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1、笫18章螺旋体一、教学大纲耍求(1) 掌握螺旋体的定义，熟悉螺旋体形态与结构、培养特性、抗原成分与抵抗力，了解螺旋体的分 类。(2) 掌握螺旋体感染(性传播疾病和自然疫源性疾病)的临床意义。(3) 掌握梅毒螺旋体感染的微生物学检验，熟悉钩端螺旋体和冋归热螺旋体感染的微生物学检验。二、教材内容精要(一)分类螺旋体(Spirochete)是一类细长、柔软、弯曲呈螺旋状、运动活泼的原核细胞型微生物。介于细菌与 原虫之间。细胞壁含有脂多糖和胞琏酸，二分裂方式繁殖，对抗生索敏感，细胞舉与细胞膜之间绕有弹性 轴丝，借助于轴丝伸缩而运动，易被胆盐或胆汁溶解，分类学上归广义的细菌范围。螺旋体主要依据其螺旋数目
2、、大小、间距和规则程度等分类。螺旋体科(Spirochaetaceae)下有8个 属，引起人类疾病的有3个属(表19-1)。表19-1螺旋体的分类及致病性螺旋体种类属名致病种类所致疾病传播方式或媒介I疏螺旋体屈(Bomdia)伯氏疏螺旋体莱姆病硬卿冋归热螺旋体流行性冋归热体虱赫姆疏螺旋体地方性冋归热软观奋森疏螺旋体多种口腔感染机会感染11短螺旋体属(Bmchyspira)III 脊螺旋体属(Crisitisipira )IV细丝螺旋体属(Leptonspira)V钩端螺旋体属(Leptospira)问号钩端螺旋体钩端螺旋体病皮肤黏膜VI小蛇形螺旋体属(Serpulina)VII 螺旋体属(Sp
3、irochaeta )W 密螺旋体属(Treponema)苍白密螺旋体苍门亚种梅毒性传播苍门密螺旋体极细亚种雅司皮脐损伤品他密螺旋体品他病皮肤损伤苍白密螺旋体地方亚种地方性梅毒黏膜损伤(二)生物学特性1. 形态染色螺旋体菌休的大小为330gmX0.20. 4pm。革兰染色阴性，但着色比较困难。疏螺旋体弟用姬姆 萨染色（Giemsa）呈紫红色，用瑞特（Wright）染色呈棕红色。钩端螺旋休和密螺旋休Fantcina镀银染色 后，螺旋体增粗，呈棕褐色，易于观察。新鲜标本在暗视野显微镜下，见其运动呈移行、曲伸、翻转、滚 动状，有诊断意义。电镜下，螺旋体有细胞琏和细胞膜，细胞质与细胞樂纽成原生质圆柱体
4、，内有多个纤细的胞质管，外 包薄而富有弹性的外膜和外鞘，胞质膜与外膜之间有数屋不等的轴丝，也称周浆鞭毛或内鞭毛，轴丝的伸 缩致螺旋体运动。2. 培养特性可人工培养的螺旋体营养要求高，有的需要特殊的营养物质，生长缓慢，在固体培养基上可形成菌落。 如钩端螺旋体、伯氏疏螺旋体。苍白密螺旋体尚不能人工培养。3. 抗原结构螺旋体抗原分为属、种和型特异性抗原，能刺激机体产生相应抗体，所产生的抗体可用血淸学试验检 测。4. 抵抗力螺旋体的抵抗力不强，螺旋体对冷、热、干燥、化学消毒剂、对抗生素和砂剂等敏感。（三）临床意义螺旋体常见于水、十壤、人的II腔、动物体内及腐败的有机物中。螺旋体病临床分期较明显，病期与
5、 疾病的诊断密切相关。1. 自然疫源性疾病 在自然界中有多种动物是螺旋体的储存宿主，以啮齿动物为主。通过直接接触、 吸血昆虫媒介等途径传播，引起螺旋体病。钩休病是一种典型的人、畜共患性疾病及自然疫源性疾病。冋 归热是一种山节肢动物传播、周期性反复发作的急性传染病。引起该病的疏螺旋体有两种：冋归热螺旋体, 以虱为传播媒介，引起流行性冋归热；赫姆疏螺旋体，以卿为传播为媒介，引起地方性冋归热。该病目前 在我国己较少见。伯氏疏螺旋体是引起莱姆病的病原体。2. 性传播疾病 在自然情况下，苍白密螺旋体通过性接触传播，也可通过胎盘乖直传播和输血感染。（1）获得性梅毒临床上分三期。感染三周左右，在外生殖器感染
6、的局部形成丘疹硬结，进而变为无痛性 溃疡，称硬下疳，为I期梅毒（硬下疳期），英溃疡渗出液中有大量的苍白螺旋体苍白亚种，传染性极强。 一般48周硬下疳常自愈,局部杳不到苍白螺旋体苍白亚种。硬下疳初期的患者，梅毒血淸学反应大部 分呈阴性，以后阳性率逐渐增高。硬下疳出现后28周，病期2年以内全身皮肤黏膜出现梅毒疹，伴有 全身淋巴结肿大，并可累及骨、关节、眼和其他脏器，为II期梅毒（梅毒疹期），在梅毒疹和肿大的淋巴 结中有大量的苍白螺旋体苍白亚种，传染性强。患者的梅毒血清学反应几乎全部呈阳性。感染梅毒2年以 后，可长达1015年，病变可波及全身组织和器官。病灶内苍白螺旋体苍白亚种少，传染性也小，但对
7、机体的损伤很大。为III期梅毒（晚期梅毒），（2）先天性梅毒多发生于妊娠4个月后，系料体苍白螺旋体苍白亚种通过胎盘进入胎儿休内大量繁 殖，可导致流产、早产和死胎，或生出梅毒儿，呈现马鞍鼻、锯齿形牙、间质性角膜炎和先天性耳聋等特 殊体征。地方性梅毒和雅司不是性传播疾病，但两者的临床症状与梅毒相似。（四）微生物检验1 .苍白密螺旋体（1）标本采集I期梅毒患者采集硬下疳溃疡渗出液，II期梅毒则取梅毒疹渗出液和肿大的淋巴结抽 出液，用于直接镜检；对感染梅毒34周的患者可采取血液检查其血清中有无苍白螺旋体苍白亚种的抗 体和反应索。（2）检验方法1）显微镜检杳%1 视野显微镜检杳菌体纤细，两端尖，折光性强
8、，弹簧状螺旋，且排列规则，运动方式为沿身体长 轴旋转，滚动、伸曲、前后移行等。对苍白螺旋体苍白亚种有诊断意义。%1 涂片染色 作Fontana镀银染色或姬姆萨染色后光学显微镜检查；用荧光标记的苍门螺旋体苍【亚 种抗体进行荧光染色，置荧光显微镜下观察有无相应的抗原存在。2）免疫学检测%1 反应素检测试验 用牛心肌的心脂质、胆固醇和卵磷脂混合物做抗原包被到载体颗粒上，检杳患者 血清中的反应索，属于这一类的试验的有性病研究实验室试验（venereal disease research laboratory, VDRL）x 不加热血清反应素试验（unheated serum re agin test,
9、 USR）快速血浆反应素试验（rapid plasma reagin, RPR） 甲苯胺红不加热血淸试验（toluidine red unheated serum test, TRUST）等，是临床初筛常规试验。病灶出现 后12周就可以测出反应素，I期梅毒阳性率约为70%, II期梅毒阳性率近100%；经药物治疗后可转阴， 可用于观察疗效,判断是否复发及再感染。但雅司、冋归热等螺旋体感染；病毒性肝炎、麻疹、风疹、水 痘等病毒性感染；麻风、活动性肺结核、传染性单核细胞增多症等细菌感染；妊娠、老年人、自身免疫病 和吸毒时均叫出现假阳性结果，但血淸反应的滴度低，持续时间-般较短。故分析结果时应结合病
10、史和临 床症状，需作密螺旋体试验加以确证。现临床上出现反应素试验阴性，而密螺旋体特异性抗原血淸试验阳 性的情况。%1 密螺旋体特异性抗原血淸试验 用苍白螺旋体苍白亚种Nichols株作为抗原，检测血清中苍白螺旋 体苍白亚种特异性抗体，这类试验的特异性强，可用作梅毒确证试验，但不能用作疗效的评价和判断复发 及再感染。a. 荧光密螺旋体抗体吸收试验(fluorescerH treponemal iintibocly-absorption, FTA-ABS)患者血清先用非致病性苍门螺旋体苍白亚种Reiter株超声波裂解物吸收，除去血淸中交叉抗体，提高试验的特异性。 把吸收过的血清加在涂有苍白螺旋体苍
11、门亚种Nichols株抗原的玻片上，再加荧光素标记的抗人免疫球蛋 白染色，荧光显微镜下观察，有发荧光的密螺旋体即为阳性。敏感性和特异性高，是1、II期首先出现阳 性反应的血清学试验。而且患者经治疗后，反应仍不转阴。b. 酶联免疫吸附试验(ELISA) 山苍白螺旋体苍白亚种Nichols株，经超声波粉碎制成密螺旋体抗 原,检测患者血清中苍白螺旋体苍白亚种的抗体,可用于各期梅毒诊断，具有敏感性和特异性高、价廉、 操作简便、快速、易观察等特点。c. 苍I螺旋体苍门亚种一血凝试验(treponemal pallidum hemagglutination assay, TPHA) 是间接Mil.凝试 验
12、，以绵羊红细胞为载体，将苍白螺旋体苍白亚种Nichols株，经超声波粉碎成抗原，致敏绵羊红细胞后, 加入待检血清作间接血凝试验，抗体滴度1:80为阳性本试验敏感性高、操作简便、快速、易观察，但 特异性不及FIA-ABSod. 苍|螺旋体苍|1业种抗体吸收微吊血凝试验(microhemagglutination assay for antibodies to treponemal pallidum, MHA-TP) 是一种间接血凝试验，以TPHA的方法致敏醛化的绵羊红细胞，待检血淸先与苍白 螺旋体苍白亚种Reiter株及其他吸收剂和稳定剂等混合吸收，加入微孔板，再加致敏红细胞，若血淸中 含有苍广
13、I螺旋休苍门亚种抗休则红细胞发生凝集；用未致做的红细胞作对照，以排除非特界性凝集。e. 苍FJ螺旋体苍门亚种明胶凝集试验(treponemal pallidum particle assay, TPPA)与TPHA试验原理、阳 性结果判断、优缺点基本和同；只是致敏颗粒是明胶代替了红细胞。f. 免疫印迹试验(inimno-blotting test, IBT)先将苍白螺旋体苍【亚种抗原用SDS-聚I人j烯酰胺凝胶电泳 后，再将凝胶中的抗原转移至硝酸纤维膜上，加待检血清，再加酶标记的抗人免疫球蛋白，然后加底物显 色。刚出生的婴儿疑为先天性梅毒者，做血淸学试验时，要排除來自母体的抗体。但山于苍白螺旋
14、体苍白 亚种、雅司螺旋体等抗原相似，密螺旋体抗原血淸学试验不能区别这些密螺旋体及英所致疾病，因此，在 结果判断吋应结合病史和临床症状來分析。2.钩端螺旋体(1) 标本采集患者发病1周内采取血液；1周以后取尿液；有脑膜刺激症状则取脑脊液检出的阳性率高。感染6 10d 口检出抗体，34周抗体达最高水平，尸体、动物应取肝、肾、脑和肺送检。也可采集钩端螺旋体污 染的水、土壤等作标本。(2) 检验方法1) 显微镜检杳%1 暗视野显微镜检杳 直接观察辨别标本中钩端螺旋体的形态和运动。用于早期诊断,方法简取、快 速，但检出率低。将急性期患者的抗凝血先以1000 r/min低速离心510min,取.上层血浆再
15、以4000 r/min 高速离心lh,用沉淀物制片暗视野显微镜镜检。%1 涂片染色一般用Fontana镀银染色，呈棕褐色。也可用有接免疫荧光抗体染色和免疫酶染色检杳。2) 分离培养%1 血培养 取钩端螺旋体血症期的患者血液12山1,分别接种于5沁柯氏培养基3管进行培养，若患 者己用青磚素治疗，可事先在培养基中加入1500U/ml的青霧素酶。%1 尿培养 发病2周后取中段尿，4000r/niin离心lh,取沉淀物接种24管加有5-氟尿唏噪250 u g/ml或新霧素525 y g/ml的Korthof培养基，这样可避免污染菌的影响。酸性尿者应在取尿前Id晚上 服小苏打24g使尿呈中性或弱碱性。%1 其他标本脑脊液収0. 5m 1培养；动物肝、肾纽织块，污染的水和十.壤筹，均可进行分离培养钩端 螺旋体。上述培养物28C孵育24周，每隔35d用暗视野显微镜观察-次，大部分阳性标本在714d有生 长表现，山于钩端螺旋体是需氧生长，离培养基液ffilcm内的部位钩端螺旋体最多，故培养基显现出云雾 状混浊用喑视野显微镜检杏有无钩端螺旋体，若有，用显微镜凝集试验(microscopic agglutination test, MAT)和凝集素
