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1、第七章 基因重组与基因工程一 选择题【A型题】1催化位点特异的重组的酶是 A逆转录酶B整合酶CDNA聚合酶D限制性内切酶EDNA连接酶2由整合酶催化、在两个DNA序列的特异位点间发生的整合称 A位点特异的重组B同源重组C基本重组D随机重组E人工重组3发生在同源序列间的重组称为 A基本重组B位点特异的重组C随机重组D人工重组E非位点特异的重组4DNA克隆不包括下列哪项步骤 A目的基因的获取B构建合适的表达载体C外源基因和载体连接D用抗药性标志选择法筛选转化菌E将重组DNA导入受体菌5不需要DNA连接酶的是 ADNA复制B光复活C切除修复D基因工程E重组修复6关于质粒的叙述， 错误的是 A大小约为
2、数千个碱基对B双链线性分子C存在于大多数细菌胞质D易从一个细菌转移入另一个细菌E常带抗药基因7某限制性内切核酸酶切割5GGAATTCC3序列后产生 A5突出末端B3突出末端C5及3突出末端D5或3突出末端E平末端8限制性核酸内切酶识别序列的特点是 A超螺旋结构B螺旋结构C回文结构D锌指结构E串联重复序列9cDNA文库包括该种生物 A全部遗传信息B所有蛋白质的编码基因C某些蛋白质的编码基因DrRNA基因EtRNA基因10不能用作克隆载体的DNA是A质粒DNAB噬菌体DNAC细菌基因组DNAD腺病毒DNAE逆转录病毒DNA11常用质粒载体的特点是 A为线性双链DNA分子B为环型单链DNA分子C具有
3、自我复制能力D含有同一限制性内切酶的多个切点E缺乏表达外源基因的能力12基因克隆载体应具备的基本条件是 A含有耐药基因B具备表达调控元件C具有转录能力D具有翻译能力E具有自我复制能力13关于建立cDNA文库的叙述，错误的是 A从特定组织中提取mRNAB从特定组织中提取DNAC用逆转录酶合成与mRNA互补的单股DNAD用DNA聚合酶，以单股cDNA为模板合成双链cDNAE双链cDNA与适当载体连接14基因工程中不需要 A限制性内切酶B基因载体CDNA连接酶D末端核苷酸转移酶E核酶15连接目的基因与载体不能采用 A粘端连接B平端连接C同聚物加尾连接D人工接头连接E非共价键连接16在DNA重组中，催
4、化形成重组DNA分子的酶是 ADNA聚合酶B逆转录酶C解链酶DDNA连接酶E拓扑异构酶17不属于回文结构的双链DNA序列(仅列出其中一条链序列)是 AAGAATTCTBTGAATTCACGGAATTCCDCGTTAAGCEAGATATCT【X型题】18DNA重组的步骤包括 A用PCR技术合成大量的重组DNAB将外源性DNA与载体连接C将重组DNA引入受体细胞D培养细胞以扩增重组DNAE筛选出含有重组体的克隆19关于限制性内切酶的叙述，正确的是 A一类能识别单链DNA中特定碱基顺序的核酸水解酶B大部分类酶识别的DNA序列呈二元旋转对称C酶切产生的末端是粘性末端或平末端D不同的限制性内切酶酶切产生
5、的末端不同E辨认的核苷酸序列一般为4或6 个核苷酸20关于质粒DNA的叙述，正确的是 A是基因组DNA的组成部分B具有独立复制功能C含有目的基因D具有限制性内切酶酶切位点E含有抗生素抗性基因21载体必需具备的特点是 A本身是一个复制单位，具有复制起点B插入外源DNA不影响载体本身的复制C进入细胞后用自身酶系进行复制D易进入受体细胞E易于鉴定和筛选22载体和目的基因的连接效率最高而且是定向连接的 A两个不同的粘性末端B两个相同的粘性末端C一个粘性末端和一个平端D两个酶切产生的平端E两个由粘性末端补平产生的平端23同聚物加尾连接法连接目的基因与载体需要 A核酶B限制性核酸内切酶C末端核苷酸转移酶D
6、DNA连接酶EDNA拓扑异构酶24在分子克隆中，目的DNA可来自 A原核细胞染色体DNAB真核细胞染色体DNAC真核细胞mRNA反转录的cDNAD聚合酶链式反应E人工合成的DNA二、名词解释1. DNA cloning 2. 限制性核酸内切酶 3. Gene library三、简答题1. 在基因克隆中，目的基因有哪些主要来源?2. 常用的限制性核酸内切酶有哪些特点?3. 连接目的基因与载体的方式主要有哪些?4. 简述基因克隆的基本过程5. 理想的基因克隆载体应具有哪些条件?质粒为什么能作为基因载体?参考答案一 选择题1B 2A 3A 4B 5B 6B 7A 8C 9C 10C11C 12E 1
7、3B 14E 15E 16D 17D 18BCDE 19BCE 20BDE 21ABDE 22. AC 23CD 24ABCDE二、名词解释1. DNA克隆又称基因克隆或重组DNA。应用酶学的方法，在体外将各种来源的遗传物质同源的或异源的、原核的或真核的、天然的或人工的DNA与载体DNA结合成一具有自我复制能力的DNA分子复制子，继而通过转化或转染宿主细胞、筛选出含有目的基因的转化子细胞，再进行扩增、提取获得大量同一DNA分子。2. 限制性核酸内切酶：是能够识别DNA的特异序列，并在识别部位或其周围切割双链DNA的一类核酸内切酶。这类酶存在于细菌体内，具有限制外源DNA侵入的作用，对细菌遗传性
8、状的稳定遗传具有重要意义。限制性核酸内切酶可分为三类。类限制性核酸内切酶是基因克隆中常用的重要工具酶。3. 基因文库是指提纯生物体的全部DNA，用限制性核酸内切酶随机切割成长短大致相同的数以万计的片段，将所有片段重组于同一类载体上，便得到许多重组体，将重组体全部转化入宿主菌中保存起来，就形成基因文库。基因文库有二种，用基因组总DNA制备的叫G-文库；用细胞全部mRNA经反转录制备全套cDNA后建库，则称c-文库。三、简答题1目的基因的主要来源有：(1)从染色体DNA中直接分离：主要针对原核生物。(2)化学合成法：由已知多肽的氨基酸序列，推得编码这些氨基酸的核苷酸序列，利用DNA合成仪人工合成其
9、基因(3) 基因组DNA：分离组织/细胞染色体DNA，利用限制性内切核酸酶将染色体DNA切割成片段，与适当的克隆载体连接后转入受体均扩增，即获得基因组DNA文库，用核酸探针将所需目的基因自基因文库中“钓”取出来。 (4) 从mRNA合成cDNA：提取mRNA，利用反转录酶合成与其互补的DNA（cDNA）分子，再复制成双链cDNA片段，与适当载体连接后转入受体菌，即获得cDNA文库，然后采用适当方法从cDNA文库中筛选出目的cDNA.。(5)PCR方法扩增目的基因。2型限制性核酸内切酶(限制酶)是基因工程中常用的重要工具酶，是一类能识别双链DNA分子中特异核苷酸序列的核酸内切酶，常用限制酶主要有
10、以下特点：(1) 均来自于微生物，并以其来源的微生物学名进行命名；(2) 分子量小，仅需Mg2+作为辅助因子，无需ATP；(3) 识别特异性DNA双链顺序，在序列内特异切割产程特异性DNA片段(4) 识别序列长度：连续的4/6/8bp；(5) 识别序列特点：呈二元旋转对称，称回文结构，富含GC；(6) 有三种切口：5端突出的粘末端（如Hind ）、3端突出的粘末端（如Pst） 平末端（如Hpa）3连接目的基因与载体的方式主要有：(1)粘性末端连接：同用一限制酶切割载体及目的基因后，产生完全相同的粘性末端，可以用DNA连接酶直接进行共价连接。或两种不同的限制性内切核酸酶切割产生的配伍末端（相同类
11、型的粘性末端）之间也可以进行粘末端连接。(2)平端连接：某些限制酶切割DNA后产生平头末端，由于平头末端5端带有磷酸，3端带有游离羟基，可在DNA连接酶作用下直接连接，并且不管末端序列如何均可连接，但连接效率要比粘性末端之间的连接低。(3)同聚物加尾连接：利用同聚物序列，如多聚与多聚T之间的退火作用完成连接。如果载体和目的基因上找不到共同的酶切点时，可经不同的限制酶切割后，用单链核酸酶将其各自的粘性末端切平，在末端核苷酸转移酶作用下，在DNA片段末端加上同聚物序列，制造出粘末端，而后连接。(4)人工接头连接：将磷酸化接头/适当分子连到平末端，使产生新的限制性酶切核酸酶位点，再用限制酶切割，产生
12、粘末端后连接。4基因克隆的主要过程包括分、切、接、转、筛五大步骤。分：是指分离目的基因和基因载体，切：是指利用限制性核酸内切酶分别切割目的基因和基因载体，经切割后产生粘端切口或平端切口。接：是指利用连接酶将目的基因与载体共价连接形成DNA重组体。转：是指将DNA重组体转入细胞，可通过转化、转染、感染的方式转入。筛：是指对含有DNA重组体的宿主细胞(阳性克隆)进行筛选和鉴定并加以扩增。5.理想的基因克隆载体应具备：(1)在宿主细胞内可自行复制，并保持一定的拷贝数；(2)有适宜的限制性核酸内切酶切割位点，最好对同一种限制酶有单一切点；(3)载体分子应尽量小，可插入较大的外源DNA而不影响复制；(4
13、)有一定的筛选标记，便于识别和筛选。质粒可作为载体是由于其本身具有以下特点：(1)质粒是存在于细菌染色体外的小型环形双链DNA分子，分子大小为2，3kb几百kb不等；(2)质粒份子本身是具复制功能的遗传结构，可在宿主细胞内独立自主地复制，并在细胞分裂时保持恒定地传给子代细胞；(3)可在细菌内保持一定的拷贝数，并易于从一个细菌转移入另一细菌；(4)含有EcoRI、Hind、BamHI等多种限制酶切割位点；(5)质粒带有某些遗传信息，会赋予宿主细胞一些遗传性状，如对青霉素或重金属的抗性等，可作为选择标志，便于筛选；(6)具有基因表达的功能，可构建成表达载体，在原核细胞中进行目的基因的表达；因此天然的质粒经过人工改造，可构建成理想的基因载体。
