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1、22液相色谱技术液相色谱技术Chromatography篮球比赛是根据运动队在规定的比赛时间里得分多少来决定胜负的，因此，篮球比赛的计时计分系统是一种得分类型的系统背景背景n色谱法也称色层法，是色谱法也称色层法，是19061906年俄国植物学家年俄国植物学家Michael Michael TswettTswett发现并命名的。他将植物叶子的色素通过装填有吸发现并命名的。他将植物叶子的色素通过装填有吸附剂的柱子，各种色素以不同的速率流动后形成不同的色附剂的柱子，各种色素以不同的速率流动后形成不同的色带而被分开，由此得名为带而被分开，由此得名为“色谱法色谱法”（Chromatography) Ch
2、romatography) 。n后来无色物质也可利用吸附柱色谱分离。后来无色物质也可利用吸附柱色谱分离。n英国生物学家英国生物学家MartinMartin和和SyngeSynge。他们首先提出了色谱塔板。他们首先提出了色谱塔板理论，以及其远见卓识的预言。理论，以及其远见卓识的预言。n19441944年出现纸色谱以后，色谱法不断发展，相继出现薄层年出现纸色谱以后，色谱法不断发展，相继出现薄层色谱、亲和色谱、凝胶色谱、气相色谱、高压液相色谱色谱、亲和色谱、凝胶色谱、气相色谱、高压液相色谱（HPLCHPLC）等。）等。篮球比赛是根据运动队在规定的比赛时间里得分多少来决定胜负的，因此，篮球比赛的计时计
3、分系统是一种得分类型的系统色谱法的基本原理色谱法的基本原理n色谱法是利用混合物中各组分色谱法是利用混合物中各组分物理化学物理化学性质的差性质的差异（如吸附力、分子形状及大小、分子亲和力、异（如吸附力、分子形状及大小、分子亲和力、分配系数等），使各组分在两相（一相为固定的，分配系数等），使各组分在两相（一相为固定的，称为固定相；另一相流过固定相，称为流动相）称为固定相；另一相流过固定相，称为流动相）中的分布程度不同，从而使各组分以不同的速度中的分布程度不同，从而使各组分以不同的速度移动而达到分离的目的。移动而达到分离的目的。篮球比赛是根据运动队在规定的比赛时间里得分多少来决定胜负的，因此，篮球比
4、赛的计时计分系统是一种得分类型的系统慢慢中等中等快快色谱分离色谱分离色谱分离色谱分离Temporal course淋洗液淋洗液篮球比赛是根据运动队在规定的比赛时间里得分多少来决定胜负的，因此，篮球比赛的计时计分系统是一种得分类型的系统22.1色谱的基本概念色谱的基本概念n固定相固定相：固定相是色谱的一个基质。它可以是固体物质（如吸附剂，凝胶，离子交换剂等），也可以是液体物质（如固定在硅胶或纤维素上的溶液），这些基质能与待分离的化合物进行可逆的吸附，溶解，交换等作用。n流动相流动相：在色谱过程中，推动固定相上待分离的物质朝着一个方向移动的液体、气体等，都称为流动相。柱色谱中一般称为洗脱剂，薄层色
5、谱时称为展层剂。 篮球比赛是根据运动队在规定的比赛时间里得分多少来决定胜负的，因此，篮球比赛的计时计分系统是一种得分类型的系统n分配系数分配系数 可由Langmuir方程得出 Kd-分配系数 q、c-溶质在固相和液相中的浓度篮球比赛是根据运动队在规定的比赛时间里得分多少来决定胜负的，因此，篮球比赛的计时计分系统是一种得分类型的系统n保留时间保留时间（tR）和保留体积（和保留体积（VR） 反应样品在柱子中的保留或阻滞能力，是色谱过程的基本热力学参数之一。 篮球比赛是根据运动队在规定的比赛时间里得分多少来决定胜负的，因此，篮球比赛的计时计分系统是一种得分类型的系统n分离度分离度: :又称分辨率，用
6、来表示两种洗脱曲线相又称分辨率，用来表示两种洗脱曲线相邻的溶质相互分离的程度。邻的溶质相互分离的程度。两个相邻洗脱峰之间的距离与两个峰宽的代数平均值两个相邻洗脱峰之间的距离与两个峰宽的代数平均值. .篮球比赛是根据运动队在规定的比赛时间里得分多少来决定胜负的，因此，篮球比赛的计时计分系统是一种得分类型的系统n阻滞因子阻滞因子Rf 阻滞因子是在色谱系统中溶质的移动速度和标准物（与固定相没有亲和力的流动相 Kd=0）的迁移率之比 其意义在于体现某一种溶质与固定相之间的亲和力大小.篮球比赛是根据运动队在规定的比赛时间里得分多少来决定胜负的，因此，篮球比赛的计时计分系统是一种得分类型的系统n洗脱体积洗
7、脱体积 色谱柱中，使溶质从柱中流出所需流动相体积，为洗脱体积 不同的溶质，由于和固定相的亲和力的不同，洗脱体积也有所差异。篮球比赛是根据运动队在规定的比赛时间里得分多少来决定胜负的，因此，篮球比赛的计时计分系统是一种得分类型的系统n理论板，理论板当量高度（理论板，理论板当量高度（HETPHETP），理论塔板数），理论塔板数（N N）、）、 反应不同时刻溶质在色谱柱中的分布以及分离度与柱高之间的关系。理论板：理论板：将溶质达到一次分配平衡的色谱柱段。理论板当量高度：理论板当量高度：该段色谱柱的高度。篮球比赛是根据运动队在规定的比赛时间里得分多少来决定胜负的，因此，篮球比赛的计时计分系统是一种得分
8、类型的系统n理论板数的计算方法理论板数的计算方法N N-理论塔板数理论塔板数 t tR R-保留时间保留时间W W1/21/2-半峰宽半峰宽 W Wb b-峰底宽度峰底宽度n理论塔板高度：理论塔板高度：L-柱长柱长篮球比赛是根据运动队在规定的比赛时间里得分多少来决定胜负的，因此，篮球比赛的计时计分系统是一种得分类型的系统22.2 色谱分离方法的分类色谱分离方法很多，种类有四、五十种但常用于生物大分子分离的色谱方法，按机理分，有以下几种：篮球比赛是根据运动队在规定的比赛时间里得分多少来决定胜负的，因此，篮球比赛的计时计分系统是一种得分类型的系统n按操作形式不同分类：按操作形式不同分类：柱色谱：柱
9、色谱：将固定相装于柱内，使样品沿一个方向移动而达到分离。纸色谱：纸色谱：用滤纸做液体的载体，点样后，用流动相展开，以达到分离鉴定的目的。薄层色谱：薄层色谱：将适当粒度的吸附剂铺成薄层，以纸色谱类似的方法进行物质的分离和鉴定。 纸色谱和薄层色谱主要适用于小分子物质的快速检纸色谱和薄层色谱主要适用于小分子物质的快速检测分析和少量分离制备，通常为一次性使用，而柱测分析和少量分离制备，通常为一次性使用，而柱色谱是常用的色谱形式，适用于样品分析、分离。色谱是常用的色谱形式，适用于样品分析、分离。生物化学中常用的凝胶色谱、离子交换色谱、亲和生物化学中常用的凝胶色谱、离子交换色谱、亲和色谱、高效液相色谱等都
10、通常采用柱色谱形式。色谱、高效液相色谱等都通常采用柱色谱形式。篮球比赛是根据运动队在规定的比赛时间里得分多少来决定胜负的，因此，篮球比赛的计时计分系统是一种得分类型的系统n按分离的压力按分离的压力 高压色谱高压色谱 中压色谱中压色谱 低压色谱低压色谱n按流动相分按流动相分 气相色谱气相色谱 液相色谱液相色谱 超临界流体色谱超临界流体色谱篮球比赛是根据运动队在规定的比赛时间里得分多少来决定胜负的，因此，篮球比赛的计时计分系统是一种得分类型的系统22.3 22.3 各类色谱技术及应用各类色谱技术及应用 1 1凝胶过滤色谱凝胶过滤色谱2 2离子交换色谱离子交换色谱3 3疏水色谱疏水色谱4 4聚焦色谱
11、聚焦色谱5 5反相色谱反相色谱6 6超临界流体色谱超临界流体色谱7 7羟基磷灰石色谱羟基磷灰石色谱8 8灌注色谱灌注色谱9 9应用应用篮球比赛是根据运动队在规定的比赛时间里得分多少来决定胜负的，因此，篮球比赛的计时计分系统是一种得分类型的系统凝胶过滤技术凝胶过滤技术1)Gel filtration chromatography(GFC)原理原理操操作作与与原原理理：含含有有不不同同组组分分的的溶溶液液，通通过过网网状状结结构构的的凝凝胶胶粒粒子子(a)(a)，小小分分子子扩扩散散进进入入凝凝胶胶相相，大大分分子子被被排排阻阻于于凝凝胶胶相相外外，加加入入洗洗脱脱剂剂后后溶溶液液向向下下推推移移
12、，大大分分子子及及剩剩余余的的小小分分子子进进入入下下层层新新的的凝凝胶胶相相中中，重重复复上上述述扩扩散散和和排排阻阻。这这样样最最先先流流出出的的为为最最大大的的分分子子，最最后后流流出出的的为为最最小小分分子子，分分段段收收集集可可以以获获得得按按分分子子量量大大小分布的各组分。小分布的各组分。分分子子筛筛色色谱谱: : 从从上上可可见见，凝凝胶胶过过滤滤具有分子筛的作用。具有分子筛的作用。篮球比赛是根据运动队在规定的比赛时间里得分多少来决定胜负的，因此，篮球比赛的计时计分系统是一种得分类型的系统篮球比赛是根据运动队在规定的比赛时间里得分多少来决定胜负的，因此，篮球比赛的计时计分系统是一
13、种得分类型的系统分子筛凝胶色谱原理分子筛凝胶色谱原理篮球比赛是根据运动队在规定的比赛时间里得分多少来决定胜负的，因此，篮球比赛的计时计分系统是一种得分类型的系统分离关系：组分分离关系：组分0 0的的M M最大，不能进入最大，不能进入gelgel，洗脱体，洗脱体积为空隙体积积为空隙体积V V0 0；组分；组分t t的的M M最小，能进入到最小，能进入到gelgel的细孔中，其洗脱体积接近柱体积的细孔中，其洗脱体积接近柱体积V Vt t, , 组分组分1-21-2在在V V0 0-V-Vt t之间之间. . 显然，显然，GFCGFC能分离洗脱体积在能分离洗脱体积在V V0 0- -V Vt t之间
14、的组分。对于组分之间的组分。对于组分1 1和和2 2，两峰距离，两峰距离分配系数分配系数m影响因素影响因素：分子量分子量, , 分子形状分子形状, gel, gel孔径孔径结构；与结构；与pH, I, TpH, I, T无关无关. . 篮球比赛是根据运动队在规定的比赛时间里得分多少来决定胜负的，因此，篮球比赛的计时计分系统是一种得分类型的系统2)2)凝胶介质凝胶介质对介质的要求：对介质的要求：1st亲水性高；2nd表面惰性，不发生化学和物理变化；3rd高稳定性，有较宽的pH和I适应范围；4th具有一定的孔径分布；5th机械强度高，耐高压操作，寿命长。商品化的介质均能满足1-4条的要求。 介质的
15、类型：介质的类型：1st Sephadex2nd Sephacryl 3rd Superose/-dex, Sepharose4th Cellulose5th TSKgel篮球比赛是根据运动队在规定的比赛时间里得分多少来决定胜负的，因此，篮球比赛的计时计分系统是一种得分类型的系统篮球比赛是根据运动队在规定的比赛时间里得分多少来决定胜负的，因此，篮球比赛的计时计分系统是一种得分类型的系统凝胶介质特征参数凝胶介质特征参数排排阻阻极极限限(exclusion (exclusion limit)limit)：指指不不能能扩扩散散到到凝凝胶胶网网络络内内部部的的最最小小分分子子的的M M。如如，Seph
16、adex Sephadex G50G50的的排阻极限为排阻极限为30kD30kD。分分级级范范围围(fractionation (fractionation range)range)：能能阻阻滞滞组组分分并并且且使使组组分分相相互互之之间间得得到到分分离离的的组组分分分分子子量量范范围围。如，如， Sephadex G50 Sephadex G50的分级在的分级在1.5-30KD1.5-30KD内。内。溶胀率溶胀率/ /吸水率：吸水率： 如，如，Sephadex G50Sephadex G50的溶胀率的溶胀率 = 500 30% = 500 30%。 篮球比赛是根据运动队在规定的比赛时间里得分多少来决定胜负的，因此，篮球比赛的计时计分系统是一种得分类型的系统凝凝胶胶粒粒径径：软软gelgel粒粒径径较较大大，在在50-15050-150 m m之之间间；硬硬gelgel较较小小，在在5-505-50 m m之之间间。粒粒径径越越小小，HETPHETP越小，分离效率越高。越小，分离效率越高。床床体体积积(bed (bed volume)volume)：1g1g干干燥燥gelgel溶溶胀胀
