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1、实验三 回流法提取辣椒色素及其硅胶柱层析分离（湿法上柱）2016.11.1-3蓝文健：39943042；13316012791E-mail: 实验目的一. 掌握热回流溶剂提取法提取辣椒红色素的原理与操作方法。二. 掌握硅胶柱层析分离低极性化合物的操作方法。三. 了解核磁共振技术在化合物结构测定中的应用。Capsanthin辣椒红色素辣椒红色素脂肪酸酯辣椒中的色素 辣椒中含有多个颜色鲜艳的色素成分，它们很容易通过TLC或CC得到分离。其中主要的红色素是辣椒红素（Capsanthin）的脂肪酸酯。另外，更少量的色素成分还有辣椒玉红素（Capsorbin）的脂肪酸酯和-胡萝卜素(-Carotene)
2、。Capsorbin辣椒玉红素Carotene胡萝卜素实验原理辣椒红色素是含多个双键的低极性脂肪酸（酯），极易被有机溶溶剂提取，为了提高提取速度可采用热回流的方法。辣椒红色素分子极性较小，可用硅胶吸附剂进行色谱分离，柱色谱时，所用洗脱剂采用溶剂极性强度较小的有机溶剂。实验内容简介： 红辣椒经提取得到一个粗的色素混合物，然后用薄层层析（thin-layerchromatography,TLC）进行分析。在鉴定出主要成分红色素之后，再用柱层析（columnchromatography,CC）将红色素分离。经柱层析所收集的洗脱液用薄层层析进行鉴定，合并含有相同红色素的洗脱液流分，然后用核磁共振实验（
3、NMR）进行结构测定。二、实验部分红辣椒5g、石油醚、乙酸乙酯、柱层析硅胶（200300）目，回流提取装置（250mL圆底蒸馏烧瓶、球型冷凝管，旋转蒸发仪，硅胶G薄板10块，层析缸1个，250则磨囗广口瓶1个（作碘缸）25Cm30Cm层析柱1根，25mL三角瓶15个，50ml烧杯1个，长滴管2支，点样毛细管，量筒100mL、50ml各一个，双连球1个。所有玻璃器皿必须烘干，确保无水。1. 从红辣椒中提取红色素在250mL圆底蒸馏烧瓶中放入5克红辣椒，加入20-30mL乙酸乙酯，回流20分钟。待回流结束冷至室温后，倾出提取液，加入20-30mL乙酸乙酯重复回流一次，合并回流液，减压过滤除去残渣。
4、5g 辣椒250ml 圆底烧瓶20-30mL乙酸乙酯回流20min抽滤旋蒸，计算得率重复一次2. 红辣椒色素的TLC试验(1)提取物溶液配制。浸膏用石油醚溶解，转移至小三角瓶中，加盖避免溶剂挥发。(2)提取物的主要成分研究，用几种配比不同的石油醚-乙酸乙酯混合溶剂进行TLC试验，使红辣椒色素主要斑点展层后的Rf值分布在0.20.8之间，记录有色斑点个数计算各有色成分的Rf值，并根据斑点直径估算各个有色成成分的相对含量。(3）硅胶柱色谱条件选择。选择相对含量较大、易于纯化的红辣椒色素斑点作为目标成分，使目标成分展层后Rf值在0.3的展开剂配比，按此配比配制的溶液，作为柱层析的洗脱剂。2. 红辣椒
5、色素的TLC试验 准备两只磨口广口瓶作为层析槽，用不同的溶剂系统进行TLC试验，从中找出具有最佳分离效果的展开剂，并以此作为下一步的CC洗脱剂选择的根据。进行TLC试验时，注意样品的浓度要适宜，点样点要均匀。记录每一点的颜色并计算各点的Rf值。附：薄层层析的操作1. 毛细管的尖端浸入到待分析的溶液中。2把装有一小段溶液的毛细管尖端轻轻接触层析板，产生直径小于2mm的斑点，此斑点距层析板边沿应超过0.6 cm，而不到1.5 cm，如果溶液太稀，可在同一位置点样数次，以使层析板上有足够的样品量。3可用铅笔在硅胶板上下两端各画一条直线，以标记原点和展开剂前沿到达的位置。要注意每块板展开的距离都要相同
6、。样品制备画线点样展开到达上线挥干圈出斑点计算Rf值画线点样展开挥干圈斑点A APC CRf斑点中心至原点中心距离a展开剂前沿至原点中心距离cac（保留 2 位有效数字）Rf值计算3. 柱层析分离红色素 用湿法装柱（溶剂：石油醚），将分散在展开剂中的1012g硅胶（200300目），装填到配有玻璃活塞的滴定管或层析柱中（预先添加空白石油醚溶剂）。 柱填好后，将石油醚液面小心下降到层析柱硅胶上部表面。 将色素的粗混合物溶解在约0.5ml的洗脱剂中，然后将此溶液小心放至层析柱硅胶表面石英砂段内，小心将此段溶液降至层析柱硅胶表面，再用洗脱剂洗脱色素，收集每个馏分约34ml于收集瓶中（注意：当流出液颜
7、色改变时，应及时更换收集瓶，不必拘泥于每瓶的收集量），当谱带移动太慢时，应考虑适当增加洗脱剂的极性。当全部色素洗脱后，停止层析。 采用薄层层析法检测经柱层析所收集的各洗脱液中的化学成分，鉴定含有红色素的洗脱液，然后将基本上含相同色素成分的洗脱液进行合并。脱脂棉放置脱脂棉（如层析柱有石英砂段则不需要）1012g 硅胶（200300目）30ml 洗脱剂搅拌排出气泡打开活塞，使硅胶自然沉降，用同一个烧杯接洗脱剂倒入层析柱洗涤烧杯，将剩余的硅胶与洗脱剂倒入（重复2次以上）直至全部硅胶转移打开活塞，使液面下降到硅胶层表面湿法上样1.01.5ml 并用石油醚冲洗黏在壁上的色素将粗提物用石油醚溶解于0.5m
8、l的洗脱液中加液洗脱再用洗脱剂洗脱色素，收集每个馏分约34ml于收集瓶中（注意：当流出液颜色改变时，应及时更换收集瓶，不必拘泥于每瓶的收集量），当谱带移动太慢时，应考虑适当增加洗脱剂的极性。当全部色素洗脱后，停止层析。4. 产品的获得(1)合并。用薄层层析法检测各馏分中的化学成分，计算各红色素的Rf值，将样品点Rf值相同、纯度相同的馏分合并，得到含相同色素成分的产品。(2)红色素的氢核磁共振实验。将合并后的产品合并，旋干，添加氘代氯仿，测试化合物的氢谱。三. 实验报告1. 纯的色素化合物和混合物在同一块TLC的展开情况，相同比例画在实验报告。2. 纯的色素化合物的氢谱，附在实验报告，并标注氢 的类型
