《志贺氏菌检测ppt课件》由会员分享，可在线阅读，更多相关《志贺氏菌检测ppt课件（65页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、志贺氏菌的检验 志贺氏菌属 于肠杆菌科志贺氏菌属 ,根据生化特性不同将其分为四个群: A群-痢疾志贺氏菌；B群-福氏志贺氏菌 C群-鲍氏志贺氏菌；D群-宋内氏志贺氏菌 志贺氏菌属的细菌统称痢疾杆菌.临床上能引起痢疾症状的病原微生物很多,如志贺氏菌属 、沙门氏菌属、变形杆菌属、埃希氏菌属等，还有阿米巴原虫及病毒等。其中以志贺氏菌属 引起的细菌性痢疾最为常见，是细菌性痢疾的主要病原菌。通过食品和饮水传播，引起人的疾病。人对志贺氏菌的易感性很高，人是它的唯一宿主。所以在食物和饮用水的卫生检验时，常以是否含有志贺氏菌作为指标。志贺氏菌的检验一、实验目的 了解志贺氏菌生物学特性及原理 掌握志贺氏菌检验方
2、法 检验志贺氏菌的方法很多，但食品卫生微生物检验具有法规性，检验必须采用国家标准规定的方法。近年来发展了许多快速检验的新方法，如技术等。我们下面介绍的方法即是国家标准规定的方法。要弄清检验原理，首先需要了解志贺氏菌的生物学特性。 志贺氏菌的检验二、志贺氏菌的生物学特性 1、形态与染色：革兰氏阴性无芽胞杆菌，无荚膜，无鞭毛，不运动，有菌毛。 革兰氏阴性鲍氏志贺菌志贺氏菌的菌毛 志贺氏菌扫描电镜照片志贺氏菌扫描电镜照片志贺氏菌的透射电镜照片二、志贺氏菌的生物学特性2 2、志贺氏菌的培养特性：、志贺氏菌的培养特性： 需氧或兼性厌氧。营养要求不高，能在普通培养需氧或兼性厌氧。营养要求不高，能在普通培养
3、基上生长，最适温度为基上生长，最适温度为3737，最适，最适pHpH为为6.4-7.86.4-7.8。 3737培养培养18-2418-24小时后菌落呈圆形、微凸、光滑湿小时后菌落呈圆形、微凸、光滑湿润、无色、半透明、边缘整齐，直径约润、无色、半透明、边缘整齐，直径约2mm2mm，宋内，宋内氏菌菌落一般较大，较不透明，并常出现扁平的氏菌菌落一般较大，较不透明，并常出现扁平的粗糙型菌落。粗糙型菌落。 在液体培养基中呈均匀浑浊生长，一般不形成沉在液体培养基中呈均匀浑浊生长，一般不形成沉淀，无菌膜形成。淀，无菌膜形成。菌落形态学关注菌落的形态、大小、边缘、突起、颜关注菌落的形态、大小、边缘、突起、颜
4、色、质地等等，都是区分细菌的重要手段。色、质地等等，都是区分细菌的重要手段。福氏志贺氏菌的菌落特征 宋内志贺菌乳糖迟发酵菌株在麦康凯平板上的菌落特征细菌在肉汤培养基中的生长 均匀浑浊生长是什么意思？ 二、志贺氏菌的生物学特性3 3、志贺氏菌的生化特性：、志贺氏菌的生化特性： 本菌属都能分解葡萄糖，产酸不产气。大本菌属都能分解葡萄糖，产酸不产气。大多不发酵乳糖，多不发酵乳糖，仅宋内氏菌迟缓发酵乳糖。仅宋内氏菌迟缓发酵乳糖。靛基质产生不定，甲基红阳性，靛基质产生不定，甲基红阳性，VPVP试验阴试验阴性，不分解尿素，不产生性，不分解尿素，不产生H2SH2S。与肠杆菌科。与肠杆菌科各属细菌相比较，志贺
5、氏菌的主要鉴别特各属细菌相比较，志贺氏菌的主要鉴别特征为不运动，对各种糖的利用能力较差，征为不运动，对各种糖的利用能力较差，并且在含糖的培养基内一般不形成可见气并且在含糖的培养基内一般不形成可见气体。根据生化反应可进行初步分类。体。根据生化反应可进行初步分类。不发酵乳糖和发酵乳糖菌落二、志贺氏菌的生物学特性4 4、志贺氏菌的抗原构造与分型：、志贺氏菌的抗原构造与分型： 志贺氏菌属细菌的抗原结构由菌体抗原（志贺氏菌属细菌的抗原结构由菌体抗原（O O）及表）及表面抗原（面抗原（K K）组成。主要抗原有三种：型特异性抗）组成。主要抗原有三种：型特异性抗原、群特异性抗原、表面抗原（原、群特异性抗原、表
6、面抗原（K K抗原）。抗原）。 根据抗原构造的不同，按最新国际分类法，将本根据抗原构造的不同，按最新国际分类法，将本属细菌分为四个群、属细菌分为四个群、3939个血清型（包括亚型）个血清型（包括亚型） 附：志贺氏菌抗原分类。 附:志贺氏菌抗原分类 抗原构造与分型：抗原构造与分型：志贺氏菌属细菌的抗原结构由菌体抗原志贺氏菌属细菌的抗原结构由菌体抗原（O O）及表面抗原（）及表面抗原（K K）组成。主要抗原有三种：）组成。主要抗原有三种： 型特异性抗原：型特异性抗原：型多糖抗原为菌体抗原的一种，是光滑型型多糖抗原为菌体抗原的一种，是光滑型菌株所含有的重要抗原。当菌株变为粗糙型时，此抗原也菌株所含有
7、的重要抗原。当菌株变为粗糙型时，此抗原也常随之消失，各菌型所含的型抗原不同，可用于区别菌种常随之消失，各菌型所含的型抗原不同，可用于区别菌种的型别。的型别。 群特异性抗原：群特异性抗原：为光滑型菌株的次要抗原，也是菌体抗原为光滑型菌株的次要抗原，也是菌体抗原的一种。特异性较低，常在数种近似的菌内出现。在福氏的一种。特异性较低，常在数种近似的菌内出现。在福氏菌株中，由于所含群抗原不同，可将某些菌型分为多种亚菌株中，由于所含群抗原不同，可将某些菌型分为多种亚型，如福氏菌型，如福氏菌2 2型，根据群抗原不同，可分成型，根据群抗原不同，可分成2a2a、2b2b两个两个亚型。亚型。 表面抗原（表面抗原（
8、K K抗原）：抗原）：在新分离的某些菌株菌体表面含有在新分离的某些菌株菌体表面含有此种抗原。不耐热，加热此种抗原。不耐热，加热10011001小时即被破坏。具有此种小时即被破坏。具有此种抗原的菌株，可阻止菌体抗原与相应免疫血清发生凝集。抗原的菌株，可阻止菌体抗原与相应免疫血清发生凝集。志贺氏菌属的四个群 根据抗原构造的不同，按最新国际分类法，将本根据抗原构造的不同，按最新国际分类法，将本属细菌分为属细菌分为四个群、四个群、3939个血清型个血清型（包括亚型）（包括亚型） A A群：群：也称也称志贺氏菌群，有志贺氏菌群，有1010个血清型个血清型。不发酵甘。不发酵甘露醇，无鸟氨酸脱羧酶，与其他各
9、群细菌无血清露醇，无鸟氨酸脱羧酶，与其他各群细菌无血清学联系。学联系。 B B群：群：也称也称福氏菌群，已有福氏菌群，已有1313个血清型个血清型（包括亚型（包括亚型和变种）。最近又发现和变种）。最近又发现3 3个亚型（个亚型（1c1c、4c4c、5b5b）。）。发酵甘露醇，无鸟氨酸脱羧酶。抗原结构较复杂，发酵甘露醇，无鸟氨酸脱羧酶。抗原结构较复杂，各型间有交叉凝集。每一福氏菌型具有二种抗原，各型间有交叉凝集。每一福氏菌型具有二种抗原，即型特异性抗原和群抗原，前者只存在于同型菌即型特异性抗原和群抗原，前者只存在于同型菌株中，后者有许多种，存在于福氏各菌型中。例株中，后者有许多种，存在于福氏各菌
10、型中。例如福氏如福氏1b1b型除含有型除含有1 1型特异性抗原外，尚含有型特异性抗原外，尚含有4 4、6 6群抗原。群抗原。C C群：群：也称也称鲍氏菌群，有鲍氏菌群，有1515个血清型个血清型，分解，分解甘露醇，无鸟氨酸脱羧酶。各型内无交叉凝甘露醇，无鸟氨酸脱羧酶。各型内无交叉凝集。集。 D D群：群：也称也称宋内氏菌群，仅有一个血清型宋内氏菌群，仅有一个血清型。分解甘露醇，有鸟氨酸脱羧酶，迟缓发酵乳分解甘露醇，有鸟氨酸脱羧酶，迟缓发酵乳糖。有糖。有(S(S相光滑菌落相光滑菌落) )、相相(R(R粗糙菌落粗糙菌落) )之分。之分。 福氏志贺菌在HE琼脂平板上的菌落特征蓝绿色大肠埃希菌红色较大
11、二、志贺氏菌的生物学特性5 5、志贺氏菌的抵抗力：、志贺氏菌的抵抗力： 志贺氏菌属与沙门氏菌属及其他肠道杆菌相比，志贺氏菌属与沙门氏菌属及其他肠道杆菌相比，对理化因素抵抗力较低，对对理化因素抵抗力较低，对酸较敏感酸较敏感，必须使，必须使用含有缓冲剂的培养基。在外界环境中的生存用含有缓冲剂的培养基。在外界环境中的生存力，以力，以宋内氏最强，福氏菌次之宋内氏最强，福氏菌次之，痢疾志贺氏痢疾志贺氏菌最弱。菌最弱。一般在潮湿土壤中能存活一般在潮湿土壤中能存活3434天，天，3737水中存活水中存活2020天，在粪便内（室温）存活天，在粪便内（室温）存活1111天。日光直接照射天。日光直接照射3030分
12、钟，分钟，56-601056-6010分即分即被杀死，对高温和化学消毒剂很敏感，被杀死，对高温和化学消毒剂很敏感，1%1%石炭石炭酸中酸中15-3015-30分钟即被杀死，对氯霉素、磺胺类、分钟即被杀死，对氯霉素、磺胺类、链霉素敏感，但易产生耐药性。链霉素敏感，但易产生耐药性。二、志贺氏菌的生物学特性6、志贺氏菌的变异性：志贺氏菌的变异性： S-RS-R型变异：菌落可由光滑型变为粗糙型，同时常型变异：菌落可由光滑型变为粗糙型，同时常伴有生化反应、抗原构造和致病性的变异。在机伴有生化反应、抗原构造和致病性的变异。在机体内，尤其在慢性患者和恢复期患者，志贺氏菌体内，尤其在慢性患者和恢复期患者，志贺
13、氏菌可发生变异而失去原来的生化和抗原特性，成为可发生变异而失去原来的生化和抗原特性，成为不典型菌株。但其中部分不典型菌株，可通过不典型菌株。但其中部分不典型菌株，可通过10%10%胆汁肉汤等返祖为典型菌株。故在慢性患者或带胆汁肉汤等返祖为典型菌株。故在慢性患者或带菌者粪便检查时，对这类菌株要特别注意，必须菌者粪便检查时，对这类菌株要特别注意，必须多次反复检查。因这对传染源的发现及控制有重多次反复检查。因这对传染源的发现及控制有重要意义。要意义。二、志贺氏菌的生物学特性耐药性变异：自从广泛使用抗菌素以来，志贺氏菌的耐药菌株 不断增加，给防治工作带来许多困难。国内部分地区报道（1972-1974）
14、，志贺氏菌对四环素的耐药率达74%、氯霉素73.6-97%、链霉素84-98%、金霉素75-100%、磺胺类97-100%，可见国内对常用几种抗菌素的耐药率相当高。二、志贺氏菌的生物学特性毒力变异与其他变异：1963年南斯拉夫Mel氏首先创用依赖链霉素的志贺氏菌株（依链Sd株）口服预防痢疾。Sd株是一株必须有链霉素存在下才能生长的菌株，其毒力减弱但仍保持免疫原性。美国以天然变异无毒株与大肠杆菌杂交而获得的MH株制成疫苗，其免疫效果和稳定性均较Sd株差。我国正大力利用变异方法通过动物和药物处理等寻找安全有效可供口服的痢疾杆菌活菌苗，并已取得初步成效。 二、志贺氏菌的生物学特性7 7、志贺氏菌的致
15、病性、志贺氏菌的致病性 志贺氏菌引起的细菌性痢疾，主要通过消志贺氏菌引起的细菌性痢疾，主要通过消化道途径传播。根据宿主的健康状况和年化道途径传播。根据宿主的健康状况和年龄，只需少量病菌（至少为龄，只需少量病菌（至少为1010个细胞）进个细胞）进入，就有可能致病。入，就有可能致病。 致病因素：志贺氏菌的致病作用，主要是致病因素：志贺氏菌的致病作用，主要是侵袭力、菌体内毒素、个别菌株能产生外侵袭力、菌体内毒素、个别菌株能产生外毒素。毒素。二、志贺氏菌的生物学特性侵袭力：侵袭力：志贺氏菌进入大肠后，由于菌毛志贺氏菌进入大肠后，由于菌毛的作用粘附于大肠粘膜的上皮细胞上，继的作用粘附于大肠粘膜的上皮细胞
16、上，继而进入上皮细胞并在内繁殖，扩散至邻近而进入上皮细胞并在内繁殖，扩散至邻近细胞及上皮下层。由于毒素的作用，上皮细胞及上皮下层。由于毒素的作用，上皮细胞死亡，粘膜下发炎，并有毛细血管血细胞死亡，粘膜下发炎，并有毛细血管血栓形成以至坏死、脱落，形成溃疡。志贺栓形成以至坏死、脱落，形成溃疡。志贺氏菌一般不侵犯其他组织，偶尔可引起败氏菌一般不侵犯其他组织，偶尔可引起败血症。目前认为不论是产生外毒素的还是血症。目前认为不论是产生外毒素的还是只有内毒素的志贺氏菌，必须侵入肠壁才只有内毒素的志贺氏菌，必须侵入肠壁才能致病。因此，对粘膜组织的侵袭力是决能致病。因此，对粘膜组织的侵袭力是决定致病力的主要因素。定致病力的主要因素。 二、志贺氏菌的生物学特性内毒素：志贺氏菌属中各菌株都有强烈的内毒素，作用于肠壁，使通透性增高，从而促进毒素的吸收。继而作用于中枢神经系统及心血管系统，引起临床上一系列毒血症症状，如发热、神志障碍，甚至中毒性休克。毒素破坏粘膜，形成炎症、溃疡，呈现典型的痢疾脓血便。毒素作用于肠壁植物神经，使肠道功能紊乱，肠蠕动共济失调和痉挛，尤其直肠括约肌最明显，因而发生腹痛、里急后重等症状
