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1、自动定氮器操作规程一、工作原理:KDN蛋白质测定仪是由电加热消化装置和蒸储装置二 大局部组成。消化装置采用电加热井式炉结构,温度由数显 自动恒温控制表控制,温度均匀,消化彻底;蒸储装置采用 了电热蒸汽发生器,使自来水产生蒸汽完成蒸储工作,利用 水位平衡器使蒸汽发生器内水位保持稳定,从而不间断地产 生蒸汽。样品中含氮有机物经浓缩硫酸加热消化,然后有机物炭 化成碳,碳将硫酸还原为SO2,本身那么变为CO2,S02使N 还原为NH3,本身那么氧化S2O3,而消化过程中生成的H2, 又加快了 NH3的形成,在反响过程中生成的H20和S2O3溢 出,而NH3那么与H2SO4在溶液中结合成(NH4)2SO
2、4,加入NaOH 并蒸播,使Nh溢出,用H3BO3吸收后,用摩尔浓度的 盐酸滴定,测出样品全氮含量,乘以氮与蛋白质的换算系数, 即为粗蛋白质的含量。消化过程主要反响如下:R C H NH2 - COOH+H2so4-CO2+SO2+NH3+H2O2NH3+H2SO4 f (MH4)2S 04在蒸储和吸收过程中主要反响如下: (NH4)SO4+2NaOH-Na2so4+2NH4OH 2NH4OH f 2NH3+2H2ONH3+4H3B 03-NH4HB4O7+5H2O滴定的过程是盐酸和硼酸氢镂的反响过程。NH4HB4O7+HCI+5H2。- NH4CI+4H3BO3二、操作方法:1、样品制备:1
3、.1 选取具有代表性的样品200克,清杂后按四分法缩减取 样,粉碎样品至40目通过,盛于密闭容器待用。1.2 液体试样必须具有代表性,取样后先放在消化管内浓缩 至体积三分之一,再加入其它试剂进行消化。2、消化:2.1 称取经粉碎且通过40目的试样0.5-lg (视含氮量而定), 精确到0.0002,干净无损地移入已洗净且烘干的消化管中, 加催化剂(硒片或硒+无水硫酸钠1:1000)一片和10ml硫酸。2.2 将消化管分别放入消化架各个孔内,然后置于消化炉上。2.3 连接抽气三通,翻开进水阀。2.4 接通电源开关,在加热出事阶段须注意观察,防止试样 因急速沸腾而飞溅,温度设定应略低于正常值,如设
4、定在400 度。2.5 温度设置:08孔消化炉的八个电炉由八只开关(A1-A4, B1-B4)及二只温控表上的CH1-CH4分别控制。设置一组电 炉的温度可按相对应的温控仪的CH1-CH4三秒,进入通道 菜单项出现SP参数,按上下键调节温度,然后按SET键七 次,使仪表的四条显示窗同时显示温度值,至此,该组电炉 的温度参数设定完成。其余一次类推。(设定温度低于室温, 电炉不加热。)保持消化管中液体连续沸腾,沸酸在瓶颈部下冷凝回流, 待溶液消煮至无微小碳粒,呈兰绿色时继续消煮30-40mino 2.7消化结束将消化架连同消化管、排气管一起移到冷却架(白色),冷却至室温,注意在冷却过程中排气管必须
5、保持 吸气状态(切忌将消化管放入水中冷却)。防止废气溢出。 3、蒸储:3.1 KDN-CZ型自动定氮蒸储器蒸储时,碱液及蒸储水采用电 磁泵加液置入方法,因而防止了漏液现象,NaOH、H2O的 注入接口橡胶管套入后,分别置于各自的容器中,冷却水接 口与自来水龙头用橡胶管连接,排、出水管分别用橡胶管接 上并一起放入水池中,关上排水阀门。加液时按面板上相应 的开关,液体经电磁泵自动流入消化管内,注入的毫升数视 标尺所示位置或溶液变色程度而定。3.2 翻开自来水龙头,按下电源开关,按下加热开关,再按 下蒸汽开关,蒸汽发生炉内的水由冷却水接口通过冷凝管, 经水位平衡器慢慢流入,由于蒸汽发生炉内水位不断上
6、升, 使电极之间电流逐渐增加,水经过电极加热,温度不断上升, 但由于初态时水温较低,此时水位上升较快,蒸汽尚未能产 生,电流急剧增加,待电流表上电流上升到12安培左右,电磁阀由电气局部自控通断,反复数次,待蒸汽正常连续喷 出,电流指示在4-7A时,关闭蒸汽开关,蒸储工作即可进 行。3.3 在250ml三角接收瓶中加入50mll2%H3BO3和2-3滴混 合指示剂,将该瓶放在接收瓶托架上,按定时开关,用手向 上唾弃接收瓶托架,使它被电磁铁吸合并固定在接收位置。 使接收导出管管口浸没在接收液中,时间设定在7分钟左右。 3.4向下按动托架手柄,把消化管固定在消化管托架上,然 后按面板上注水、注碱开关
7、,分别向消化管内注入蒸储水和 氢氧化钠溶液,然后开启蒸汽开关,向消化管内注入蒸汽进 行蒸储,当接收瓶托架到了设定的时间(接收液到150ml), 自动回落到原位,同时蜂鸣器响,关闭时控按钮。使接收导 出管脱离液面,用蒸储水冲洗接收导出管,继续蒸储半分钟, 关闭蒸汽开关,取下消化管,然后取下接收瓶,待滴定用。 3.5空白测定:用0.1克糖代替样品或不加样品做空白测定。 3.5每天做完样品后,请及时排空蒸汽发生炉内的水。确认 蒸汽发生炉中的水已排空,拔掉电源插头。4、滴定、计算结果:用标定的盐酸溶液滴定接收瓶内溶液,滴定溶液由绿色变为 淡紫色时止,记下消耗的HC1的毫升数,按以下式计算蛋白 质量:(
8、V2-Vx粗蛋白质()=VmxVxlOOxlOO式中:V2滴定试样时所需标准酸溶液体积,ml;Vi滴定空白时所需标准酸溶液体积;ml;C盐酸标准溶液浓度,mol/L;m试样质量,g;V试样分解液总体积,ml;V试样分解液蒸储用体积,ml;0.0140每毫克当量氨的克数;氨换算成蛋白质的平均系数。三、考前须知:1、当消化炉窗口显示“HH或LL”时,请检查传感器接线 是否正确。2、消化结束后切忌将消化管放入水中冷却。3、每次工作完毕必须清洗试管及仪器,经常保持清洁、干 燥及完整。4、每次试样蒸储结束,必须迅速取下消化管,预防消化管 液体被倒吸至蒸汽发生炉中,腐蚀机件或电极。5、NaOH溶液在消化管内容易产生粘团现象,因此每天工作 完毕必须认真清洗有关部位,NaOH外接管要移入蒸储水瓶 内抽清几次,待下一次蒸储时,须先排出lOOmlNaOH,以防 稀释NaOH,影响测定结果。用干爽洁布擦净仪器。