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1.毕赤氏酵母GS115感受态细胞制备(1)从YPD平板上挑取单菌落23个于含25mL YPD的250mL三角瓶中，220r/min，30oC过夜（下午5点接，到第二天9点转接）;(2)取1mL 过夜培养物，接种含50mL 新鲜培养基（YPD）的250mL 摇瓶（接种两瓶，共100mL培养液），生长至OD600(4h左右）；(3)将100mL培养液分装于3个50mL离心管中，4oC，5000g离心5min，用少许预冷的灭菌水悬浮细胞后并于1管中，加预冷的灭菌水至20mL；(4)如上离心，用10mL 预冷的灭菌水悬浮细胞；(5)如上离心，用10mL 预冷的1 mol/L山梨醇溶液悬浮细胞；(6)如上离心，用0.5mL 预冷的1 mol/L山梨醇溶液悬浮细胞。2.转化（电击转化）(1)取80mL上述细胞与10mL 线性化DNA混合，转入预冷的0.2cm电转杯中；(2)在冰上放置5min；(3)根据所使用电转仪制造商推荐的酿酒酵母参数进行电击细胞（1.5KV，6ms）；(4)立即加入0.9 mL 预冷的1 mol/L山梨醇溶液至杯中，将内容物转移至灭菌离心管中；(5) 5000g离心5min，剩余200mL菌液吹吸重悬细胞，涂布1块MD平板；(6)在30oC孵育平板至菌落明显形成（大约34天）。
