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1、Word文档微生物基本技术操作要求！一、无菌操作要求 微生物试验室工作人员，必需有严格的无菌观念，很多试验要求在无菌的条件下进行，主要缘由，一是防止试验操作中人为污染样品，二是保证工作人员平安，防止检出的致病菌由于操作不当造成个人污染。要求如下： 1.1接种细菌时必需穿工作服、带工作帽； 1.2进行接种食品样品时，必需穿专用的工作服、帽及拖鞋，应放在无菌室缓冲间，工作前经紫外线消毒后使用； 1.3接种食品样品时，应在进无菌室前用肥皂洗手，然后用酒精棉球将手擦洁净； 1.4进行接种所用的吸管、平皿及培育基等必需经消毒灭菌，打开包装未使用完的器皿，不能放置后再使用，金属用具应高压灭菌或用酒精点燃烧
2、灼三次后使用； 1.5从包装中取出吸管时，吸管尖部不能触及试管或平皿边； 1.6接种样品、转种细菌必需在酒精灯前操作，接种细菌活样品时，吸管从包装中取出后及打开试管塞都要通过火焰消毒； 1.7接种环和针在接种细菌前应经火焰烧灼全部金属丝，必要时还要烧到针和环与杆的连接处，接种结核菌和烈性菌的接种环应在沸水中煮沸5min，再经火焰烧灼； 1.8吸管吸取菌液或样品时，应用相应的橡皮头吸取，不得直接用口吸。 二、无菌间使用要求 2.1 无菌间应密封，不得随便打开，并设有与无菌间大小相应的缓冲间及门，另尽量设有的小窗，以备进入无菌间后传递物品。 2.2无菌间应保持清洁，工作后用煤酚皂液溶液消毒，擦拭工
3、作台面，不得存放与试验无关的物品； 2.3无菌间使用前后应将门关紧，打开紫外灯，如采纳室内悬掉紫外灯消毒时，需30W紫外灯，距离工作台1m处，照耀时间不少于30分钟，使用紫外灯，应留意不得直接在紫外线下操作，以免引起损伤，灯管每隔两周需用酒精球轻轻擦拭，除去上面的灰尘和油垢，以削减紫外线穿透的影响； 2.4处理和接种食品标本时，进入无菌间操作，不得随便出入，如需要传递物品，可通过小窗传递； 2.5在无菌间需用安装空调时，则应有过滤装置。 三、消毒灭菌要求 微生物检测用的玻璃器皿、金属用具及培育基、被污染和接种的培育物等，必需经灭菌后方能使用。 3.1灭菌前预备 3.1.1全部需经灭菌的物品首先
4、要清洗晾干，玻璃器皿如吸管、平皿用纸包装严密，如用金属筒应将上面气孔打开。 3.1.2装培育基的三角瓶塞好棉塞，用纸包好，试管盖好盖，注射器须将管芯抽出，用纱布包好。 3.2装放 3.2.1大型高压蒸气锅：放置灭菌物品不应超过锅内容积的80%，物品应放置锅内搁架上或铁丝筐中。 3.2.2手提式高压锅：将物品分别包扎好，直接放入消毒筒内，物品之间不能过挤。 3.3设备检查 3.3.1检查门的开关是否敏捷，橡皮圈有无损坏，是否平整。 3.3.2压力表蒸气排尽时是否停留在零位，关好门和盖，通蒸气或加热后，观看是否漏气，压力表与温度计所标示的状况是否吻合，管道有无堵塞。 3.3.3对有自动电子程序掌握
5、装置的灭菌器，使用前应检查规定的程序，是否符合于进行灭菌处理的要求。 3.4灭菌处理 手提式高压锅或立式压力蒸气灭菌器的使用应按下列步骤进行： 3.4.1手提式高压锅在主体内加入3L清水，立式高压锅加水16L（重复使用时应将水量补足，水变混浊需要更换）。 3.4.2手提式压力锅将顶盖上的排气管插入消毒桶内壁的方管中（无软管或软管锈蚀裂开的灭菌器不得使用）。 3.4.3盖好顶盖拧紧，勿使漏气；置灭菌器于火源上加热，立式压力锅通上电源，并打开顶盖上的排气阀放出冷气（水沸腾后排气1015min）。 3.4.4关闭排气阀，使蒸气压上升到规定要求，并维持规定时间（按灭菌物品性质与有关状况而定）。 3.4
6、.5达到规定时间后，对需干燥的物品，马上打开排气阀排出蒸汽，待压力恢复到零时，自然冷却至60后开盖取物，如为液体物品，不要打开排气阀，而应马上将锅去除热源，待自然冷却，压力恢复至零，温度降到60以下再打开盖取物，以防止突然减压液体猛烈沸腾活容器爆破。 3.5灭菌温度与时间 3.5.1压力蒸气灭菌锅灭菌温度与时间见下表： 3.5.3取出的物品掉落在地或误放不洁之处，或沾有水液，均视为受到污染，不行作为无菌物品使用。3.5.2灭菌处理：灭菌后物品，剂等，应检查是否符合达到灭菌后的色泽或状态，未达到者应废弃。 3.5.4取出的合格灭菌物品，应存放于贮藏室或防尘柜内，严禁与未灭菌物品混放。 3.5.5
7、凡属合格物品，应标有灭菌日期及有效期限。 3.5.6每批灭菌处理完成后，记录灭菌品名、数量、温度、时间、操。 四、有毒有菌污物处理要求 微生物试验室所用试验器材、培育物等未经消毒处理，一律不得带出试验室。 4.1经培育的污染材料及废弃物应放在严密的容器或铁丝筐内，并集中存放在指定地点，待统一进行高压灭菌。 4.2经微生物污染的培育物，必需经121，30min高压灭菌。 4.3染菌后的吸管，使用后放入5%煤酚皂溶液或石炭酸溶液中，最少浸泡24小时，再经121，30min高压灭菌。 4.4涂片染色冲洗片的液体，一般可直接冲入下水道，染色的玻片放入5%煤酚皂液中浸泡24h后，煮沸洗涤。做凝集试验用的
8、玻片或平皿，必需经高压灭菌后洗涤。 4.5打碎的培育物，马上用5%煤酚皂液或石炭酸喷洒和浸泡被污染部位，浸泡半小时后再擦拭洁净。 4.6污染的工作服或进行烈性菌试验所穿的工作服、帽、口罩等，应放入专用消毒袋内，经高压灭菌后方能洗涤。 五、玻璃器皿的清洗要求 5.1目的 为了保证微生物试验顺当进行，保证明验结果的精确性，不影响试验进度，必需把器皿彻底清洗洁净。 5.2留意事项 5.2.1任何洗涤方法，都不应对玻璃器皿有所损伤，不能用有腐蚀作用的化学药剂，也不能使用比玻璃器皿硬度大的物品来擦拭玻璃器皿。 5.2.2一般新的玻璃器皿用2%的盐酸液浸泡数小时，后用水冲洗洁净。 5.2.3用过的器皿应马
9、上洗涤，放置太久会增加洗涤困难。 5.2.4强酸、强碱及其它氧化物和有挥发性的有毒物品，都不能倒在洗涤槽内，以免污染环境水质，必需倒在废水缸中。 5.2.5含有对人体有传染性病菌的器具，应先煮沸灭菌后再进行洗涤。 5.2.6难洗涤的器皿不要与易洗涤的器皿放在一起，以免增加洗涤的麻烦。有油的器皿不要与无油的器皿混在一起，否则使原来无油的器皿沾上了油垢，铺张药剂和时间。 5.3洗涤剂的种类： 水、洗衣粉、柠檬洗涤剂、肥皂 5.4洗涤方法 5.4.1含有琼脂培育基的玻璃器皿的洗涤方法：事先应将器皿中的琼脂刮去，然后用清水洗涤，并用试管刷刷其瓶壁，以除去粘污在壁上的灰尘和油垢。用洗衣粉水洗去油污，然后
10、用自来水冲洗。洗好后的器皿应倒置晾干或置于干燥箱中干燥至无水滴。 5.4.2载玻片及盖玻片的洗涤法：新载玻片及盖玻片先在20%的盐酸溶液中浸一小时，然后用自来水冲洗23次，最终用蒸馏水换洗23次。用过的载玻片及盖玻片，应用纸擦去油垢，再放在5%的洗衣粉水中煮30分钟后马上用自来水冲洗，然后放在稀的洗液中浸泡2小时，再用自来水冲洗至中性。 5.4.3移液管、倒管的洗涤方法：新的移液管及倒管先在的盐酸溶液中浸一小时，然后用自来水冲洗几次，最终用蒸馏水换洗几次。用过的移液管、倒管先用自来水洗去表面的残液，再放在洗衣粉水中浸泡一小时以上，再用自来水冲洗至管内壁无残渣，最终用蒸馏水换洗次，晾干后入恒温干
11、燥箱中烘干。 六、培育基、无菌水的制备 6.1基本原理 培育基的种类许多，不同微生物所需要的培育基不同。培育基制成后的物理状态可分为液体、固体、半固体三种类型。 6.2器材 三角瓶、试管、烧杯、玻棒、天平、搪瓷杯、量筒、铝箔纸、角匙、杜氏小管、硅胶塞、电炉 6.3培育基的种类 养分琼脂培育基、乳糖胆盐发酵培育基、乳糖发酵培育基、伊红美兰琼脂培育基、马铃薯-葡萄糖琼脂培育基(附加抗菌素)、平板计数琼脂、月桂基硫酸盐胰蛋白冻肉汤、煌绿乳糖胆盐肉汤、EC肉汤、高盐察氏琼脂、三糖铁琼脂等 6.4方法步骤 6.4.1培育基的制备： 6.4.2称量：依据培育基的配方，称取适量药品于搪瓷杯中； 6.4.3溶
12、解：用量筒量取所需水量，置电炉上加热，一边搅拌，至完全溶解，加热至沸腾，拔掉电源，待冷却； 6.4.4分装：依据不同需要，马上趁热分装入三角瓶或试管中，分装三角瓶以不超过三角瓶一半为宜，分装试管一般为管长的1/5（需依据试管的大小而定）。液体培育基如乳糖胆盐发酵培育基约分装10毫升左右。 6.4.5塞硅胶塞：装好培育基的试管应塞上硅胶塞，松紧合适，紧贴管壁，不留缝隙，约1/2塞入内，这样即可过滤空气，避开杂菌侵入，又可减缓培育基水分的蒸发。 6.4.6包装：三角瓶棉塞头部应用锡箔纸包扎，试管集中于试管篓。 6.5无菌水的制备： 6.5.1用10ml移液管量取9.2ml蒸馏水（稀释水）装入试管中
13、。 6.5.2用100ml量筒量取95ml蒸馏水（稀释水）装入150ml的三角瓶中。可置少许玻璃珠于三角瓶内，防止暴沸。 6.5.3量取240ml蒸馏水（稀释水）于250ml的三角瓶中，塞上瓶塞用牛皮纸包扎好，高压灭菌备用。 七、设备使用原则 7.1试验设备的使用由试验员严格根据操作说明书进行，其他人员不得随便操作。 7.2试验设备的日常维护保养由试验员依据设备操作说明书进行，消失不行排解的故障时，经部门总经理批准，商请专业人员修理。 7.3试验设备应定期进行计量检测，确保仪器的精确性。 7.4试验员应爱惜仪器设备，使用前应检查，使用后应准时清理清洁，并定期维护保养，下班前应检查设备电源是否关闭。 10
