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1、微生物采抽样要求微生物采抽样要求20132013年年1212月月1v样本是进行一切实验室检测的基础v所有实验室检测结果都依赖于样本质量 样本采集管理的重要性v直接关系到实验室检测的准确性与效率v影响到处置事件的评估与策略制定疫情处理：疫情的判断与防控策略的制定监测与普查：流行状况的评估病例诊断：治疗方案制定、病人预后、疾病负担样本采集管理不善导致的后果v延误实验室检测结果，甚至产生错误的结果v误导疫情处理，导致疫情控制不力甚至蔓延v错误评估疾病流行状况，防治策略制定偏差v错误诊断，病人不满、失去信任v误导治疗，造成伤害，严重者导致死亡v不必要的重新采样或重新检测，增加不必要费用v疫情、食物中毒
2、样品采集时机不可重复，无法弥补 保证样本质量的第一要素 责任第一责任第一v责任心不强，对所有事情都敷衍或答应责任心不强，对所有事情都敷衍或答应对标本的接受不加思索对标本的接受不加思索v为照顾各种关系，放弃了提出合理要求的权利为照顾各种关系，放弃了提出合理要求的权利拥有权力的人必须支持、尊重实验室按制度办事拥有权力的人必须支持、尊重实验室按制度办事 必须要把对象利益放在第一位必须要把对象利益放在第一位 v对所需要技术范围不了解，工作的盲目性造成样本浪费对所需要技术范围不了解，工作的盲目性造成样本浪费微生物检测采抽样技术v微生物检测病原微生物样本：人工采集的、含有病原微生物的体液、组织、排泄物、污
3、染物等物质卫生微生物样本：产品（食用品）及环境物品等v微生物检测采抽样技术要素无菌操作技术生物安全防护专业技术微生物检测采抽样技术v微生物检测采抽样技术要素 无菌操作技术 生物安全防护 专业技术微生物检测采抽样基本原则无菌操作 防止一切可能的外来（交叉）污染生物安全防护 具有与采集病原微生物样本所需要的生物安全防护水平相适应的设备，包括个人防护用品（隔离衣、帽、口罩、鞋套、手套、防护眼镜等）、防护材料、器材和防护设施等专业技术要求 具有掌握相关专业知识和操作技能的工作人员管理要求 具有有效的防止病原微生物扩散和感染的措施， 具有保证病原微生物样本质量的技术方法和手段样本采集 样本采集程序确定采
4、样目的、类型、对象，制定采样要求确定采样目的、类型、对象，制定采样要求试剂耗材准备、现场人员场所准备试剂耗材准备、现场人员场所准备制定详细的采样记录表格制定详细的采样记录表格展开采样，规范标记样本展开采样，规范标记样本样本现场处理与保存样本现场处理与保存样本运输至实验室样本运输至实验室掌握事件重点与相应的操作规程掌握事件重点与相应的操作规程 质量关键点 标本采集1 1 1 1标记包装记录2 2 2 2样本保存运送3 3 3 3一、样品采集具体要求v食品样本采集v血液样本采集v粪便、肛拭子样本采集食品中细菌检测的样本采集v代表性：代表性：保证检验时能完全反映原来的样本状态，保证检验时能完全反映原
5、来的样本状态，应考虑各种影响因素，防止受到外源性污染、样应考虑各种影响因素，防止受到外源性污染、样品变质和细菌生长。品变质和细菌生长。v真实性：真实性：使检测结果真实地反映食品本来的卫生使检测结果真实地反映食品本来的卫生状况。采样必须注意以下问题：状况。采样必须注意以下问题：v平均样品：平均样品：粮：按三层（表、中、下）五点采样法，油：粮：按三层（表、中、下）五点采样法，油：抽取表层与底层油、混样检测。抽取表层与底层油、混样检测。v正常样品与异常样品：正常样品与异常样品：除采正常样品外，如发现有异常除采正常样品外，如发现有异常样本时，应分别进行检测。样本时，应分别进行检测。v样本数量：样本数量
6、：一般采集中样，一般采集中样，v中样：中样：即从食品的各部分取混合样品，一般即从食品的各部分取混合样品，一般200g200g。有些样。有些样品可达品可达500g500g。如粮食可分。如粮食可分3 3层层5 5点，充分混合后取点，充分混合后取500g500g。v小样：小样：也称检样，一般也称检样，一般25g25g。v避免外源性污染：避免外源性污染：v各种采样器、样品容器严格灭菌，无菌操作，尽可能采各种采样器、样品容器严格灭菌，无菌操作，尽可能采未开启的样品。未开启的样品。v防止样品中细菌的菌量及菌相的变化：防止样品中细菌的菌量及菌相的变化：时间：不得超过3h温度：04，冷冻样品仍应需保持在冷冻状
7、态v标签明确：标签明确：样品名、来源、数量、采样地点、采样人、采样年月日及采样地点，必要时注明采样温度、湿度及现场卫生状况，是否无菌操作血液样本的采集v（1）血液样本中可能有的细菌v金色葡萄球菌、链球菌、单核李斯特菌、炭疽杆菌，脑膜炎奈瑟菌、伤寒及副伤寒沙门菌，绿脓杆菌，气单胞菌，鼠疫耶尔森菌、布鲁菌、钩端螺旋体等v（2）样本采集及应注意事项v 采血时期及次数发热初期或发热高峰用抗菌药物前，已用药而不能中止的病人，应在下次用药前采集，用药前24h内采集采集3-4次血液标本，检出率可达90%以上v最好同时采集动脉血和静脉血v或由左右两侧肘静脉同时采集。采集部位不同，其菌数常不同v双部位的标本同时
8、培养，对判定检出菌是病原菌，还是污染菌有帮助v采集感染病灶局部附近血管的标本，也可提高检出率v 采血部位及采血量：v部位：一般肘静脉v血量：一般以培养基量的1/10为宜，如此可使稀释血液中的补体、抗体、调理素及溶菌酶等增殖抑制因子v已用抗菌药物的病人，以培养基量的1/20为宜v成人采血：510ml /次，婴幼儿：1-2ml /次v一般不用抗凝剂，EDTA，枸橼酸钠等抗凝剂可能对细菌有抑制作用，肝素抗凝尚未见对细菌有影响。 培养基中加入0.03-0.05%聚茴香脑碘酸钠（SPS），有抑制血清中杀菌物质的作用，并且对氨基糖苷类及多肽类抗生素有灭活效果，有利于检出细菌。v病人已用抗生素时v磺胺类药：
9、100ml培养基加对氨基苯甲酸5mgv青霉素：100ml培养基加200u青霉抗生素： 培养基中常加入硫酸镁，以中和链霉素、四环素、土霉素、金霉素、新霉素及多粘菌素等抗菌药物v血培养v1.血培养瓶含有0.025%SPS，可以起到抗凝、抗吞噬、抗鳌合的作用；还含有树脂、炭颗粒，可吸收血液中的抗生素，提高细菌培养的阳性率。v2.血量13ml时，将血分别放入两个血培养瓶，若瓶子装血太多将降低降低阳性率。粪便样本的采集v（1）粪便中可能发现的细菌 葡萄球菌、粪链球菌、产气荚膜梭菌、结核分技杆菌、伤寒、副伤寒及其他沙门菌、志贺菌、变形杆菌、绿脓杆菌、霍乱弧菌、副溶血性弧菌、假丝酵母菌等 v（2）样本的采集
10、 粪便：取有脓血、粘液部分的粪便23g，液体粪便取絮状物，盛于灭菌的广口瓶或蜡纸盒中，及时送检和接种 直肠拭子：插入肛门45cm深处（小儿23cm），轻轻转动，擦取直肠表面的粘液，盛入无菌试管或保存液中送检。 采集粪便标本注意事项：应尽量在病程早期和治疗前采集。v疾病急性期致病菌往往占优势，以后数日即迅速减少v服用服用抗菌药物3d，标本中病原菌即转阴性尽量采集新鲜粪便v若无法获得时，可用采便管或直肠拭子采集v采集时注意先取有脓血、粘液、上皮碎片等病理成分v固体标本采23g，液体标本采13ml标本立即送检v拖延送检可致病原菌数目迅速减少或杂菌过度生长，影响检出率v不能及时送检，标本置于保存液或运
11、送培养基中送检v国内、外最新生产、销售的运送培养基vStuarts,Cary-Blair,Amies,STGG 四种主要的运送培养基实例介绍：细菌性食物中毒采样要求样品采集流程v样品采集与送检流程 v无菌采样方法采集v及时做好样品标记，完整填写采样送检申请单 v详细填明检样名称、来源、送检时间、中毒情况、患者主要临床症状、检验项目等 样品采集数量v学校等集体单位至少采集新发病人或具有典型的临床症状、未经过抗生素治疗的样品（粪便或肛拭）10份 v可疑食品应分别采集（剩余食品、留样食品、原配料、半成品）v食品容器、用具和加工设备等环节采样510份 v食堂或盒饭公司从事食品从业人员进行肛拭采样样品采
12、集注意事项v采样用的试管、瓶子、盛器、剪/镊子、棉拭等均应无菌v采样用的生理盐水、卡里运送培养基及有关试剂等都应该满足新鲜、无菌的要求，同时应符合所需试剂量，卡里运送培养基为5ml/管为宜v肛拭、食品和环节等采样，其采样量须满足必须开展的检验项目的要求，食品采样应尽量多于25g（ml）以上v采样的同时，应及时做好样品标记，完整填写采样单。立即将检样送检验室，并有交接手续 各类样品采集方法v可疑食物、水样：将残余食物或水样用灭菌镊子或匙采取后置于灭菌容器中。体积较大的鱼、肉应在表面消毒后取内部检样。罐头样品可直接送检 v环镜样品：炊事用具如锅、碗、刀、抹布、操作人员的手等用棉拭涂擦采样，菜墩用刀
13、刮取表面后将刮取物放入灭菌容器中 各类样品采集方法v粪便、肛拭：粪便标本应尽量在病程早期和治疗前采集，同时应采集新鲜粪便，选取有脓血、粘液部分3-5克、水样便取含絮状物的2-5ml，盛于无菌容器中及时送检 若无法获得粪便时，可用保存液或增菌液湿润过的棉拭子插入肛门4-5cm深处（小儿2-3cm），轻轻转动一圈，擦取直肠表面的黏液后取出，盛入运送培养基或保存液中送检各类样品采集方法v呕吐物：直接放入无菌容器中及时送检 v咽拭样品：采集时应将棉签檫拭咽喉及扁桃体红肿处（特别是白膜处），然后将棉签插入4-5ml生理盐水中，尾部弃去 v血液：采集患者急性发病期（3天内）和恢复期（2周左右）各3ml全血
14、分离血清送检 各类样品采集方法v从业人员： 根据食物中毒的情况要求，可采取售货员或制作食品的工作人员及直接或间接接触食品的有关人员肛拭检样，特别对那些在事件发生前或现正患有肠炎、发烧、化脓性及可疑带菌者进行采样样品送检v检样采取后立即由专人在2小时内送区县疾病预防控制中心或（和）市疾病预防控制中心实验室检验 v送检检样时，应附送采样送检申请单，并按要求注意冷藏 v样品送检人员应与实验室收样或检验人员履行样品交接手续 腹泻标本的采集方法v粪便或呕吐物标本-5g或5-10ml，新鲜送往实验室。v肛拭子标本-仅适合于目标相对明确的腹泻病原检索，否则应采集多份肛拭子-使用不同的运送培养基及时送实验室检
15、测。肛拭子采样的注意事项v必须医务人员负责采集！拭子应插入肛门括约肌约3cm轻轻旋转拭子至少一周拭子应看到有粪便标本黏附v除非目标明确，否则不推荐肛拭子采样。v肛拭子标本一般不适用于毒素测定及病毒腹泻病原检测。采样与送检v水体：l水体的采样一般要求用灭菌的500ml水样瓶采集相对静止的表层水（30cm以内）500ml，加盖密封后在室温（20-25）下送实验室检测。l采样时应选择在水流平稳或静止处吸取。l每个采样点应相距数米采集不少于2瓶做为平衡检测。 l非疫情状态下的监测采样时间一般在清晨时，此时水体未受人群活动等因素影响。采样与送检v水产品：l通常选取活的或新鲜的水生动物为采集对象，有时也应
16、考虑冰冻的水生动物，以无菌操作采集合适的部位，如鳃部和/或肠内容物等，置采样瓶（管）或食品采样袋密封，在常温下送检。有条件的采样点可将水生动物整体采回实验室再进行相关处置。l同时要求以无菌棉签涂抹五只（条）以上的同类水生动物体表、鳃及肛门，置碱性蛋白胨水送检，每管碱性蛋白胨水作一份样品看待。海水产品采集注意问题v市场上的不要过分强调只采可疑的水产，要有交叉污染的意识；v整体与涂抹相结合，扩大数量弥补因杂菌竞争抑制等因素造成的不足；v整体样品要注意保湿，霍乱弧菌在干燥状态下，很快死亡。v尽快送检，一般不主张冷冻、冷藏海水产品采集注意问题v尽量集中在重点市场进行高密度、多品种采样；v市场里的桌面、砧板等等污染物也应考虑。病毒样本的采集v1 1. 流行性感冒病毒样本v采集时间：发病后头3d，越早越好，发病后7d虽然还能分离到病毒，但随时间延长，分离率大大地下降v标本种类：较好为鼻腔洗液，但病人不易接受，尤其是小孩，故常用咽喉拭子、鼻拭子或咽喉漱液v疑似流感死亡的病例：取肺，气管粘膜和血。v标本运送：4冰壶，送到实验室，越快越好，如48h内未能接种，放低温（最好-70）保存。v鼻腔或咽部洗液标
