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1、CAR-T 细胞治疗产品质量控制检测研究及非临床研究考虑要点中国食品药品检定研究院2018 年 6 月 5 日目录一、引言1二、适用范围21、本技术要点适用于哪类CAR-T细胞产品？22、本技术要点包括哪些内容？23、本技术考虑要点的基本原则是什么？2三、原材料和辅料及其质量控制：31、在 CAR-T细胞产品的原材料和辅料通常都要考虑哪些因素？32、转导 / 转染 T 细胞的病毒载体 / 质粒载体是否可按照原材料管理？43、如何进行原材料和辅料的选择和风险控制？44、在载体物质或 CAR-T细胞终产品中是否需要进行原材料残留的质量检测？5四、病毒转导载体及质粒转染载体制备及质量控制：51、转导
2、 / 或转染载体制备的起始原材料包括哪些或如何定义转染载体的起始原材料？. 52、起始原材料要建立种子库系统吗？63、如何建立种子库系统？如何确定各级种子库的代次及数量？74、种子库的质量要求是什么？如何管理种子库？85、如何考虑质粒载体的生产工艺及规模？质粒载体的质量控制包括哪些？96、病毒载体的生产规模要设计多大？是否可以采用细胞培养皿进行病毒载体的培养？关键工艺研究包括哪些？病毒载体制备过程中如何降低牛血清的风险？117、是否要进行病毒载体生产终末细胞的检定？128.如何开展病毒载体中的外源因子污染的检测？129、病毒载体是否要纯化？纯化及浓缩工艺应考虑哪些因素？纯化的病毒载体如何保 存
3、？1310、纯化后的病毒载体的质量控制检测需要考虑哪些参数？1311、采用何种方法进行病毒载体的滴度测定？是否需要规定病毒载体的比活性？. 1412.采用何种方法进行 RCR/RCL检测？1413、如何考虑病毒载体工艺杂质质量控制的要求？1614、是否要开展病毒载体的稳定性研究以及如何设定稳定性评价参数？1615、转导载体是否允许外包加工？如何控制外包加工的转导载体的质量？16五、建立可提供 T 细胞的供体资质标准：171、选择 T 细胞供体的基本考虑是什么？172、细胞供体（者）应进行哪些传染性疾病因子的检测？应采用何种方法检测？183、自体细胞供体是否必须要进行传染性疾病因子筛查和检测？1
4、84、如使用可建系的细胞制备CAR-T细胞，如何评估其供体及细胞的风险？185、在临床试验过程中如何进一步开展供体资质的研究？18六、 CAR-T细胞产品的生产、质量控制研究及检测191、CAR-T细胞产品的生产工艺研究应考虑哪些因素？192、如何定义 CAR-T细胞的批次及批量？203、CAR-T细胞产品的质量控制研究及检测至少应包括哪些项目？应如何设置这些质控项目更符合 CAR-T细胞产品的特点？204、选择或建立质量控制检测方法时应考虑哪些因素？ 如何制定其每一检测项目的质量标准？215、CAR-T细胞产品如何留样更为合理？为便于质量检测及留样，是否可以将需在最终包装中检测的项目分装在非
5、最终包装容器中？256. 是否要开展 CAR-T细胞稳定性研究？25七、 CAR-T细胞的非临床研究261、非临床研究的一般原则262、CAR-T细胞产品的药效学研究283、CAR-T细胞产品的药代动力学（药代）研究294、CAR-T细胞产品的非临床安全性研究31结束语35参考文献35起草单位及起草人38参与提出意见及建议的单位38CAR-T细胞治疗产品质量控制检测研究及非临床评价考虑要点一、引言嵌合抗原受体 T 细胞（ CAR-T ，Chimeric antigen receptor T cell）是指通过基因修饰技术， 将带有特异性抗原识别结构域及T 细胞激活信号的遗传物质转入 T 细胞，
6、使 T 细胞通过直接与肿瘤细胞表面的特异性抗原相结合而激活，通过释放穿孔素、颗粒酶素 B 等直接杀伤肿瘤细胞，同时还通过释放细胞因子募集人体内源性免疫细胞杀伤肿瘤细胞， 从而达到治疗肿瘤的目的， 而且还可形成免疫记忆 T 细胞从而获得特异性的抗肿瘤长效机制。目前，CAR-T细胞对多种血液肿瘤显示了非常好的临床效果，对实体瘤治疗也表现出了非常大的潜力。2017 年美国批准了两个分别针对急性B 淋巴细胞白血病和 B 淋巴细胞瘤的 CD19-CAR-T细胞治疗产品上市， CAR-T细胞治疗已经成为肿瘤免疫治疗领域中新的国际研究热点。我国 CAR-T 研究也呈现蓬勃发展的态势，已有众多研究机构及制药公
7、司投入到了 CAR-T 细胞产品的研发中，已有多家机构递交了CAR-T细胞治疗产品的临床试验申请， CAR-T 细胞治疗领域的产业化开始在千差万别中起步。同时， 在 CAR-T细胞治疗研究热潮的背后，我们必须要看到， 尽管 CAR-T细胞治疗不断取得令人鼓舞的进展，但它还是一个新兴领域，一方面人们对CAR-T 细胞治疗的科学认识尚有许多需要解决的问题， 另一方面又有许多新的技术不断进入该领域， 且人们尚未有足够的数据评估其潜在风险。 此外细胞治疗产品又具有与其它非体内扩增药物完全不同的特点， 不仅体现在个体化、 产量小及批次有限等方面， 而且存在起始材料差异大、制备工艺不成熟、 生物学效力以及
8、安全性评价复杂等问题， 限制了 CAR-T细胞治疗产品的快速发展， 因此，如何提高 CAR-T 细胞治疗产品的安全性、 有效性、质量可控性以及产品工艺一致性是每一个研发者需要面临的问题。本技术考虑要点针对于国内 CAR-T细胞产品的研发现状， 以 CAR-T细胞产品的生产工艺及产品特性为主线， 以细胞治疗产品研究与评价技术指导原则 （试44行）为基本要求，从如何开展 CAR-T细胞产品的质量控制检测研究和非临床评价两个方面提出指导性意见，为CAR-T 细胞产品研发者提供技术参考，使我国CAR-T细胞产品领域从起步即能够按照一定的规范开展研究，为未来的产业化打好基础。同时，本技术考虑要点也会随着
9、 CAR-T细胞产品各方面研究的不断成熟而不断进行修订， 从而逐步建立更为科学合理的 CAR-T细胞产品的质量控制检测及非临床评价的要求及标准。二、适用范围1、本技术要点适用于哪类 CAR-T细胞产品？目前有多种方法用于 T 细胞修饰及 CAR-T细胞产品制备， 包括病毒载体转导（如 - 逆转录病毒载体或慢病毒载体）及非病毒载体转染（如mRNA转染、Transposons 转染等）等，虽然已开展的临床试验中以病毒载体转导的方式为主， 但以非病毒载体转染的方式也在不断得到青睐，因此，本考虑要点主要以病毒载体和非病毒质粒载体的基因修饰方式制备的CAR-T细胞治疗产品为主要对象， 但共性的部分也可为
10、其它类基因修饰方式制备的CAR-T细胞参考。2、本技术要点包括哪些内容？本技术考虑要点按照 CAR-T细胞产品的制备工艺顺序， 提出了各阶段工艺研究及质量控制的关注点及检测要求的考虑， 并提出了产品非临床评价研究需要开展的内容及所用方法， 主要包括原辅料选择、 转导基因载体或转染基因载体的制备及质量控制、细胞供体筛选及检测、 CAR-T细胞制备工艺研究、 工艺过程控制、细胞产品质量控制要求以及非临床评价研究的动物模型、有效性及安全性评价方法等，不仅提出一般要求，也对重点环节提出有针对性的考虑。3、本技术考虑要点的基本原则是什么？CAR-T细胞产品是基因治疗与细胞治疗技术的结合，一方面，它具有基
11、因治 疗可能潜在的风险， 如因存在基因整合或细胞复制的可能而带来二次肿瘤的风险，另一方面，由于 CAR-T细胞的制备是以人作为供体采集初始细胞材料才能进入工艺过程， 由于每个个体，特别是肿瘤患者， 因其初始细胞会因为肿瘤类别及所处分期、所接受过的治疗、采集样本时的身体状况或与上一次治疗的间隔时间、以及每个患者的 T 细胞的亚群的比例 等有明显的差异， 即使采用已经进行过充分验证的工艺， 仍然难以保证每个个体所制备的目的细胞都是一致的。因此，本技术考虑要点一方面要考虑产品的安全性及有效性， 另一方面更从各个工艺阶段突出一致性的要求，以最大限度的降低产品的可变性。三、原材料和辅料及其质量控制：1、
12、在 CAR-T细胞产品的原材料和辅料通常都要考虑哪些因素？生产 CAR-T 细胞产品的原材料是指其生产过程中所用的所有生物原材料和化学原材料，它们不是 CAR-T细胞产品的目标组成成份， 如培养基、 PBMC分离试剂、 T 细胞分选试剂、激活剂、细胞因子（如IL-2 、IL-7及 IL-15 ）、血清或血清替代物等。而 CAR-T细胞产品的辅料是 指其产品配方中所使用的辅助材料 , 是其细胞产品中的成份，如人血白蛋白、人血小板提取物、冻存液（如DMS）O等。一个完整 CAR-T细胞产品的制备过程包括基因载体物质的制备及CAR-T细胞终产品的制备两个大的生产环节， 同时，载体物质的制备又包括了质
13、粒载体制备和/ 或病毒载体制备工艺过程，因此，在考虑选择原材料时，不仅要考虑CAR-T 细胞产品制备过程中所用的原材料， 也要考虑基因载体物质制备过程中所用的原材料（不包括生产的起始原材料， 如细胞基质和菌毒种） ，如细菌及细胞培养基、牛血清、添加因子、转染试剂（如钙转试剂、PEI、Lipo2000 等）以及核酸酶等等。如果在 CAR-T细胞生产过程中还使用了自制的试剂和材料，还要考虑制备这些自制试剂中所用的原材料。在早期的基础研究时，研究者对原材料及辅料的关注可能不足，但由于原 材料和辅料对产品的质量及安全性均有重要影响，因此，一旦准备进入产品开发阶段，研发人员就要尽早开展原材料及辅料的评估
14、及筛选，而且在临床过程中要进一步开展相关的研究，在确证性临床前应完成充分的质量评估工作。2、转导/ 转染 T 细胞的病毒载体 / 质粒载体是否可按照原材料管理？CAR-T细胞是基因治疗的 ex vivo 方式，通过病毒载体转导或质粒载体转染， 将 CAR基因转入 T 细胞中从而获得 CAR-T细胞，虽然它们未转染的部分在后续的T 细胞扩增及洗涤过程中经验证可被去除，但其所携带的遗传物质则是CAR-T细胞的重要组成部分且是使 T 细胞具有肿瘤杀伤活性的重要基础， 这一点与生产中所用的原材料的特性完全不同，其质量对CAR-T细胞具有重要影响，因此， 转导/ 转染 T 细胞的病毒载体 / 或质粒载体按照产品的理念进行管理更为合理。但同时也还需要考虑到， 也正是因其不直接进入患者体内， 在后续的细胞扩增及 CAR-T制剂工艺中会有稀释或洗涤步骤， 因此，通过验证可证明后续工艺可以降低其残留的风险， 则可以结合工艺验证的结果制定更为合理的质量控制标准。3、如何进行原材料和辅料的选择和风险控制？在 CAR-T细胞制备过程中使用的原材料有药用级别的（如IL-2 ），也有非药用级别的（如 IL-7 ）；有的原材料在国外被批准用于药品生产但尚未在国内获得 注册，如某种 CD3/CD28磁珠；有的同一种试剂分别存在药用级别和非药用级别， 非药用级又分为 GM
