amekMOnly use for research For life science人膜联蛋白A2抗体(Anxa2 Ab)酶联免疫检测试剂盒使用说明书AE91118HU使用前仔细阅读本说明书本酶联免疫试剂盒是基于双抗体夹心技术原理, 来检测人膜联蛋白A2抗体(Anxa2 Ab),只能用于研究用途，不得用于医学诊 断o用 途：用于人血清、血浆及相关液体样本中膜联蛋白A2抗体(Anxa2 Ab) 测定工作原理本试剂盒采用的是生物素双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)测定样品中 人膜联蛋白A2抗体(Anxa2 Ab)水平向预先包被了膜联蛋白A2抗体(Anxa2 Ab ) 克隆抗体的酶标孔中加入膜联蛋白A2抗体(Anxa2 Ab),温育；温育后，加入生 物素标记的抗ANXA2 AB抗体再与链霉亲和素-HRP结合，形成免疫复合物，再 经过温育和洗涤，去除未结合的酶，然后加入底物A、B,产生蓝色，并在酸的 作用下转化成最终的黄色颜色的深浅与样品中膜联蛋白A2抗体(Anxa2 Ab) 的浓度呈正相关试剂盒组成试剂盒组成48孔配置96孔配置保存说明书1份1份封板膜2 片(48)2 片(96)密封袋1个1个酶标包被板1X481X962-8 C保存标准品：720 u g/L0.5ml X 1 瓶0.5ml X 1 瓶2-8 C保存标准品稀释液3ml X 1 瓶6ml X 1 瓶2-8C保存链霉亲和素-HRP3 ml X 1 瓶6 ml X 1 瓶2-8C保存生物素标记的抗 ANXA2 AB 抗体0.5ml XI 瓶1 ml X 1 瓶2-8 C保存显色剂A液3mlXl 瓶6 mix 1 瓶2-8 ℃保存显色剂B液3mlX l 瓶6 mix 1 瓶2-8 C保存终止液3mlXl 瓶6ml X 1 瓶2-8 C保存浓缩洗涤液(20mlX20 倍)XI 瓶(20mlX30 倍)XI 瓶2-8 ℃保存需要而未提供的试剂和器材1 . 37 ℃恒温箱。
2 .标准规格酶标仪3 .精密移液器及一次性吸头4 .蒸储水，5 . 一次性试管6 .吸水纸考前须知.从2-8℃取出的试剂盒，在开启试剂盒之前要室温平衡至少30分钟酶标包 被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存1 .各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以防止试验误差2 .严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.3 .为防止交叉污染，要防止重复使用手中的吸头和封板膜4 .不用的其它试剂应包装好或盖好不同批号的试剂不要混用保质前使用5 .底物B对光敏感，防止长时间暴露于光下洗板方法手工洗板方法：甩掉酶标板内的液体；在实验台上铺垫几层吸水纸，酶标板朝下 用力拍几次；将稀释后的洗涤液至少0. 35ml注入孔内，浸泡1-2分钟根据需 要，重复此过程数次自动洗板：如果有自动洗板机，应在熟练使用后再用到正式实验过程中标本要求1 .不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性2 .标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实 验假设不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应防止反复冻融操作程序1 .标准品的稀释：（本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照以下图表在小试管中进行稀释。
360|xg/L5号标准品120 u 1的原倍标准品加入120 n 1标准品稀释液180|ig/L4号标准品120 u 1的5号标准品加入120 n 1标准品稀释液90gg/L3号标准品120 u 1的4号标准品加入120 Li 1标准品稀释液45 照/L2号标准品120 u 1的3号标准品加入120 u 1标准品稀释液22.5 pg/L1号标准品120 u 1的2号标准品加入120 u 1标准品稀释液.根据代测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数每个标准品和空白 孔建议做复孔每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔2 .加样：］）空白孔，空白对照孔不加样品，生物素标记的抗AN品2 AB抗体， 链霉亲和素-HRP,只加显色剂A&B和终止液，其余各步操作相同;2）标准 品孔：加入标准品50ul,链霉亲和素-HRP50ul （标准品中已事先整合好生物 素抗体，故不加）;3）代测样品孔：加入样本40ul,然后各加入抗ANXA2 AB 抗体10ul、链霉亲和素-HRP50ul,盖上封板膜，轻轻震荡混匀，37c温育 60分钟3 .配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馈水30倍稀释后备用4 .洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后 弃去，如此重复5次，拍干。
5 .显色：每孔先加入显色剂A50ul,再加入显色剂B50U1,轻轻震荡混匀，37℃ 避光显色15分钟.6 .终止：每孔加终止液50u 1,终止反响（此时蓝色立转黄色）7 .测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（0D值）测定应 在加终止液后10分钟以内进行8 .根据标准品的浓度及对应的OD值计算出标准曲线的直线回归方程，再根据 样品的OD值在回归方程上计算出对应的样品浓度也可以使用各种应用软 件来计算操作程序总结：检测范围：12^ig/L-38O|ig/L保存：2-8℃有效期：6个月（2-8℃）Human ANXA2 AB ELISA KitInstructionThis kit is only for scientific research, and shall not be used as a clinical diagnosis of use. PurposeThis kit allows for the determination of ANXA2 AB concentrations in Human serum, cell culture supernatant, and other biological fluids.PrincipleThe kit assay Human ANXA2 AB level in the sample, add ANXA2 AB antibody to microtiter plate wells, after lncubating,add Biotinylated anti -ANXA2 AB -antibody , then Combined Streptavidin-HRP, become complex, after Incubating and washing Completely, Add TMB substrate solution,TMB substrate becomes blue color, reaction is terminated by the addition of a sulphuric acid solution and the color change is measured spectrophotometrically at a wavelength of 450 nm. The concentration of ANXA2 AB in the samples is then determined by comparing the O.D. of the samples to the standard curve.Materials provided with the kitx1 bottleMaterials provided with the kit48determinations96 determinationsStorageUser manual11Closure plate membrane22Sealed bags11Microelisa stripplate112-8℃Standard： 720pg/L0.5mlx1 bottle0.5mlx1 bottle2-8℃Standard diluent3mlx1 bottle6mlx1 bottle2-8℃Streptavidin-HRP3mlx1 bottle6mlx1 bottle2-8℃Biotinylated anti -ANXA2 AB -antibody0.5mlx1 bottle1mlx1 bottle2-8℃Chromogen Solution A3mlx1 bottle6mlx1 bottle2-8℃Chromogen Solution B3mlx1 bottle6mlx1 bottle2-8℃Stop Solution3mlx1 bottle6mlx1 bottle2-8℃wash solution(20mlx20 fold)(20mlx30 fold)2-8℃x1 bottlex1 bottleMaterials required but not supplied1.37 ℃ incubatorStandard microplate reader(450nm)2. Precision pipettes and Disposable pipette tips.3. deionized water.4. Disposable Test tubeAbsorbent paperImportant notesThe kit takes out from the refrigeration environment should be balanced 15-30 minutes in the room temperature, ELISA plates coated if has not use up after opened, the plate should be stored in Sealed bag.1. add Sample with sampler Each step, And proofread its accuracy frequently, avoids the experimental error.2. Please according to use instruction strictly, The test result determination must take the microtiter plate reader as a standard.3. Use new disposal plastic pipette tips and Closure plate membrane for each standard, in order to avoid cross contamination.4. Do not mix reagents with those from other lots.5. The substrate evade the light preservation.Specimen requirementsextract as soon as possible after Specimen collection,and according to the relevant literatur。