在在出生后能自力采而且，这些动物一般在在出生后能自力采食，故较易育成。食，故较易育成。l3 3确定分离菌株所用培养基名称、种类，确定分离菌株所用培养基名称、种类，以及分离培养的温度和条件。以及分离培养的温度和条件。（三）菌、毒株分离传代特性（三）菌、毒株分离传代特性应包括样品处理方法、首次应包括样品处
16、理方法、首次盲传盲传确证菌毒确证菌毒株阳性代次、菌毒株确证检定方法、每代株阳性代次、菌毒株确证检定方法、每代培养天数、病毒滴度、滴定方法、动物是培养天数、病毒滴度、滴定方法、动物是否发病或死亡等资料。否发病或死亡等资料。l盲传：一般是用于分离样本（血清，体盲传：一般是用于分离样本（血清，体液等）中的微生物（主要是细胞内寄生液等）中的微生物（主要是细胞内寄生的，比如病毒）。的，比如病毒）。取一定量的血清，接取一定量的血清，接种某种细胞，培养一定时间（种某种细胞，培养一定时间（7天），无天），无论上清中有没有微生物（如病毒），都论上清中有没有微生物（如病毒），都取该上清，继续接种这种细胞，如此循取该上清，继续接种这种细胞，如此循环几次，就称为盲传几代环几次，就称为盲传几代。（四）菌毒种建立和保存（四）菌毒种建立和保存应包括原始菌毒种代次、滴度，添加的应包括原始菌毒种代次、滴度，添加的保护剂的名称和浓度、存储条件等资料；保护剂的名称和浓度、存储条件等资料；原代菌毒种原代菌毒种是指已适应到可生产疫苗的是指已适应到可生产疫苗的细胞或培养基，可稳定传代、保留抗原细胞或培养基，可稳定传代、保留抗原性
