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1、 国家自然科学基金申请书学科代码：C1606 受理部门： 收件日期：受理编号：第 16 页 共 16 页国家自然科学基金申 请 书您现在还不能填写文档或打印，请根据以下三个步骤操作： 1)如果您是Word2000或以上版本用户，请把Word宏的安全性设为:中 方法: Word菜单-工具-宏-安全性-安全级,设置为中 (如果您是Word97用户，继续执行以下步骤) 2)关闭本文档，重新打开本文档 3)点击启用宏按钮，即可开始填写本文档或打印了资助类别：面上项目亚类说明：青年科学基金项目 附注说明：项目名称：以PSCA为启动因子重组腺病毒转染纳碘泵基因治疗前列腺癌申 请 者： 电话： 依托单位：中
2、国人民解放军第二军医大学通讯地址： 邮政编码： 单位电话：021-25070230E-mail ： 申报日期： 2003年3月15日国家自然科学基金委员会基本信息申 请 者 信 息姓名性别 出生年月 年 月民族 学位 职称 主要研究领域 电话 E-mail 传真 个人网页 工作单位 在研项目批准号 依托单位信息名称代 码20043303 联系人陆伟 E-mailLWYYOK 电话021-25070230 网站地址 合作单位信息单 位 名 称代 码 项 目 基 本 信 息项目名称资助类别面上项目 亚类说明青年科学基金项目 附注说明 学科代码C1606:泌尿外科学 C1710:肿瘤学 基地类别 预
3、计研究年限2004年1月 2006年12月研究属性应用基础研究 总预算经费 申请经费 摘 要项目研究内容和意义简介（限400字）：我国前列腺癌发病率近年来呈明显上升趋势，但初诊时50以上已有转移，内分泌治疗是其最主要、有效的姑息性疗法。但几乎所有病人将转为激素非依赖性，即对内分泌治疗不再敏感，成为治疗的一大难题。本课题应用腺病毒载体将白介素2（IL2）和钠/碘转运蛋白基因转染前列腺癌小鼠模型的癌组织内，使目的基因在前列腺癌组织内特异性表达。然后给予碘放射性同位素，在钠/碘转运蛋白的作用下，同位素碘在前列腺癌组织内高浓度聚集，以达到杀伤肿瘤细胞的作用。而IL2的表达，可以调节机体的抗肿瘤免疫，在
4、放射性同位素破坏肿瘤细胞、瘤细胞抗原显露后，进一步通过细胞免疫杀伤肿瘤，从而起到抗癌的协同作用。该课题通过腺病毒转染，在组织特异性启动子作用下，目的基因在前列腺癌细胞中特异性表达，从而达到组织特异性杀伤肿瘤组织，尽可能的减少了全身副作用。免疫调节治疗和同位素放疗的有机结合，为中晚期前列腺癌的治疗开辟一条新的途径。关 键 词(用分号分开，最多5个)前列腺癌 钠/碘转运蛋白 放射性碘 白介素2 基因治疗 项目组主要成员编号姓 名出生年月性别职 称学 位单位名称电话E-mail项目分工每年工作时间（月）12345678910总人数高级中级初级博士后博士生硕士生16152062说明: 1. 高级、中级
5、、初级、博士后、博士生、硕士生人员数由申请者负责填报，总人数自动生成。说明: 2. 第一人必须是申请者，信息从前面自动读入。经费预算 (单位:万元) 科 目预算金额备注（计算依据与说明）一研究经费20.0000 1科研业务费1.0000 （1）测试/计算/分析费0.2000统计分析费0。2万（2）能源/动力费0.0000（3）会议费/差旅费0.5000国内学术会议0。5万（4）出版物/文献/信息传播事务费0.3000文献查询0。05万，文章发表费0。25万（5）其他0.00002实验材料费18.0000（1）原材料/试剂/药品购置费15.0000小鼠、饲料及培养剂费2万；目的基因载体的构建、鉴
6、定费8万；放射性同位素2万；各种酶、标准物及其他试剂3万（2）其他3.0000光镜、电镜检查费，ECT检查费2 万；克隆hNIS、测序验证费1万3仪器设备费0.0000（1）购置0.0000 （2）试制0.00004实验室改装费0.00005协作费0.00006其他0.0000二国际合作与交流费0.0000 1项目组成员出国合作交流0.00002境外专家来华合作交流0.0000三劳务费0.0000四管理费1.0000五其他0.0000 经 费 总 预 算20.0000 申 请 经 费20.0000 其他经费来源（单位：万元）自然科学基金其他项目资助经费 0.0000国家其他计划资助经费 0.0
7、000其他经费资助（含部门匹配） 0.0000合 计0.0000 国家自然科学基金项目申请书报告正文（一）立项依据与研究内容（4000-8000字）： 1、 项目的立项依据（附主要的参考文献目录）。 前列腺癌是欧美国最常见的恶性肿瘤。在美国男性肿瘤患者中，死于前列腺癌者高居第二位。前列腺癌发病率的种属差异性非常明显，我国前列腺癌发病率与欧美国家相比较低，但近年来也呈明显上升趋势，由50年代的0.2/10万人口升至90年代的1.2-3.4/10万。前列腺癌的特点是早期很难发现，我国前列腺癌患者初诊时50以上已有转移。对于超过B2期肿瘤（系肿瘤侵犯前列腺组织以外或有远处转移）患者，失去了手术根治的
8、机会，以内分泌治疗为主。内分泌疗法是其最主要、有效的姑息性疗法，但几乎所有病人将转为激素非依赖前列腺癌，且一旦转为激素非依赖前列腺癌，即对内分泌治疗不再敏感，仅能试用化疗，但化疗并不能延长病人生存期。因此，对于雄激素非依赖性前列腺癌的治疗成为前列腺癌诊治过程中亟待解决的问题。前列腺干细胞抗原（PSCA）是Reiter等于1998年用特征性差异分析的方法在人前列腺癌动物模型LAPC-4鼠中发现的一个前列腺癌相关肿瘤抗原3。因为它与干细胞抗原2（stem cell antigen 2,SCA-2）30同源而被命名为前列腺干细胞抗原。同SCA-2一样，PSCA通过GPI共价键锚定在细胞膜上，而不呈分
9、泌形式，但这种共价键可以被GPI特异性的磷脂酶(PIPLC)所断裂。PSCA基因定位于染色体8q24.2，其cDNA的开放读框为372bp，编码123个氨基酸。PSCA具有以下几个特点：（1）在前列腺的组织分布特异性高 6。(2)在大多数的前列腺癌标本中均有表达，而且在激素依赖和激素非依赖前列腺癌中同样高表达6。（3）PSCA通过GPI共价键锚定在细胞膜上，而不呈分泌形式 7、8。而其他的前列腺相关蛋白，如前列腺特异性抗原（PSA）、前列腺特异性膜抗原（PSMA）、前列腺酸性磷酸酶（PAP）、前列腺分泌蛋白94(PSP94)、前列腺癌肿瘤抗原1等，均有各自的不足。它们或为分泌型蛋白，外周血浓度
10、很高，容易诱导免疫耐受；或因其组织分布特异性不强，用来做免疫治疗的疫苗容易引起自身免疫性疾病。因此，PSCA是一个很有前景的前列腺癌基因治疗的特异性的启动子，有望成为局灶性和转移性前列腺癌治疗的新方向11。放射性同位素在治疗甲状腺癌的过程中取得了极大的成功，即使是有远处转移的进展性甲状腺癌，使用放射性碘治疗也能取得很好的疗效，10年存活期80。【1】正常和恶性的甲状腺细胞摄取同位素的能力差异是由于钠碘转运蛋白（sodium iodide symporter NIS） 的表达水平不一样。甲状腺癌细胞膜上NIS表达水平较高，可以摄取高浓度的131I，使得甲状腺癌得到组织特异性较高的放疗，对全身其它
11、组织器官影响很小。NIS已经被确认为甲状腺腺上皮膜上的一种糖蛋白，具有13个跨膜区，可以特异性的将碘转入细胞内，使得细胞内碘的浓度较血浆增高2040倍。该基因近年来已经被克隆和鉴定。【2】NIS基因的克隆鉴定为肿瘤基因治疗提供了一种全新的治疗手段，将该基因转入非甲状腺起源的肿瘤细胞内，可使131I的摄取明显增加，从而产生类似与甲状腺癌组织特异性放疗的效果。近来有研究报道使用PSA启动子引导NIS基因转染前列腺癌细胞后，可以使放射性同位素在前列腺癌组织中特异性地聚集，获得足够的放射性剂量对前列腺癌细胞产生杀伤作用，大大增强了前列腺癌的放疗强度。实验证明体外细胞培养条件下，PSA-NIS基因转染前
12、列腺癌细胞后，可以完全抑制肿瘤细胞的生长，而裸鼠前列腺癌模型在接受局部注射PSA-NIS基因表达载体后，肿瘤摄取131I的比例为总量2530，肿瘤的生长得到有效的抑制。【3】但是该治疗途径也存在组织内基因表达短暂，131I在组织内生物半衰期短等不足之处难以克服，需要进一步改进以增强其治疗效果。 本课题将以上两种方法相结合，通过基因转染的方式，先使放射性同位素131I在前列腺癌组织中特异性地聚集，获得足够的放射性剂量对前列腺癌细胞产生杀伤作用 。在肿瘤细胞坏死，肿瘤特异性抗原暴露后，进一步通过IL-2调节免疫系统，诱导肿瘤抗原特异性的CD8+ CT活化，并增强其对肿瘤细胞的杀伤作用，从而起到协同抗癌作用。本研究旨在对中晚期
