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1、活性炭在淋巴结中移行、分布规律探究作者：陈浩黄广建倪泉兴张延龄【摘要】目的研究活性炭在活体淋巴结内移行和分布的 规律。方法选用20只Wistar大鼠，在每只大鼠的后脚掌 皮下注射活性炭悬液，分别在注射后的1、5、24和48 h取 淋巴结，观察淋巴结的大体形态和颜色；淋巴结予以固定， 包埋，苏木精伊红染色制成病理切片，观察活性炭在淋巴 结中的分布情况。结果注射部位所属淋巴结明显黑染，且黑 染淋巴结的次序与淋巴回流方向一致。活性炭进入淋巴结 后，先分布于边缘窦，而后进入中央窦，血管、小梁及淋巴 滤泡均未见活性炭。结论活性炭有较强的趋淋巴性，在淋 巴结中驻留时间长，其本身无毒性，可作为淋巴结示踪剂及
2、 药物载体。【关键词】活性炭淋巴结Abstract Objective To investigate distribution and migratory route of activated carbon in lymph nodes of rats. Methods The experiment involved 20 female Wistar rats that were injected subcutaneously with suspension of the activated carbon at the heel soles, after which, at 1, 5, 24
3、and 48 hours respectively, the lymph nodes were dissected for observing gross morphology and colour. With immobilization, the lymph nodes were sliced to H&；E stained pathological sections for investigating distribution of the activated carbon particles in the lymph nodes ResuIts The lymph nodes a
4、t injection sites turned obviously black staining, with their sequence coinciding with the direction of lymphatic return. After entrance into the lymph nodes, the activated carbon particles were distributed in the marginal sinus first and then entered the central sinus, with no particles in the bioo
5、d vessels, trabeculae or folliculus lymphaticus of the lymph nodes Conclusions The activated carbon can be used as a useful lymphatic tracer and drug carrier, for it is characterized by avirulence, high lymphatic tropism, long residence time in the lymph nodesKey words Activated carbon； Lymph nodes活
6、性炭具有淋巴趋向性，同时又有吸附及缓释的特性。 根据这些特点，活性炭可作为药物载体用于恶性肿瘤转移淋 巴结的治疗。本文对活性炭在大鼠淋巴结内的移行和分布规 律进行组织学观察，为临床应用提供理论依据。1材料与方法1.1实验动物及试剂Wistar大鼠20只，体重60 g左右，均为雌性，购自复 旦大学上海医学院动物实验中心。活性炭(activated carbon, Mitsubishi#1500A),其微粒直径 20 nm, 比表面 积 1 480 m2/g(Mitsubishi Chemical Industries Co. ,Ltd. , Tokyo, Japan)。PVP K 30 分散剂(
7、Nakarai Chemical Co. ,Ltd. ,Kyoto,Japan)。1.2活性炭混悬液的制备将活性炭200 mg, PVP K 30分散剂80 mg加入4 ml生 理盐水充分混合后制成活性炭悬液。1. 3实验分组全部20只Wistar大鼠均在无菌条件下，于其右后脚掌 侧皮内注射0. 02 ml活性炭悬液，然后分成4组，每组5只, 分别在注射后1、5、24和48 h各取一组观察淋巴结黑染情 况。1.4淋巴结的观察点第1站在胭窝淋巴结，第2站在腹股沟淋巴结，第3站 在腹主动脉旁淋巴结。1.5淋巴结观察与制片方法各组均取淋巴结，先作大体观察黑染情况，然后用10% 甲醛溶液固定，酒精脱水
8、石蜡包埋切片苏木精 伊红染色， 制成病理切片，显微镜下观察淋巴结内活性炭微粒的分布情 况。2结果2. 1淋巴结大体观察注射活性炭后不同时间点各组大鼠不同区域淋巴结黑染 情况见表1。注射后lh,胭窝淋巴结全部黑染，腹股沟 淋巴结和腹主动脉旁淋巴结未见黑染（图1）;5 h后，腹股沟淋巴结全部黑染，部分腹主动脉旁淋巴结周边染色； 24h后，3站淋巴结均黑染；48 h后，解剖发现各站黑 染淋巴结依然明显（图2）。表1注射活性炭后不同时间各站 淋巴结黑染情况2.2淋巴结的病理切片观察显微镜检发现注射活性炭后5 h的大鼠胭窝淋巴结活性 炭微粒移行于淋巴窦，以边缘窦为多，中央窦较少（图3）o 注射48 h后
9、的胭窝淋巴结病理切片中不仅看到边缘窦有活 性炭微粒，中央窦内也较前增多；部分窦内巨噬细胞胞质内 见到较细小的活性炭微粒，使该细胞呈墨点状；淋巴结内血 管、小梁及淋巴滤泡内未见活性炭微粒（图4）。3讨论3.1活性炭进入淋巴管的移行方向本研究表明活性炭进入淋巴管后，其移行方向与淋巴回 流方向一致。实验中发现注射活性炭1 h后的大鼠第1站胭 窝淋巴结明显黑染，但第2站腹股沟淋巴结未见黑染；注射 5 h后发现大鼠胭窝淋巴结和腹股沟淋巴结均明显黑染；24 h 后第3站腹主动脉旁淋巴结才出现黑染。黑染按淋巴结的站 别依次出现，并且是全部黑染，说明活性炭颗粒是随着淋巴 液回流一起移行，与淋巴回流的方向一致，
10、所属区域淋巴结 未见遗漏，此特点对于示踪淋巴结转移极为重要。因此如果 注射部位是在某器官的肿瘤旁，随着时间延长，则此器官所 属区域淋巴结将依次全部黑染。对于某脏器的实体肿瘤，肿 瘤四周也许存在不同的淋巴回流方向，因此需要在肿瘤四周 分别注射活性炭，才能更好的显示可能发生肿瘤细胞转移的 淋巴结。3.2活性炭作为淋巴结示踪剂的作用淋巴结具有吞噬大分子物质和微粒的特性1。本实验 使用的活性炭是直径20 nm呈多孔蜂窝状结构的微粒，局部 注射后，淋巴结可快速被黑染。病理切片显示：48 h淋巴结 中仍可见大量的活性炭颗粒，提示活性炭颗粒可较长时间滞 留在淋巴结内，较多的巨噬细胞还吞噬活性炭颗粒，也使得
11、活性炭颗粒不会随淋巴回流而被快速排泄。Aginara等2 发现活性炭微粒通过局部缺如或不完整的毛细淋巴管的基 底膜、内皮细胞间隙及巨噬细胞的吞噬作用，以渗透和扩散 的方式进入淋巴管和淋巴结，将淋巴结黑染。从本实验结果 看，随着时间的延长几乎所有的淋巴结被黑染，清晰可见， 从HE染色的淋巴结病理切片中均可看到散布在淋巴窦中的 活性炭颗粒。因此，术前48 h在肿瘤旁组织内注射活性炭 悬液，术中即可清晰辨认肿瘤器官所属淋巴结，便于手术清 扫，这在日本称为点墨法3o我们的研究也证明，使用活 性炭后转移淋巴结的清扫数目明显高于对照组4。有文献 报道常规病理检查中无肿瘤转移的淋巴结中仍有6. 5%的微 转
12、移率5o Toma等6在直肠癌手术中使用活性炭检测 18例肉眼无肿瘤转移的前哨淋巴结，其中病理检查见2例有 转移，3例有微转移。因此，活性炭黑染淋巴结为临床外科 医师行淋巴清扫术提供了方便，可减少较小的但有肿瘤细胞 转移可能的淋巴结残留。3.3活性炭黑染淋巴结的其他特点Cat ar ci等7研究发现注射活性炭后摘除的染色淋巴 结，其肿瘤转移阳性率高于未注射活性炭组，两者差异有统 计学意义，显示了活性炭似乎更倾向停留于有肿瘤转移的淋 巴结内，其原因还有待于进一步研究。另外，从本实验淋巴 结病理切片上看到，活性炭只集中于淋巴窦内，血管中无活 性炭微粒。如果活性炭作为载体吸附化疗药物，则药物只局 限
13、于淋巴结内，可明显提高淋巴系统内的药物浓度，不易随 血液循环进入全身，这也是淋巴化疗全身毒副反应较少发生 的一个重要原因。总之，活性炭作为一类大分子物质，具有极强的淋巴系统趋向性，可在术前术中使用，便于手术医师作彻底的淋巴 结清扫，提高肿瘤根治术的手术效果，延长患者生存时间。【参考文献】1 Tanigawa N, Satomura K, Hikasa Y, et al. Surgical chemotherapy against lymp node metastases： am experimental study J . Surgery,1980,87(2):147-152.2 Aginar
14、a A, Takahashi T, Aanai K, et al. Selective drug delivery to peri tumoral region lymphatics by local injection of aclarubicin adsorbed on activated carbon particles in patients with breast cancer一a pilot study J . Anticancer Drug,1997,8(7):666-670.3 高桥俊雄胃癌J日癌治，1985,20(3):672-673.4 黄广建，陈忠清，张延龄，等胃癌病灶周
15、围注射超微活性炭对淋巴结的显色效果J中华医学杂志，2004,84 (24): 2070-2072.5 Ueyama T, Guo K J, Hashimoto H, et al. A cl inicopathologic and immunohistochemical study ofgastrointestinal stromal tumors J Cancer,1992,69 (4):947-955.6 Toma A, Hag i war a A, Ot suji E, et al. Detection of sentinel lymphatic region with activated
16、 carbon particles in lymph node dissection for colorectal cancer J . Can To Kagalcn Dyoho, 2002,29 (12): 2291-2293.7 Catarci M, Guadongni S, Zaraca F, et al. Prospective randomized evaluation of preoperative endoscopic vital staining using CH 40 for lymph node dissection in gastrie cancer J . Ann SurgOncol,1998,5(7):580-584.
