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1、自身抗体谱临床解读自身抗体谱临床解读。01概概 述述n自身抗体：自身抗体：指针对自身细胞内、细胞表面和细胞指针对自身细胞内、细胞表面和细胞外抗原的免疫球蛋白，见于多种风湿性疾病，尤外抗原的免疫球蛋白，见于多种风湿性疾病，尤其在弥漫性结缔组织病中更为常见，对临床风湿其在弥漫性结缔组织病中更为常见，对临床风湿病诊断意义重大。病诊断意义重大。n目前用于临床的常见自身抗体有抗核抗体谱、抗目前用于临床的常见自身抗体有抗核抗体谱、抗中性粒细胞胞浆抗体、抗磷脂抗体、类风湿因子、中性粒细胞胞浆抗体、抗磷脂抗体、类风湿因子、抗线粒体抗体等。抗线粒体抗体等。2n抗核抗体谱抗核抗体谱q抗抗DNA抗体抗体q抗核糖体抗
2、核糖体P抗体抗体q抗组蛋白抗体抗组蛋白抗体q抗抗ENA抗体抗体n抗抗Sm抗体抗体n抗抗U1RNP抗体抗体n抗抗Ro/抗抗SSA抗体抗体n抗抗La/抗抗SSB抗体抗体n肌炎特异性抗体（肌炎特异性抗体（MSA）q抗合成酶抗体抗合成酶抗体q抗抗SRP抗体抗体q抗抗Mi2抗体抗体n与系统性硬化相关的抗体与系统性硬化相关的抗体q抗拓扑异构酶抗拓扑异构酶1抗体抗体q抗着丝点抗体（动粒）抗着丝点抗体（动粒）q抗核仁抗原的抗体抗核仁抗原的抗体n抗中性粒细胞胞质抗体抗中性粒细胞胞质抗体qC-ANCAqP-ANCAn抗磷脂抗体抗磷脂抗体q狼疮抗凝物狼疮抗凝物q抗心磷脂抗体抗心磷脂抗体q2糖蛋白糖蛋白 n抗内皮细胞
3、抗体抗内皮细胞抗体n类风湿关节炎相关抗体类风湿关节炎相关抗体 类风湿因子（类风湿因子（RF） 抗抗CCP抗体抗体 抗核周因子抗体抗核周因子抗体n自身免疫性肝病相关抗体自身免疫性肝病相关抗体 SMA，LKM，SLA， AMA，Sp100,gp210等等。3自身抗体的临床意义自身抗体的临床意义n自身抗体在自身抗体在CTDCTD中有特殊意义中有特殊意义疾病的筛选疾病的筛选具有诊断意义的标记具有诊断意义的标记与病情及预后相关与病情及预后相关与某些临床表现相关与某些临床表现相关n与疾病的发病机制有关与疾病的发病机制有关n评估风湿性疾病重要的参数之一评估风湿性疾病重要的参数之一n研究疾病的重要方向之一研究
4、疾病的重要方向之一。4自身抗体检测方法自身抗体检测方法n间接免疫荧光法（间接免疫荧光法（IF）：）：不溶性成分不溶性成分n酶联免疫吸附法（酶联免疫吸附法（ELISA）；）；n放射免疫法（放射免疫法（RIA）；）；n对流免疫电泳法（对流免疫电泳法（CIE）；）；n免疫双扩散法（免疫双扩散法（ID）；）；n免疫印迹法免疫印迹法：针对可溶性成分（如：针对可溶性成分（如ENA、DNA、 凝血因子、补体）凝血因子、补体）。5抗核抗体抗核抗体（Antinuclear Antibody, ANA）传统定义：将针对细胞核内成分的抗体称为传统定义：将针对细胞核内成分的抗体称为ANA。现在对现在对ANA靶抗原的理
5、解已从细胞核扩大到整个细胞。靶抗原的理解已从细胞核扩大到整个细胞。是指抗核酸（是指抗核酸（nucleic acid）和核蛋白（）和核蛋白（nucleoprotein）抗体的总称。抗体的总称。6ANA测定原理和方法：测定原理和方法：n间接免疫荧光法间接免疫荧光法（IIF):现多以现多以Hep-2细胞（人喉癌上细胞（人喉癌上皮细胞）为底物（皮细胞）为底物（Ag)，其以核质丰富而极大地提高，其以核质丰富而极大地提高了了ANA检测的阳性率和滴度。检测的阳性率和滴度。 n是系统性红斑狼疮（是系统性红斑狼疮（SLE）的）的标准筛选试验标准筛选试验。 n我们实验室采用欧蒙荧光检测系统，将我们实验室采用欧蒙荧
6、光检测系统，将1:1001:100作为血作为血清起始稀释度，所以如果是低滴度的清起始稀释度，所以如果是低滴度的1:1001:100阳性，只阳性，只能视为一个临界可疑值，临床意义不大。能视为一个临界可疑值，临床意义不大。nANAANA作为自身免疫性结缔组织病的筛选试验必须强调作为自身免疫性结缔组织病的筛选试验必须强调高滴度。高滴度。7ANA的意义的意义nANA（）结果的（）结果的出现率出现率取决于以下因素：取决于以下因素：q分析系统分析系统：由于不同厂家：由于不同厂家ANA检测系统的起始稀释度和稀释检测系统的起始稀释度和稀释 因子不同，因而不同厂家的因子不同，因而不同厂家的ANA滴度结果不能直接
7、进行比较。滴度结果不能直接进行比较。q区分血清（）与（）的选定的滴度值，未加稀释的正常人区分血清（）与（）的选定的滴度值，未加稀释的正常人 血清可有血清可有1/3的呈阳性的呈阳性ANA反应。反应。 n是是SLE独立的诊断条件之一。独立的诊断条件之一。n滴度本身与疾病的活动度并滴度本身与疾病的活动度并不相关，没有不相关，没有评价预后的意义。评价预后的意义。n筛查风湿病，敏感性高。筛查风湿病，敏感性高。nANA（）可出现在（）可出现在多种情况多种情况下，特异性差。下，特异性差。8ANA（）的原因（）的原因n风湿性疾病风湿性疾病qSLEq多发性肌炎多发性肌炎q干燥综合征干燥综合征q硬皮病硬皮病q血管
8、炎血管炎qRAn正常的健康人正常的健康人q女性男性，出现率随女性男性，出现率随年龄而增加年龄而增加q风湿性疾病患者亲属风湿性疾病患者亲属q？孕妇？孕妇n药物诱导药物诱导n慢性肝脏疾病慢性肝脏疾病n慢性肺部疾病慢性肺部疾病n慢性感染慢性感染n血液系统异常血液系统异常n恶性肿瘤恶性肿瘤。9SLE患者使用患者使用IIF法测定法测定ANA阴性的一些解释阴性的一些解释 n技术方面技术方面n临床方面临床方面q经皮质激素或免疫抑制剂经皮质激素或免疫抑制剂治疗。治疗。q终末期终末期肾病。肾病。q隐蔽隐蔽ANA：与循环中免疫复合物结合，：与循环中免疫复合物结合，沉积沉积于组织。于组织。q由于大量由于大量蛋白尿蛋
9、白尿而从肾脏丢失。而从肾脏丢失。10ANA的荧光染色型别的荧光染色型别细胞核：细胞核：核均质型（核均质型（DNA、组蛋白和核小体等）、组蛋白和核小体等） 核颗粒型（核颗粒型（Sm、uRNP、SS-A、SS-B、Ku、I和和型周期蛋白）型周期蛋白） 核膜型（板层素、核膜型（板层素、gp120等）等） 核仁型（核仁型（SCL-70、PM-SCL、RNA多聚酶、原纤维蛋白等）多聚酶、原纤维蛋白等） 核浆点型（着丝点、核多点及核少点型）核浆点型（着丝点、核多点及核少点型）细胞浆：细胞浆：胞浆颗粒型（线粒体、胞浆颗粒型（线粒体、Jo-1、核糖体等）、核糖体等）胞浆纤维型：波形蛋白、原肌球蛋白和肌动蛋白等
10、胞浆纤维型：波形蛋白、原肌球蛋白和肌动蛋白等分裂期细胞阳性：分裂期细胞阳性：纺垂体、中间体、中心体等纺垂体、中间体、中心体等根据产生的荧光模型、靶抗原的分布部位分类如下：根据产生的荧光模型、靶抗原的分布部位分类如下：。11核颗粒型：核粗颗粒型核颗粒型：核粗颗粒型。12n抗核抗体染色类型 核仁型核仁型（nucleolar）。13均质性均质性 （ homogeneous ）。14斑点型斑点型（speckled）。15ANA的的 荧光类型荧光类型nANA试验的结果中一般会报告其分型，这些分型可能与某一特定的抗原反应活性相关。分型分型 相关疾病相关疾病 核仁型核仁型硬皮病硬皮病着丝点型着丝点型CRES
11、T综合征综合征周边型周边型SLE斑点型斑点型/弥弥散型散型混合性结缔组织病混合性结缔组织病（MCTD）。16ANAs的分类：的分类： n抗抗DNA抗体抗体n抗组蛋白抗体抗组蛋白抗体 n抗非组蛋白抗体抗非组蛋白抗体 n抗着丝点抗体：抗着丝点抗体： n抗核小体抗体抗核小体抗体 。17抗抗DNA抗体抗体n已确认出两大类抗体特异性：已确认出两大类抗体特异性：q天然的天然的双链双链DNA（dsDNA）：对诊断）：对诊断SLE特异性高特异性高q变性的变性的单链单链DNA（ssDNA）n多数实验室采用以下方法进行多数实验室采用以下方法进行测定测定：q放射免疫分析法（放射免疫分析法（RIA，Farr分析法）：
12、定量分析法）：定量q酶联免疫吸附法（酶联免疫吸附法（ELISA）：定量）：定量q间接免疫荧光法（间接免疫荧光法（ IIF，短膜虫法）：半定量，短膜虫法）：半定量n抗体水平与抗体水平与疾病活动度相关疾病活动度相关，随着疾病活动的控制，抗，随着疾病活动的控制，抗dsDNA抗体滴度可以下降或消失。抗体滴度可以下降或消失。n抗抗dsDNA抗体与抗体与SLE肾损伤有关：肾损伤有关：DNA形成免疫复合物在形成免疫复合物在肾小球基底膜沉积，或抗肾小球基底膜沉积，或抗dsDNA抗体直接作用于肾小球抗抗体直接作用于肾小球抗原。强烈提示其原。强烈提示其致病致病作用。作用。18抗核糖体抗核糖体P抗体抗体（又称为：抗
13、（又称为：抗rRNP抗体）抗体）n针对3磷蛋白P0、P1和P2的抗体。n诊断SLE的高度特异性标记物。n在1015的SLE患者中出现。n抗体水平与疾病的活动度相关。n与狼疮脑病有关。19抗组蛋白抗体抗组蛋白抗体（Anti-Histone Antibody，AHA）n组蛋白是染色质基本结构-核小体的重要组成部分；n在药物性狼疮的患者中出现率很高（78- 95%）；n在多种结缔组织病中出现。n服用异烟肼的病人中最高，但临床上并没有出现狼疮的临床症状，其它肼苯哒嗪、普鲁卡因酰胺。20抗核酸结合蛋白抗核酸结合蛋白/可提取性核抗原可提取性核抗原（Extractable Nuclear Antigen,
14、ENA）抗体抗体。21抗抗ENA抗体的类型抗体的类型n抗抗Sm抗体抗体n抗抗U1RNP抗体抗体n抗抗Ro/抗抗SSA抗体抗体n抗抗La/抗抗SSB抗体抗体n肌炎特异性抗体（肌炎特异性抗体（MSA）n与系统性硬化相关的抗体与系统性硬化相关的抗体。22抗抗ENA抗体的检测及临床意义抗体的检测及临床意义n采用免疫扩散法；采用免疫扩散法；ELISA和和免疫印迹法。免疫印迹法。n几乎几乎仅仅出现于患有结缔组织病的患者中。出现于患有结缔组织病的患者中。n如果如果无症状者无症状者中出现高滴度的抗中出现高滴度的抗ENA抗体，常预示着未来抗体，常预示着未来可能发展成可能发展成结缔组织病结缔组织病。n抗体常在疾病
15、的抗体常在疾病的整个整个病程中均能够被检测到。病程中均能够被检测到。n滴度与疾病活动度并滴度与疾病活动度并无无一致的关系。一致的关系。23抗抗Sm抗体抗体 （Smith） nACRSLE诊断标准中，抗Sm抗体是诊断标准标准之一。抗Sm抗体非常有助于作出SLE的诊断。n30左右SLE存在该抗体。nSLE患者中，常与抗U1RNP抗体一同出现 n与临床的相关性并不强，但有证据显示其与中枢神经系统受累、肾脏病变、肺纤维化、心包炎有关。有人认为可以作为疾病活动度的指标。24抗抗U1RNP抗体抗体n抗nRNP(nuclear RNP)：以抗核内的核糖核蛋白而得名。临床上应用较多的是u1RNP抗体。通常又把
16、nRNP称之为u1RNP。n抗u1RNP抗体在混合性结缔组织病（MCTD）中几乎均为阳性，且其滴度很高；n是区分结缔组织病和非结缔组织病的有力指标。n抗u1RNP抗体阳性的病人，常有双手肿胀、雷诺现象、肌炎和指（趾）端硬化。n2530的SLE患者存在该抗体，一般与抗Sm抗体一同出现。25抗抗Sm/nRNP抗体抗体nSm和和nRNP是同一分子复合物（是同一分子复合物（RNA-蛋白颗粒）中蛋白颗粒）中的不同抗原位点，的不同抗原位点，nSm含有含有u1、u2和和u4-u6，而，而nRNP(u1RNP)仅含仅含u1RNA。也即抗。也即抗Sm抗体阳性均伴有抗抗体阳性均伴有抗u1RNP抗体，抗体，而抗而抗u1RNP抗体可以单独存在。抗体可以单独存在。n抗抗u2RNP抗体在系统性硬化症伴多发性肌炎的重叠综抗体在系统性硬化症伴多发性肌炎的重叠综合征中阳性频率较高。银屑病及雷诺现象的病人也可合征中阳性频率较高。银屑病及雷诺现象的病人也可呈阳性。呈阳性。n抗抗u3RNP抗体常与系统性硬化相关，且常伴有肺动脉抗体常与系统性硬化相关，且常伴有肺动脉高压、骨骼肌和小肠受累。高压、骨骼肌和小肠受累。26抗抗SS-
