发酵饲料中可溶性还原糖和总糖的测定 4.3.1 葡萄糖标准曲线制作取9支具塞刻度试管编号，按表1分别加入浓度为1mg/ml的葡萄糖标准液、蒸馏水和DNS试剂，配成不同浓度的葡萄糖反应液表1 葡萄糖标准曲线制作试剂0 1 2 3 4 5 6 7 8葡萄糖标准溶液（mL）0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 1.4 1.6 蒸馏水（mL）2 1.8 1.6 1.4 1.2 1.0 0.8 0.6 0.4 DNS（mL） 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 葡萄糖含量（mg）0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 1.4 1.6 OD540将以上溶液，封口置沸水浴煮5min，冷浴冷却，定容至25mL，以0号管为对照，在540nm下测定吸光值，以葡萄糖质量为Y轴，吸光值为X轴，拟合曲线标准曲线为：4.3.2 样品中还原糖和总糖的测定4.3.2.1 样品中还原糖的提取准确称取1.00g样品，放入100mL烧杯中，先用少量蒸馏水调成糊状，然后补足至50ml蒸馏水，搅匀，煮沸5min，使还原糖浸出将浸出液(含沉淀)转移到50mL离心管中，于4000r/min离心5min，沉淀可用20mL蒸馏水洗一次，再离心，将两次离心的上清液收集在100mL容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，混匀，即为稀释100倍的还原糖待测液（实验时可根据需要稀释至适当倍数：10、20、30、40、50、100、200等）。
4.3.2.2 样品中总糖的水解和提取准确称取1.00g样品，放入100mL三角瓶中，加15mL蒸馏水及10mL6mol/L 的HCl，置沸水浴中加热水解30min(1滴酚酞试剂检测呈微红)待三角瓶中的水解液冷却后，加入1滴酚酞指示剂，用6mol/L的NaOH中和至微红色(至中性)，用蒸馏水定容在100ml容量瓶中，混匀，即为稀释100倍总糖待测液（实验时可根据需要稀释至适当倍数10、20、30、40、50、100、200等）表2 样品还原糖测定试剂0 1 2 3样品溶液(mL) 0 1.0 1.0 1.0蒸馏水(mL 2.0 1.0 1.0 1.0DNS（mL） 1.50 1.50 1.50 1.50OD540通过标准曲线计算得到的还原糖量（mg）样品中还原糖或总糖质量分数（%）4.3.2.3 还原糖和总糖的测定取4支具塞试管，编号0、1、2、3以制作标准曲线相同的方法，在1-3号试管分别加入1mL 待测液和1mL 蒸馏水，1.5mL DNS （保证与葡萄糖标准曲线制作相同的反应体系），而对照的0号管内做则加2mL 的蒸馏水和1.5mL DNS 封口置沸水浴煮5min ，冷浴冷却，定容至25mL 。
在540nm 下测吸光值4.4 结果与计算计算光密度的平均值，根据所得标准曲线即可得到的还原糖的质量C ，按下式计算样品还原糖和总糖的含量1001??=mVC ω 9.012?=ωω计算公式由公式：100/%??=样品毫克数测定时取用体积提取液总体积数查曲线所得葡萄糖毫克）还原糖（整理得到式中，ω1为还原糖（以葡萄糖计）的质量分数，%；ω2为总糖的质量分数，%；C 为还原糖或总糖提取液浓度，mg/mL ，本公式中C 即为根据标准曲线计算得到的还原糖毫克数（测定时取用体积为1mL ）；V 为提取液的总体积，mL ；（提取液的总体积即为稀释倍数） m 为样品质量，mg 4.5 实验注意事项样品的稀释倍数要保证计算得到的葡萄糖浓度在标准曲线线性关系良好范围内以往经验和文献报道表明，OD 540在0.1-0.4范围内数据较为真实发酵饲料中可溶性还原糖测定实验记录1 葡萄糖标准曲线制作取9支具塞刻度试管编号，按表1分别加入浓度为1mg/ml的葡萄糖标准液、蒸馏水和DNS试剂，配成不同浓度的葡萄糖反应液表1 葡萄糖标准曲线制作试剂0 1 2 3 4 5 6 7 8葡萄糖标准溶液（mL）0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 1.4 1.6 蒸馏水（mL）2 1.8 1.6 1.4 1.2 1.0 0.8 0.6 0.4 DNS（mL） 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 葡萄糖含量（mg）0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 1.4 1.6 OD540将以上溶液，封口置沸水浴煮5min，冷浴冷却，定容至25mL，以0号管为对照，在540nm下测定吸光值，以葡萄糖质量为Y轴，吸光值为X轴，拟合曲线。
标准曲线为：2 样品中含糖量的测定表2 样品还原糖测定试剂0 1 2 3样品溶液(mL) 0 1.0 1.0 1.0蒸馏水(mL 2.0 1.0 1.0 1.0DNS（mL） 1.50 1.50 1.50 1.50OD540通过标准曲线计算得到的还原糖量（mg）样品中还原糖或总糖质量分数（%） -全文完-。