14生态 赵蕴琛 实验五 硫氰酸钠对斑马鱼的急性毒性实验 2016年11月25日姓名 赵蕴琛 指导老师 肖慧 专业年级 生态学2014级 学号 14050021040题目 硫氰酸钠对斑马鱼的急性毒性实验 同组者 张子良 张婉捷 张培春 一、 实验目的：1、掌握硫氰酸钠对斑马鱼急性毒性实验方法 2、掌握如何测定硫氰酸钠对斑马鱼的LC50 3、了解硫氰酸钠对鱼类的毒性等级划分 二、 实验原理1、 斑马鱼急性毒性实验：试验鱼同时孵化，体长2-3cm，健康无病，在室内驯化饲养7-14天，待鱼苗死亡率稳定在<10% 时开始试验试验期间对照组的死亡率也应控制在<10%以下 2、 采用半静态测定方法，试验容器采用玻璃缸，盛水量以每条鱼2-3L水为宜(本实验用水18L)，pH值为6.5-8.0，冷水水温为12-18℃，温水温度为20-28℃（本实验温度为室温），一次实验中水温变化范围为±2℃，水中溶解氧不能低于4mg/L 3、 根据预试验结果在最高安全浓度与最低全致死浓度之间，按级差设5-7个组，并设空白对照，每组养10尾试验前24小时停止喂食，试验期间不喂食，染毒48-96小时，记录24、48、72、96小时时鱼的死亡率与中毒症状，及时捞出死鱼。
4、 鱼类急性毒性等级划分LC50等级<1mg/L剧毒级1-10mg/L高毒级10-100mg/L中毒级>100mg/L低毒级5、 LC50 ：动物急性毒性试验中，使受试动物半数死亡的毒物浓度三、 实验用品斑马鱼、硫氰酸钠、鱼缸、渔具、加氧泵、温度计、烧杯、量筒、分析天平、玻璃棒等四、 实验步骤1、 正式试验前将斑马鱼在与试验相同的环境条件下驯养7-14d，驯养期间斑马鱼死亡率<5%驯养时每天喂食1次，曝气充氧，正式试验前24h停止喂食 2、 设定5个给药组，浓度分别为150mg/L、300mg/L、450mg/L、600mg/L和750mg/L，并设空白对照 3、采用“半静态法”，每24h更换一次药液，每次更换三分之一，24h、48h、72h和96h定期观察并记录斑马鱼中毒症状和死亡情况，并求出其LC50值 五、 实验结果1、 求出硫氰酸钠对斑马鱼的LC50 （1） 原始数据表一：三点半组原始数据表毒物浓度（mg/L)050100200400800第一天100007第二天000042第三天001131第四天010200表二：一点半组原始数据表毒物浓度（mg/L)050100200400800第一天000007第二天001033第三天000010第四天100020（2） 死亡数统计表三：三点半组斑马鱼死亡总数与毒物浓度关系表毒物浓度（mg/L)050100200400800死亡总数1113710死亡率（%）1010103070100表四：一点班组斑马鱼死亡总数与毒物浓度关系表毒物浓度（mg/L)050100200400800死亡总数1010610死亡率（%）10010060100表五：两组数据平行斑马鱼死亡总数与毒物浓度关系表毒物浓度（mg/L)050100200400800死亡总数21231320死亡率（%）105101565100（3） 关系曲线图一：斑马鱼死亡率与硫氰酸钠浓度-反应曲线由图一可得斑马鱼死亡率与毒物浓度的关系式为：y = 0.1267x + 1.4286 R2 = 0.9465y=50时，x=383.358mg/L，即IC50=383.358mg/L。
2、 评价硫氰酸钠对斑马鱼的毒性等级因为IC50=383.358mg/L，根据鱼类急性毒性等级划分，可知硫氰酸钠对斑马鱼的毒性等级为低毒性六、 实验分析硫氰酸钠对斑马鱼其他方面的毒性影响（1）检测96h LC50急性毒性试验过程中的水质状况发现NH4+的浓度随暴露浓度的升高,表现为较明显的上升趋势因此，可认为硫氰酸钠能够加速斑马鱼体内的氮代谢水平，降低蛋白质的利用率2） 硫氰酸钠对斑马鱼乙酰胆碱酯酶(AChE)活性影响 不同硫氰酸钠浓度处理组与对照相比，AChE活性无显著差异3） 硫氰酸钠对斑马鱼Na+/K+-AT Pase的活性 71.7mg/L浓度处理组与对照相比，Na+/K+-AT Pase的活性和MDA含量存在极显著差异4）硫氰酸钠斑马鱼躯干组织MDA的含量的影响 MDA含量与硫氰酸钠染毒浓度间存在明显的剂量——效应关系因而MDA能够作为一种有效的生物标志物对硫氰酸钠引起的毒性做出评价5）NaSCN暴露对斑马鱼形态特性的影响 死亡的斑马鱼体色具体表现为:体侧的条纹颜色(黑色)有了很大程度的加深,无条纹处可看到有明显的金属光泽。